国家自然科学基金(3030046)
- 作品数：5 被引量：13H指数：2
- 相关作者：石奕武胡维新罗赛群王瑶王冰更多>>
- 相关机构：广州医学院第二附属医院中南大学北京中医药大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家基础科学人才培养基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 多发性骨髓瘤负性相关基因DAZAP2蛋白高效表达和纯化被引量：1
- 2005年
- 目的在前期的研究中,DAZAP2基因在多发性骨髓瘤(Multiple myeloma,MM)患者中表达明显下调,可能为MM的负性基因.须进一步获得DAZAP2蛋白,制备抗体,从而在蛋白水平上研究DAZAP2的表达、结构和功能.方法将原核重组质粒pQE30-DAZAP2转化大肠杆菌,阳性菌株经1 mmol/L IPTG诱导表达目的蛋白,再经过纯化和透析.结果IPTG诱导4 hr时,得到大量重组目的蛋白,占可溶蛋白的20%左右,经过Ni-NTA层析柱纯化,获得分子量为17kD的DAZAP2蛋白浓度为0.97 mg/ml.结论DAZAP2蛋白获得高效表达,并且建立快速简便的纯化方法,目的蛋白可以用于下一步的实验.
- 石奕武陈琼华罗赛群胡维新
- 关键词：多发性骨髓瘤纯化
- 多发性骨髓瘤负性相关基因DAZAP2的真核表达及定位
- 2006年
- 目的构建无精症相关蛋白2(DAZAP2)真核表达重组载体,对基因进行细胞定位。方法提取1例正常人骨髓单个核细胞总RNA,以逆转录产物作为模板,PCR扩增DAZAP2的开放阅读框(ORF)。采用定向克隆法与真核表达载体pEGFP-N1连接,转染大肠杆菌DH5α,经双酶切及测序证实。脂质体法转染COS7细胞后,运用Western印迹及免疫定位技术检测表达产物。结果测序证实真核表达重组质粒的阅读框没有发生改变,转染重组质粒的细胞表达融合蛋白DAZAP2-EGFP,主要在COS7细胞质中表达。结论成功获得了DAZAP2真核表达重组质粒并有效地表达重组融合蛋白,DAZAP2主要定位在细胞质中的泡状分泌结构上。
- 石奕武陈盛强胡维新
- 关键词：真核表达
- 多发性骨髓瘤负性相关基因DAZAP2表达载体的构建
- 2006年
- 目的:构建DAZAP2原核表达重组质粒,以获得DAZAP2蛋白用于制备抗DAZAP2抗体。方法:提取一正常人骨髓总RNA,逆转录后,以其作为模板,PCR扩增DAZAP2的开放阅读框,采用定向克隆法与原核表达载体连接,转染大肠杆菌,酶切及测序分析。结果:获得阳性重组质粒,读框没有发生改变。结论:成功获得DAZAP2的原核表达重组质粒,可以用于下一步实验。
- 石奕武胡维新
- 关键词：多发性骨髓瘤原核表达载体
- 清开灵注射液对大鼠脑缺血再灌注损伤过程中转化生长因子-β1表达的影响被引量：6
- 2008年
- 目的:探讨清开灵注射液对大鼠脑缺血再灌注损伤过程中转化生长因子-β1(TGF-β1)表达的影响。方法:雄性Wistar大鼠,随机分成正常组、模型组及清开灵注射液治疗组。反复夹闭双侧颈总动脉复制脑缺血再灌注损伤模型。利用免疫组织化学方法在缺血再灌注不同时间点分别检测脑组织中GFAP及TGF-β1的含量。结果:大鼠脑缺血再灌注损伤不同时间点脑组织中GFAP及TGF-β1的表达有不同程度增加,而清开灵注射液可不同程度地降低GFAP及TGF-β1的表达。结论:清开灵注射液可能通过抑制星形胶质细胞活性而降低TGF-β1的表达。
- 潘彦舒王瑶王冰李澎涛
- 关键词：脑缺血再灌注损伤转化生长因子-Β1清开灵注射液星形胶质细胞
- 5′和3′末端快速扩增法克隆多发性骨髓瘤负性相关基因DAZAP2被引量：6
- 2006年
- 目的在多发性骨髓瘤患者中KIAA0058基因序列表达明显下调,从正常人骨髓单个核细胞中克隆该序列全长cDNA,以期更好地研究该序列结构,获得其功能信息。方法采用末端快速扩增法(RACE),进行多轮RT-PCR后,对PCR产物进行测序、拼接、证实,与NCBI核酸数据库进行比对。结果该序列全长cDNA长度为1913bp,登陆号为AY430097,与来源于人睾丸cDNA文库的序列DAZAP2同源性高达99%以上。该序列具有较短的5′非翻译区及长的3′非翻译区,开放阅读框序列从第84位碱基至590位碱基,具有poly(A)尾。结论利用RACE法,从骨髓单个核细胞中成功克隆了DAZAP2全长cDNA。
- 石奕武罗赛群胡维新
- 关键词：多发性骨髓瘤骨髓单个核细胞
