浙江省教育厅科研计划项目(20070909)
- 作品数：2 被引量：2H指数：1
- 相关作者：吕建新刘丹慧韩姗姗文杰曲业敏更多>>
- 相关机构：温州医学院更多>>
- 发文基金：浙江省自然科学基金浙江省教育厅科研计划浙江省公益性技术应用研究计划项目更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 几个能量代谢相关蛋白在HeLa细胞自噬过程中表达下调被引量：1
- 2011年
- 自噬是真核细胞中的一种保守的代谢信号通路。人们已经知道自噬与肿瘤发生等疾病密切相关,但对于自噬的分子机制仍然不是很清楚。鉴定更多的自噬相关蛋白对于进一步阐明自噬的分子机制具有重要意义。该研究使用饥饿法处理HeLa细胞,通过电镜观察以及检测自噬标记蛋白LC3-I的转换,证实HeLa细胞发生了明显的自噬。之后,使用双向电泳结合串联质谱分析鉴定细胞自噬时发生变化的蛋白质。结果发现果糖二磷酸醛缩酶A、GAPDH和ATP合成酶O亚基的量在HeLa细胞发生自噬后明显降低。实时定量PCR结果证明饥饿诱导后,这三种蛋白的mRNA水平都发生了明显的下降。使用自噬抑制剂3-Methyladenine预处理HeLa细胞后再行饥饿,三种蛋白mRNA的表达水平与正常细胞相当而明显高于饥饿诱导的细胞。结果表明这三种蛋白在饥饿诱导的自噬中表达下调,其分子机制还有待进一步研究。
- 刘丹慧韩姗姗李潞云曲业敏林虹文杰吕建新
- 关键词：饥饿双向电泳差异蛋白
- 二次蔗糖密度梯度离心纯化线粒体被引量：1
- 2013年
- 该研究以小鼠肝组织和脑组织为原材料,对常规的差速离心法结合密度梯度离心纯化线粒体的方法进行改进,发现在常规操作步骤上增加一次非线性蔗糖密度梯度离心可以有效地提高线粒体纯度。透射电镜及免疫印迹鉴定结果显示,增加一次密度梯度离心后,线粒体纯度大大提高,而对线粒体得率影响有限。虽然这样延长了实验时间,但线粒体膜电位及琥珀酸脱氢酶比活实验证实,在线粒体纯度获得提高的同时,其活力并没有受到明显影响。因此,建议在进行线粒体蛋白质组检测等对线粒体纯度有较高要求的实验时,可以增加一次或者二次非线性蔗糖密度梯度离心,在维持线粒体活力的同时,提高其纯度,有利于后续实验的开展。
- 周望展黄君况凌云周晓静郭能能吕建新刘丹慧
- 关键词：透射电子显微镜
