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国家自然科学基金(39600153)

作品数：4 被引量：11H指数：3
相关作者：陈璧胡大海汤朝武徐明达刘毅更多>>
相关机构：第四军医大学西京医院第四军医大学生物化学教研室更多>>
发文基金：国家自然科学基金更多>>
相关领域：生物学医药卫生更多>>

文献类型

  • 4篇中文期刊文章

领域

  • 3篇生物学
  • 1篇医药卫生

主题

  • 3篇细胞
  • 3篇角朊
  • 3篇角朊细胞
  • 3篇HEGF
  • 2篇质粒
  • 2篇基因
  • 1篇愈合
  • 1篇增殖
  • 1篇真核
  • 1篇真核表达
  • 1篇真核表达质粒
  • 1篇脂质体
  • 1篇脂质体介导
  • 1篇质粒转染
  • 1篇人角朊细胞
  • 1篇烧伤
  • 1篇生长因子基因
  • 1篇体外
  • 1篇体外培养
  • 1篇人表皮细胞

机构

  • 4篇第四军医大学...
  • 2篇第四军医大学
  • 1篇兰州军区兰州...
  • 1篇生物化学教研...

作者

  • 4篇汤朝武
  • 4篇胡大海
  • 4篇陈璧
  • 2篇刘毅
  • 2篇徐明达
  • 1篇惠宏襄
  • 1篇惠宏襄
  • 1篇陈军
  • 1篇王剑波

传媒

  • 2篇西北国防医学...
  • 1篇第四军医大学...
  • 1篇基础医学与临...

年份

  • 1篇2001
  • 3篇2000
共 4 条 记 录，以下是 1-4
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排序方式：
hEGF cDNA导入培养的人角朊细胞及其表达被引量：5
2000年
目的　观察外源性人表皮细胞生长因子 ( h EGF)基因导入正常角朊细胞后 ,能否表达及分泌 h EGF;为深入探讨h EGF的作用机制及临床应用奠定物质基础 .方法　脂质体包埋 h EGF c DNA的真核表达质粒 pc DNA3- h EGF转染人角朊细胞 ,经 G418筛选、克隆、扩大及传代培养转基因的角朊细胞 .特异性 neo探针原位杂交显示转基因细胞内的质粒载体 ;h EGF抗体免疫细胞化学法观察转基因细胞内 h EGF的表达 ;采用放射免疫分析测定细胞向胞外分泌 h EGF的情况 .结果　 pc DNA3- h EGF可经脂质体介导有效地转染角朊细胞 ;G418筛选纯化转基因后的角朊细胞内含转入的真核表达质粒 ,胞质内有阳性 h EGF表达 ;并向胞外分泌 h EGF.结论　由真核表达质粒 pc DNA3- h EGF转染人角朊细胞获得的含外源性 h EGF基因的角朊细胞具有表达分泌 h
胡大海陈璧陈军汤朝武刘毅王剑波徐明达
关键词：表皮细胞生长因子角朊细胞
人表皮细胞生长因子基因真核表达质粒pcDNA_3-hEGF的构建被引量：3
2000年
目的 :构建人表皮细胞生长因子 (hEGF)基因真核表达质粒 ,为深入研究hEGF在组织修复中的分子调节机制及临床应用提供物质基础。方法 :含hEGFcDNA的pUC18-hEGF质粒于大肠杆菌JM10 9内扩增 ;提取及纯化pUC18-hEGF质粒 ;经DNA序列分析其所含hEGFcDNA ;限制性酶切hEGFcDNA片段 ,连接酶连接到真核表达质粒pcDNA3 -neo内 ,克隆出真核表达质粒pcDNA3 -hEGF ;再经限制性酶切鉴定hEGF表达质粒。结果 :提取及纯化的pUC18-hEGF质粒含有大小正确的hEGFcDNA碱基片段 ,其碱基序列为编码目的基因的正确序列 ;凝胶电泳结果证明已将此片段克隆到pcDNA3 -hEGF内。结论 :成功地构建了hEGF基因的真核表达质粒pcDNA3 -hEGF。
胡大海陈璧汤朝武徐明达惠宏襄阎小君
关键词：基因真核表达质粒HEGF
表达hEGF导入基因的角朊细胞促进体外培养的正常角朊细胞增殖
2000年
目的 :观察含外源性人表皮细胞生长因子 (hEGF)基因改造的角朊细胞 (hEGF -MHK) ,对正常培养的角朊细胞 (NHK)增殖的影响 ;探讨转hEGF基因HK对创面愈合的生物学效应及作用机理。方法 :收集含真核表达质粒pcDNA3-hEGF的hEGF -MHK细胞培养上清 ,采用放射免疫分析法测定收集的上清液中hEGF含量 ;以 10 %的浓度加入由正常人皮肤组织分离培养的NHK细胞培养基内 ;MTT法测定NHK细胞培养 15d内的增殖速率并绘制细胞生长曲线 ;3H -TdR掺入法测定细胞培养 72h内的DNA合成速率。结果 :转基因HK细胞培养上清内含有高水平的免疫活性hEGF ,培养 7～ 9d的测定值为每天约 ( 37.89±4.13～ 35 .79± 4.33) μg·L 1,而正常HK培养上清、转染空载体的HK培养上清内均低于 5 μg·L 1;加 10 %的转基因HK细胞培养上清的NHK增殖明显加快 ,较对照组提前 4d以上融合达到生长平台期 ;转基因HK细胞培养上清作用 2 4h后可使NHK细胞DNA合成率明显提高。结论 :含hEGF基因真核表达质粒的hEGF -MHK细胞具有表达分泌hEGF的功能 ,分泌的hEGF可促进NHK细胞生长增殖 ,其机理为启动NHK细胞DNA合成 ;说明hEGF -MHK细胞可借助旁分泌途径刺激正常角朊细胞增生 。
胡大海陈璧汤朝武刘毅阎小军惠宏襄
关键词：烧伤创面愈合HEGF角朊细胞细胞增殖
脂质体介导质粒转染角朊细胞的影响因素被引量：4
2001年
探讨利用脂质体介导真核表达质粒转染体外培养的人角朊细胞的最佳转染条件。体外分离培养正常人角朊细胞 ,培养至 6 0 %、70 %、80 %、90 %及 10 0 %融合时 ,应用不同浓度的LipofectAMINE包被真核表达质粒pCMV·SPORT β gal,分别转染 6、8、10、12及 2 4h。细胞经转染后再培养 48h ,行 β 半乳糖苷酶原位染色 ,镜下观察并计算阳性转染率。被转染的阳性细胞 ,可见质粒 β 半乳糖苷酶基因的良好表达 ;当细胞融合率为 80 %、90 % ,以12 5 μL/ 10 0 μL的LipofectAMINE包被 1 5 μg/ 10 0 μL的pCMV·SPORT β gal,转染时间为 8h的转染率最高 ,可分别达到 (31 35± 1 35 ) %、(32 32± 2 4) %。该实验说明LipofectAMINE可有效地介导真核表达质粒转染培养的人角朊细胞 ;转染率与细胞生长状态、脂质体包被质粒的浓度比例、及转染时间直接相关。
胡大海汤朝武陈璧
关键词：基因转染脂质体角朊细胞细胞培养
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