国家自然科学基金(30660127)
- 作品数：16 被引量：50H指数：4
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- 相关机构：广西大学广西亚热带生物资源保护利用重点实验室广西柳州畜牧兽医学校更多>>
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- 乙二胺四乙酸钠、能量基质、氨基酸对猪卵母细胞体外成熟和早期孤雌发育的影响被引量：2
- 2007年
- 猪的卵巢卵母细胞在含不同剂量葡萄糖+丙酮酸钠的成熟培养基中体外成熟培养44-48 h,检查核成熟率(试验一),进行化学法孤雌激活后,在含不同浓度的乙二胺四乙酸钠(EDTA-Na)和不同剂量的葡萄糖+谷氨酰胺+牛磺酸+亚牛磺酸的培养基中进行体外培养,检查孤雌激活胚第48小时的卵裂率和第168小时的囊胚发育率(试验二),研究成熟培养基中葡萄糖+丙酮酸钠剂量对卵母细胞体外成熟核成熟率的影响及培养基中不同浓度EDTA-Na和葡萄糖+谷氨酰胺+牛磺酸+亚牛磺酸的剂量对孤雌激活胚胎体外发育的影响.结果表明:(1)葡萄糖+丙酮酸钠在1倍剂量时,猪卵母细胞体外成熟的核成熟率为(59.3±5.0)%;当剂量加倍时,核成熟率极显著下降(P<0.01),为(51.0±4.4)%.(2)当EDTA-Na浓度增高,囊胚发育率上升,当浓度达50μmol.L-1时囊胚发育率最高,为(7.2±4.1)%,此后随浓度升高囊胚发育率下降;添加适当浓度(25-100μmol.L-1)EDTA-Na对猪孤雌激活胚的囊胚发育有利(P<0.05),当浓度达200μmol.L-1时其有利作用消失.(3)培养基中葡萄糖+谷氨酰胺+牛磺酸+亚牛磺酸的剂量过高对卵裂率无显著影响(P>0.05),但对囊胚发育不利(P<0.05).可见:(1)适当浓度(25-100μmol.L-1)EDTA-Na对猪早期胚胎体外发育具有促进作用;(2)成熟培养基中能量基质剂量过高会抑制猪卵母细胞体外成熟;(3)胚胎培养基中葡萄糖+谷氨酰胺+牛磺酸+亚牛磺酸的剂量过高会抑制猪早期胚胎的体外发育.
- 卢晟盛魏凤房慧伶陆阳清卢克焕
- 关键词：氨基酸卵母细胞孤雌激活
- 猪胎儿肾脏成纤维细胞体外培养体系的建立被引量：13
- 2007年
- 本研究旨在建立猪胎儿肾脏成纤维细胞体外培养体系,并探讨其作为猪体细胞克隆供体的可能性。使用组织块培养法从体长为10cm以上的猪胎儿分离得到猪胎儿肾脏成纤维细胞,绘制了生长曲线,鉴定了细胞类型并且进行了细胞周期同期化效果的研究。结果表明:该培养体系可以支持猪胎儿肾脏成纤维细胞的体外生长,单个细胞均为梭形细胞,抗波形蛋白免疫荧光染色显示为阳性,而抗角形蛋白免疫荧光染色为阴性,分离到的细胞为胎儿肾脏成纤维细胞。使用血清饥饿法和接触抑制法诱导细胞进入G0/G1期,并且分别比较两者同期化效率,结果显示:血清饥饿2d和4d的同期化效率差异不显著,但都比8d组的高(88.97%和87.69%比82.45%,P<0.05);接触抑制4d、6d组间同期化效率差异不显著,但都比0d组的高(85.56%和85.89%比81.82%,P<0.05)。本研究在国内首次分离得到猪胎儿肾脏成纤维细胞,已经在体外传代培养到32代,其同期化效果好,可以作为体细胞克隆供体。
- 卢晟盛刘红波吕培茹陆阳清杨小淦皮道元卢克焕
- 关键词：组织块培养间接免疫荧光流式细胞仪
- 广西巴马小型猪克隆胚的构建及胚胎移植被引量：12
- 2008年
- 通过胚胎移植验证构建的广西巴马小型猪克隆胚是否可以发育到期。利用刺入式手术胚胎移植法,将0.5～1.5日龄巴马小型猪克隆胚移植到2头巴马小型猪和2头陆川猪的输卵管壶腹部。其中2头巴马小型猪和1头陆川猪返情,另外一头陆川猪于2007年10月13日产下1头克隆雄性巴马小型猪。说明巴马小型猪克隆胚能够在受体猪体内发育到期并产仔。
- 卢晟盛吕培茹刘红波何若钢潘天彪罗龙兴黄敏瑞卢克焕
- 关键词：广西巴马小型猪体细胞核移植胚胎移植
- 猪卵母细胞第一极体排出与否对其早期胚胎发育的影响被引量：3
- 2008年
- 探讨猪卵母细胞第一极体排出与否对其体外受精和孤雌激活后早期发育的影响.从屠宰场收集猪卵巢卵母细胞,体外成熟培养42～46 h后分为3组:排出第一极体组、没有排出第一极体组和对照组(不挑选第一极体卵母细胞),进行体外受精或化学孤雌激活之后放入胚胎培养液进行体外培养,分别于第48 h和第168 h统计分裂率和囊胚率.①体外受精后,有极体组的卵裂率略高于无极体组和对照组的卵裂率(62.19%±6.99%vs 55.40%±6.80%和56.33%±8.17%),各组间没有显著差异(p>0.05);囊胚率分别为4.87%±3.77%,2.33%±1.34%和3·50%±2.96%,有极体组明显高于无极体组(p<0.05),对照组与其它两组没有显著差异(p>0.05).②化学激活后,有极体组的卵裂率高于无极体组和对照组(75.45%±1.35%vs 64.81%±2.07%和69.64%±2.51%,p<0.05);有极体组的囊胚率也高于无极体组和对照组(24.54%±4.34%vs 12.96%±3.99%和18.75%±1.87%,p<0.05).排出第一极体卵母细胞比没有排出第一极体卵母细胞的发育能力强,但没有排出第一极体卵母细胞经体外受精或人工激活后也可以发育到囊胚阶段.
- 兰宗宝何若钢莫品方卢晟盛潘天彪蓝海恩黄敏瑞卢克焕
- 关键词：卵母细胞极体孤雌激活胚胎培养
- 不同时间间隔进行激活处理对猪早期ICSI胚发育的影响
- 2009年
- [目的]探讨不同激活方法对胞质内显微受精（ICSI）猪卵母细胞原核形成及其早期发育的影响。[方法]以体外成熟44~48 h的猪卵母细胞为试材,通过用ICSI法对其进行受精,然后用不同激活方法激活,研究了不同激活方法对ICSI卵母细胞原核形成和早期胚胎发育的影响。[结果]化学激活处理组的猪卵母细胞的原核形成率显著高于没有经过激活处理组,Ion（5 min）＋6-DMAP（4 h）组的原核形成率为38.08%,Ion（5 min）＋NCSU23（3 h）＋6-DMAP（4 h）组的原核形成率为47.78%。各处理组的分裂率差异不显著,但2个激活处理组的分裂率较高。不经激活处理组的囊胚率为3.82%,Ion（5 min）＋6-DMAP（4 h）组的囊胚率为15.49%,Ion（5 min）＋NCSU23（3 h）＋6-DMAP（4 h）组的囊胚率为10.70%。[结论]2种激活方法的原核形成率和囊胚率差异不显著,都可用于ICSI猪卵母细胞的激活。
- 许惠艳皮道元何若钢卢晟盛张玲潘天彪蓝海恩黄敏瑞卢克焕
- 关键词：卵母细胞显微受精胚胎培养
- 猪卵母细胞蛋白质组双向电泳体系的建立及初步分析被引量：3
- 2008年
- 建立了猪(Sus scrofa)卵母细胞蛋白质双向电泳平台,并对裂解液的组成、样品处理、双向电泳程序等相关技术进行优化,得到清晰的微量卵母细胞蛋白质的电泳图谱。利用上述优化后的体系分别对未成熟和成熟的猪卵母细胞进行双向电泳分析,并用ImageMaser软件对图谱进行比对分析。结果表明,电泳图谱上大约有800个左右的蛋白点,其中差异蛋白35个,包括上调蛋白22个及下调蛋白13个。说明基于双向电泳的蛋白质组学可以用于卵母细胞成熟的蛋白表达差异的研究。
- 胡惠忠付强卢晟盛张明陆阳清蒙冰卢克焕
- 关键词：卵母细胞双向电泳蛋白组学
- 培养液体积对猪孤雌胚早期发育的影响被引量：3
- 2008年
- 为了探讨培养液体积对猪早期孤雌胚发育的影响,旨在优化猪早期胚胎培养体系。试验一、二、三、四分别把30、20、15、10个枚孤雌激活胚放入60,45,30,15,10,5μL(10个胚胎)的培养滴,第48小时观察分裂率,第168小时观察囊胚形成率。结果表明:试验一:30~60μL组囊胚率略高于10~15μL组;试验二:60μL组的囊胚率略高;试验三:各组分裂率和囊胚率差异不显著(P>0.05),但45~60μL组分裂率和囊胚率比其他组略高;试验四:15μL组分裂率高于45μL组(P<0.05),15μL组囊胚率显著高于5μL组(P<0.05),其余各组差异不显著。由此表明:30枚猪孤雌胚时,胚胎数∶培养滴体积=1∶(1~2)较好;15~20枚猪孤雌胚时,胚胎数∶培养滴体积=1∶3较好;10枚猪孤雌胚时,胚胎数∶培养滴体积=1∶1.5较好。
- 许惠艳罗龙兴何若钢卢晟盛潘天彪蓝海恩黄敏瑞卢克焕
- 关键词：卵母细胞孤雌激活胚胎培养
- 不同浓度Leptin对猪卵母细胞体外成熟和早期孤雌发育的影响被引量：5
- 2008年
- [目的]系统比较了在成熟培养液中添加Leptin对猪卵母细胞体外成熟和孤雌激活胚的发育率和囊胚质量,同时比较了成熟培养液和胚胎培养液添加Leptin对孤雌激活胚发育的影响。[方法]成熟培养液中添加不同浓度Leptin对猪卵母细胞体外成熟和早期孤雌发育能力的影响及囊胚的内细胞团细胞数目,并且研究了成熟培养液和胚胎培养液单独或联合添加Leptin对猪早期孤雌胚胎发育能力的影响及囊胚的内细胞团细胞数目。[结果]成熟培养液中添加不同浓度Leptin(0,10,50,100和200 ng/ml),体外成熟44 h,卵母细胞核成熟率统计分析差异不显著(P>0.05);将核成熟卵母细胞进行化学激活,第2天胚胎卵裂率统计分析差异不显著(P>0.05),但100ng/ml组与其他组第7天的囊胚率及囊胚的总细胞数差异显著(P<0.05);成熟液添加Leptin 100 ng/ml、胚胎培养液添加Leptin 10 ng/ml与其他组第7天的囊胚率及囊胚的内细胞团细胞数差异显著(P<0.05)。[结论]Leptin对卵母细胞成熟和孤雌胚胎发育能力上有相辅相成的作用。
- 任子利赵彦玲何若钢卢晟盛陆阳清蓝海恩潘天彪黄敏瑞卢克焕
- 关键词：卵母细胞孤雌激活LEPTIN
- 乙二胺四乙酸钠对猪卵母细胞的体外成熟和孤雌激活后早期发育的影响被引量：1
- 2008年
- 探讨乙二胺四乙酸钠（EDTA-Na）对猪卵母细胞的体外成熟和孤雌激活后早期发育的影响。利用屠宰场猪卵巢卵母细胞，在不添加或添加不同浓度EDTA-Na的成熟培养液中体外成熟44～48h，挑选核成熟卵母细胞进行孤雌激活，然后移到不添加或添加不同浓度EDTA-Na的胚胎培养液中进行体外培养168h。结果表明：（1）胚胎培养液中添加适当浓度（25～100μmol·L^-1）EDTA-Na对体外成熟猪卵母细胞孤雌激活后的早期发育具有促进作用，在EDTA-Na浓度为100μmol·L^-1时，效果最佳；（2）成熟液和胚胎培养液中同时添加100μmol·L^-1 EDTA-Na对体外成熟猪卵母细胞孤雌激活后的早期发育具有促进作用；（3）成熟液或／和胚胎培养液中添加不同浓度EDTA-Na对体外成熟培养后的猪核成熟卵母细胞及孤雌激活后的4一细胞孤雌胚SDS-PAGE电泳的蛋白质表达图谱都无显著影响。
- 卢晟盛魏凤房慧伶卢克焕
- 关键词：卵母细胞体外成熟孤雌激活胚胎培养
- 不同激活方法对猪ICSI卵早期发育的影响
- 2009年
- [目的]探讨不同激活方法对猪单精子显微受精(ICSI)胚发育的影响。[方法]冷冻精子解冻洗涤后直接应用于ICSI,ICSI后采用不同激活方法激活卵母细胞,检测其原核形成情况。[结果]结果表明,单纯电脉冲激活以及电脉冲与6-DMAP联合激活其受精率分别达53.3%和60.4%,对ICSI卵雌雄原核形成的影响差异不显著(P>0.05);ICSI后采用不同激活方法激活卵母细胞,检测猪ICSI卵胚胎早期发育情况,单纯电脉冲激活囊胚率达13.0%,显著高于对照(P<0.05)。[结论]单纯电脉冲激活能促进猪ICSI胚胎的早期发育。
- 张玲冯宝刚许惠艳何若钢卢晟盛房慧伶潘天彪蓝海恩黄敏瑞卢克焕
- 关键词：卵母细胞ICSI电激活
