国家自然科学基金(30660140)
- 作品数：7 被引量：15H指数：3
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- 水牛伊氏锥虫病免疫胶体金试纸条的研制及初步应用
- 为建立一种快速、简便、灵敏、适应现场应用的水牛伊氏锥虫病检测方法,采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记纯化的抗伊氏锥虫VSG抗原的OB6单克隆抗体,在硝酸纤维素膜上涂加纯化的抗伊氏锥虫VSG抗原的TB7单克隆抗体和兔...
- 孟盟曹池陈汉忠刘明如王华俊奉彬陈国宝
- 关键词：伊氏锥虫病单克隆抗体胶体金试纸条
- 文献传递
- 抗大片吸虫分泌排泄抗原单克隆抗体制备及其生物学特性鉴定被引量：3
- 2012年
- 【目的】制备大片吸虫分泌排泄抗原单克隆抗体,为大片吸虫病的免疫诊断、防治等研究奠定基础。【方法】利用杂交瘤技术,以大片吸虫分泌排泄抗原为免疫原制备单克隆抗体,并用ELISA、硫氰酸盐洗脱法等方法鉴定其生物学特性。【结果】通过间接ELISA筛选及3次亚克隆后,共获得5株大片吸虫分泌排泄抗原单克隆抗体杂交瘤细胞株,分别命名为6D3、6B4、7D2、7D1和7D4。经鉴定,发现5株杂交瘤细胞染色体数为90～110条,均大于亲本细胞,其亚类鉴定分别属于IgG2b、IgM、IgM、IgG1和IgM,其轻链均为κ型;5株单克隆抗体(6D3、6B4、7D2、7D1、7D4)的上清效价分别为1:400、1:3200、1:25600、1:6400和1:6400,腹水效价分别为1:104、1:104、1:105、1:107和1:106;而表位测定结果表明,5株单克隆抗体中,6D3与7D1、7D2以及7D4与7D1、7D2作用于不同表位,6D3与6B4可能识别同一表位或重叠表位,或同一表位有空间位阻,7D4与6D3以及6B4与7D4、7D1、7D2可能具有空间位阻;5株单克隆抗体的相对亲和力为:6B4>7D4>7D1>6D3>7D2;5株杂交瘤细胞株均能稳定地分泌单克隆抗体。【结论】制备获得的分泌排泄抗原单克隆抗体可用于大片吸虫病的诊断和免疫机理等方面的进一步研究。
- 李晓栩王华俊林贤陈汉忠曹池唐大运孟盟刘明如
- 关键词：大片吸虫分泌排泄抗原单克隆抗体生物学特性
- 水牛伊氏锥虫间接ELISA检测方法的建立被引量：1
- 2009年
- 利用伊氏锥虫的优势变异型虫体作为可溶性抗原,通过试验研究和条件优化,建立了一种水牛伊氏锥虫间接ELISA方法。测试结果表明,该法灵敏度高,特异性强,对实验感染样本的检测获得了较好的效果,为一种有效的ELIAS方法,为广西水牛伊氏锥虫病的诊断奠定了技术基础。
- 何木荣曾小飞陈汉忠李晓栩唐大运白波吴桂贤
- 关键词：伊氏锥虫水牛酶联免疫吸附试验
- 水牛伊氏锥虫人工感染抗体规律及其广西地区自然感染状况的初步调查被引量：2
- 2009年
- 通过实验感染,研究伊氏锥虫在水牛体内抗体及虫体消长的规律。ELISA检测结果表明,水牛感染伊氏锥虫后第6d检出抗体,而且在2个多月的监测时间里,抗体都维持在较高水平(OD450nm>0.3),因此可利用ELISA方法对水牛感染伊氏锥虫进行早期诊断和监测;水牛感染伊氏锥虫后,即出现一个2～3周左右的虫血症峰期,然后虫血症峰期迅速下降,在虫血症峰期下降后1个多月的监测时间里,虫血症维持在一个很低的水平(≤1条虫体/视野),水牛感染伊氏锥虫后这种峰期短无明显症状、虫血症水平低的现象,给临床诊断和血液镜检虫体造成了一定的困难。对广西部分地区79份血清样品水牛检测的结果表明,伊氏锥虫抗体阳性率达到29.1%,说明广西各地水牛感染伊氏锥虫的现象普遍存在,而且感染率比较高,为了保证本地区水牛产业的健康发展,有必要对水牛伊氏锥虫感染进行有效的监测。
- 何木荣施开创陈汉忠杨兴胜白波王柏生
- 关键词：伊氏锥虫抗体水牛
- 伊氏锥虫变异表面糖蛋白抗原双抗体夹心ELISA检测方法的建立及初步应用被引量：1
- 2014年
- 试验旨在建立一种能鉴定水牛临床感染伊氏锥虫的方法。试验以纯化的伊氏锥虫3D7腹水单抗作为包被抗体,HRP标记的伊氏锥虫5B9单抗作为第2抗体,建立了检测伊氏锥虫变异表面糖蛋白(variant surface glucoprotein,VSG)抗原的双抗体夹心ELISA方法,并进行了灵敏度、特异性试验及初步检测应用试验。结果显示,用该法检测阳性血清,1∶3200稀释时其D450nm值仍大于阴阳临界值;交叉反应试验结果显示,其不与泰勒虫、弓形虫、衣原体、大片吸虫等抗原发生交叉反应,表明该法具有良好的检测特异性;用该法检测了当地82份水牛血清,阳性率为9.76%。结果表明本研究建立的伊氏锥虫VSG抗原双抗体夹心ELISA方法检测灵敏度高、特异性好,能作为检测水牛临床感染伊氏锥虫的有效方法,对于临床伊氏锥虫病的诊断和防控具有重要意义。
- 张雅岭王凯陈芳玲曾晓飞吴文德黄甜李雪朱丙伦陈汉忠
- 关键词：双抗体夹心ELISA
- 水牛伊氏锥虫病免疫胶体金试纸条的研制及初步应用被引量：6
- 2011年
- 为建立一种快速、简便、适应现场应用的水牛伊氏锥虫病诊断方法,采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记纯化的抗伊氏锥虫VSG抗原的OB6单克隆抗体,在硝酸纤维素膜上包被纯化的抗伊氏锥虫VSG抗原的TB7单克隆抗体和兔抗小鼠IgG,作为检测带和质控带,然后优化条件,研制成检测伊氏锥虫病的免疫胶体金试纸条。通过交叉试验表明该试纸条与衣原体、弓形虫、旋毛虫、巴贝斯焦虫和大片吸虫无交叉反应。该试纸条最低可以检出1∶3 200倍稀释的伊氏锥虫VSG抗原(浓度为3.11mg.mL-1)。应用该试纸条对230份水牛血清样本进行初步检测,同时用ELISA做平行试验,阳性符合率为88.2%。结果证明该试纸条是一种快速、灵敏、特异的水牛伊氏锥虫病的检测方法,为水牛伊氏锥虫病的现场检测诊断和预控提供了有效的方法。
- 孟盟曹池陈汉忠刘明如王华俊奉彬陈国宝
- 关键词：伊氏锥虫病单克隆抗体胶体金试纸条
- 伊氏锥虫抗原变异型及其优势代表变异体的分离鉴定被引量：4
- 2008年
- 以连续克隆分离的方法,从1株水牛伊氏锥虫中分离到40个克隆群体,从中分离鉴定出18个抗原变异型。经间接免疫荧光试验检测,发现其中2个抗原变异型(即HbTat1.18和HbTat1.15)分别能与约80%和60%克隆群体的血清发生较强的阳性反应,初步确定这2个抗原变异型为该虫株的优势代表变异体。这为伊氏锥虫免疫预防、免疫诊断、分子诊断以及遗传进化等的研究奠定了良好的基础。
- 何木荣王祥生陈汉忠曾小飞李晓栩张居作
- 关键词：伊氏锥虫抗原变异型
- 抗水牛伊氏锥虫变异表面糖蛋白抗原单克隆抗体的研制被引量：2
- 2009年
- 用纯化的伊氏锥虫变异表面糖蛋白(variant surface glucoprotein,VSG)免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,经过3次克隆和间接ELISA方法筛选,获得3D7、5B9 2株稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株,用间接ELISA方法检测杂交瘤细胞培养液上清效价和小鼠腹水效价,其中细胞培养上清效价分别为1∶6400和1∶12800,腹水效价分别为1∶105和1∶106。单抗的亚型鉴定结果表明,3D7、5B9分泌的抗体都为IgG1亚类κ链。
- 曾晓飞陈汉忠韦英益何木荣李晓栩
- 关键词：伊氏锥虫单克隆抗体
