国家自然科学基金(39600146)
- 作品数：8 被引量：16H指数：3
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- 锤头型核酶特异性阻断雄激素受体表达对前列腺癌细胞生长的影响被引量：4
- 2003年
- 目的 探讨核酶阻断雄激素受体 (AR )基因表达治疗前列腺癌的可能性。方法 在脂质体介导下 ,锤头型抗雄激素受体核酶表达载体转染前列腺癌细胞 ,采用逆转录 聚合酶链反应(RT PCR)检测ARmRNA ,四甲基偶氮唑盐 (MTT)法检测细胞增殖活性 ,流式细胞仪 (FCM )检测细胞周期时相 ,原位末端转移酶标记法检测细胞凋亡。结果 核酶表达载体转染 1～ 5d后 ,前列腺癌细胞ARmRNA水平降低 32 .6 %～ 40 .7% (P <0 .0 5 ) ,细胞生长抑制率 18.2 8%～ 35 .34%(P <0 .0 5 ) ,细胞周期阻滞于G2 M期 ,诱导细胞凋亡 ,细胞凋亡比率增加 2 0 .70 % (P <0 .0 1)。结论 应用核酶特异性切割ARmRNA ,能有效阻断AR基因的表达 ,诱导前列腺癌细胞凋亡 ,有可能成为前列腺癌基因治疗的有效方法之一。
- 赵军童强松陈朝晖曾甫清鲁功成黄震
- 关键词：核酶雄激素受体基因表达前列腺癌
- AG-490诱导人前列腺癌细胞凋亡的研究被引量：1
- 2004年
- 目的 研究抑制Januskinase signaltransducerandactivator (JAK STAT)途径的磷酸化 ,诱导前列腺癌细胞凋亡的效应。方法 不同浓度的JAK2磷酸化抑制剂AG 4 90处理人前列腺癌PC 3M细胞 ,MTT比色法和流式细胞术检测半数细胞生长抑制剂量 (IC50 )和细胞凋亡率 ,透射电镜和TUNEL法观察凋亡形态。结果 AG 4 90能够抑制PC 3M细胞增殖并表现为剂量依赖性 ,4 8h的IC50 为 5 6 8μmol/L ;用AG 4 90处理PC 3M细胞后可观察到典型的细胞凋亡形态。结论 JAK STAT途径磷酸化在支持PC 3M细胞增殖过程中起重要作用 ,AG 4 90能够有效抑制前列腺癌PC 3M细胞增殖并促进其凋亡。
- 陈朝晖赵军肖亚军杜茂信肖传国
- 关键词：前列腺癌细胞凋亡肿瘤雄激素
- 雄激素受体异常激活与激素非依赖性前列腺癌的形成机制被引量：4
- 2004年
- 前列腺癌进展的晚期常转变为激素非依赖性 ,包括雄激素受体拮抗剂在内的多种细胞外因子能够刺激其增殖。雄激素受体基因突变、多种途径引起的异常磷酸化激活和共激活物的调节失控等是激素非依赖性前列腺癌形成的主要促成因素。以雄激素受体为靶标可能成为晚期前列腺癌的有效治疗途径。
- 陈朝晖肖传国
- 关键词：雄激素受体基因激素非依赖性前列腺癌细胞外晚期前列腺癌磷酸化
- 锤头状核酶对短片段雄激素受体mRNA的体外切割作用被引量：1
- 2003年
- 目的 研究锤头状核酶对雄激素受体 (AR)mRNA片段的体外切割活性 ,探讨抗雄激素基因治疗的新途径。方法 计算机模拟ARmRNA片段二级结构 ,选择第 10 18位GUC为核酶切割位点 ,设计特异性切割AR的锤头状核酶 (RZ) ,合成含T7启动子的核酶和底物模板链 ,体外转录RNA ,37℃条件下行核酶体外切割反应。结果 核酶在体外 37℃反应 1h ,可将 98%的底物RNA ( 2 5 5nt)切割为 16 8nt和 87nt2个片段。结论 特异性切割AR的锤头状核酶在体外对底物RNA有良好的切割活性 ,为应用核酶阻断雄激素受体基因表达奠定了基础。
- 赵军童强松邢毅飞曾甫清鲁功成黄震
- 关键词：锤头状核酶MRNA体外切割基因治疗前列腺疾病
- 反义寡核苷酸阻断雄激素受体表达对前列腺癌细胞生长活性的影响被引量：6
- 2003年
- 目的 探讨反义技术阻断雄激素受体 (AR)基因表达对前列腺癌细胞生长的影响。 方法 设计、合成针对AR基因反义寡核苷酸 (ASODN) ,在脂质体介导下转染前列腺癌细胞。采用RT PCR方法检测AR基因表达 ;MTT比色法检测细胞增殖活性 ;透射电镜、TUNEL检测细胞凋亡 ;流式细胞术分析细胞周期时相。 结果 0 .5～ 2 .0 μmol LASODN作用 12～ 36h ,癌细胞ARmRNA水平降低 10 .45 %～ 82 .10 %(P <0 .0 5 ) ,细胞增殖活性抑制 11.8%～ 5 6 .9%(P <0 .0 5 ) ,细胞周期阻滞于G2 M期 ,部分细胞呈现典型凋亡形态学改变 ,凋亡比率为 34.2 5 %(P <0 .0 1)。 结论 应用ASODN封闭AR基因表达能抑制前列腺癌细胞体外生长活性 ,有望成为前列腺癌基因治疗的有效策略。
- 赵军童强松郑丽端曾甫清鲁功成
- 关键词：反义寡核苷酸前列腺癌细胞生长活性
- 外源性p27kip1基因转染诱导前列腺癌细胞凋亡的实验研究
- 2003年
- 目的 探索前列腺癌基因治疗的新途径。方法 用脂质体介导 p2 7kip1基因转染前列腺癌 PC- 3 M细胞 ,SABC免疫组化法检测癌细胞外源性 p2 7kip1基因表达 ;MTT比色分析检测癌细胞体外生长活性 ;流式细胞仪 ( FCM)分析细胞周期改变 ;DNA L adder、吖啶橙 -溴化乙啶荧光染色法检测细胞凋亡。结果 发现外源性 p2 7kip1基因转移后 ,前列腺癌细胞 p2 7kip1蛋白水平显著增强 ( P<0 .0 1) ,体外生长抑制 12 .2 4%～ 3 6.5 2 % ( P<0 .0 1) ,出现 G0 / G1 期细胞周期阻滞及凋亡性“亚 G1期”峰 ,电泳可见典型的“梯状”条带 ,凋亡比率为 18.5 % ( P<0 .0 1)。结论 转染外源性p2 7kip1基因能增强对细胞周期的负性调节 ,显著诱导前列腺癌细胞凋亡 。
- 童强松郑丽端曾甫清赵军鲁功成
- 关键词：前列腺癌基因转染细胞凋亡
- MAPK途径磷酸化激活人前列腺癌雄激素受体的研究
- 2007年
- 目的研究粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）激活人激素非依赖性前列腺癌PC-3M细胞雄激素受体及其可能的信号转导途径。方法将人雄激素受体和雄激素受体激活报告基因氯霉素乙酰转移酶（CAT）转染至人雄激素非依赖性前列腺癌细胞株PC-3M,不同浓度的GM- CSF以及特异性Erk1／2磷酸化阻断剂PD98059作用后检测雄激素受体报告基因CAT表达量的变化和促分裂素原活化蛋白激酶（MAPK）途径：Erk1／2分子磷酸化的改变。结果20～100 nmol／L的GM-CSF均能激活PC-3M细胞的外源性雄激素受体,CAT的相应表达量为（0．58±0．16）～（3．80±0．89）ng／mg,CAT表达量与培养基中的GM-CSF浓度成正相关;同时检测到PC-3M细胞中Erk1／2分子磷酸化程度与培养基中的GM-CSF浓度相关,在终浓度50 mmol／L的PD98059阻断Erk1／2分子磷酸化后CAT表达量显著下降。结论GM-CSF能独立激活前列腺癌PC-3M细胞中的雄激素受体,Erk1／2分子磷酸化可能是GM-CSF旁路激活人前列腺癌细胞雄激素受体的机制。
- 陈朝晖王华芳赵军肖亚军肖传国
- 关键词：粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子前列腺肿瘤雄激素受体ERK1/2
- 锤头状核酶阻断雄激素受体基因表达的研究被引量：1
- 2002年
- 目的 探讨核酶 (RZ)在细胞水平调节雄激素受体 (AR)基因表达的作用。方法 设计并合成针对AR的锤头状核酶序列 ,分子克隆技术构建活性核酶和无活性核酶表达载体 ,脂质体介导下转染雄激素受体表达阳性细胞株T47D。转染第 1～ 3天 ,应用免疫组织化学和逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)技术检测细胞内AR基因表达水平。结果 AR活性核酶表达载体转染后 ,T47D细胞ARmRNA水平降低 2 2 .4%～ 50 .7% (P <0 .0 5) ,AR蛋白阳性细胞减少 7.1 0 %～1 1 .90 % (P <0 .0 5)。而无活性核酶对细胞AR基因表达差异无显著性 (P >0 .0 5)。结论 成功构建AR锤头状核酶表达载体 ,能特异性切割ARmRNA 。
- 赵军童强松陈朝晖曾甫清鲁功成
- 关键词：锤头状核酶雄激素受体核酶基因表达
