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国家自然科学基金(30660101)

作品数：10 被引量：39H指数：3
相关作者：李凡陈海如左瑞娟尹朝先刘芳更多>>
相关机构：云南农业大学云南省农业科学院云南省烟草公司更多>>
发文基金：国家自然科学基金云南省教育厅科学研究基金重点项目云南省自然科学基金更多>>
相关领域：农业科学生物学更多>>

文献类型

  • 8篇中文期刊文章

领域

  • 7篇农业科学
  • 1篇生物学

主题

  • 7篇烟草丛顶病
  • 2篇蚜虫
  • 2篇烟草
  • 2篇分离物
  • 2篇ORF3
  • 2篇病原
  • 1篇烟草植株
  • 1篇原核
  • 1篇原核表达
  • 1篇云南烟草
  • 1篇植株
  • 1篇生物学
  • 1篇片段
  • 1篇全基因
  • 1篇全基因组序列
  • 1篇染病
  • 1篇重叠延伸PC...
  • 1篇卫星RNA
  • 1篇系统进化
  • 1篇系统进化分析

机构

  • 8篇云南农业大学
  • 1篇大理州烟草公...

作者

  • 8篇李凡
  • 6篇陈海如
  • 3篇刘芳
  • 2篇尹朝先
  • 2篇魏薇
  • 2篇谭冠林
  • 2篇左瑞娟
  • 1篇冉志伟
  • 1篇王连春
  • 1篇马琨玲
  • 1篇李玲
  • 1篇兰平秀
  • 1篇李晓静
  • 1篇龙亚芹
  • 1篇李丽娟
  • 1篇董鹏
  • 1篇张润
  • 1篇陈小姣
  • 1篇包娜
  • 1篇马龑

传媒

  • 5篇云南农业大学...
  • 1篇植物保护
  • 1篇云南大学学报...
  • 1篇华南农业大学...

年份

  • 1篇2017
  • 1篇2015
  • 1篇2014
  • 2篇2011
  • 2篇2010
  • 1篇2008
共 10 条 记 录，以下是 1-8
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排序方式：
CTAB法用于染病烟草植株中烟草丛顶病毒RNA的提取被引量：6
2011年
CTAB法是一种广泛用于从染病植物中提取总核酸,并用于后续相关病原物PCR检测的核酸提取法,已普遍运用于DNA病毒、植原体、细菌、真菌侵染植物的总DNA提取和病原检测。本文尝试将CTAB法用于一种由RNA病毒(烟草丛顶病毒)引起的烟草丛顶病染病组织总核酸的提取,以总核酸进行烟草丛顶病毒的RT-PCR检测,并与常规RNA病毒核酸提取法——Trizol法作比较。结果表明CTAB法和Trizol法提取的核酸用于烟草丛顶病毒RT-PCR检测时,均能扩增到目的条带,检测结果一致。在对复合侵染材料进行检测时发现,CTAB法提取的染病植物组织总核酸既包括DNA也包含RNA,有利于对DNA和RNA病原物同时进行检测;CTAB法所用试剂较Trizol法便宜,毒性小,且提取的核酸量较多、保存时间较长。因此CTAB法是一种高效、简便、经济的从烟草丛顶病染病组织中提取烟草丛顶病毒RNA的方法。
左瑞娟周雨泫李丽娟董鹏陈海如李凡
关键词：CTAB法TRIZOL法
烟草丛顶病毒编码的沉默抑制子初步鉴定被引量：1
2011年
烟草丛顶病毒(Tobacco bushy top virus,TBTV)为幽影病毒属成员,能在烟草上造成严重危害。TBTV基因组编码4个ORF,其中ORF3和ORF4几乎完全重叠,可能在TBTV的致病性中发挥重要作用。分别将TBTV的ORF3和ORF4与载体pGR107连接,构建植物表达载体pGR107-ORF3,pGR107-ORF4。经农杆菌与含外源GFP基因的pGREEN208共浸润转GFP基因的本氏烟16c叶片,2～5 d后(days post-inoculation,dpi)在紫外灯下观察发现浸润区有明显绿色荧光,其中pGR107-ORF4在12 dpi后浸润区绿色荧光区域扩大,推断ORF4编码产物可能具有局部抑制本氏烟16c对外源GFP基因进行沉默的功能;而pGR107-ORF3浸润区绿色荧光逐渐恢复红色,GFP基因发生沉默,说明ORF3编码产物不具有抑制基因沉默的功能。进一步利用real-time PCR定量检测发现,pGR107-ORF4浸润15 dpi的本氏烟叶片中GFP RNA的含量要比仅接种pGR107的对照高,比未接种的本氏烟16c稍低。推断是因为ORF4编码蛋白抑制了植物对外源GFP RNA产生的沉默,使GFP得以在本氏烟内表达。由此进一步证实ORF4编码产物是TBTV的基因沉默抑制子。
张润王连春陈海如李凡
关键词：ORF3
TBTV卫星RNA不同分离物的序列测定及系统进化分析被引量：2
2010年
利用RT-PCR方法对烟草丛顶病毒(tobacco bushy top virus,TBTV)卫星RNA不同分离物进行扩增和克隆测序,同时运用DNAMAN,MEGA,ClustalX等生物软件对TBTV和其它幽影病毒的卫星RNA核苷酸序列进行同源性比较,构建了幽影病毒属成员卫星RNA的系统进化树。E结果显示:TBTV不同分离物卫星RNA的核苷酸同源性为79.2%～99.0%。它们与幽影病毒属其它成员卫星RNA的核苷酸同源性为32.5%～44.1%。通过构建幽影病毒属成员卫星RNA的系统进化树可以看出:TBTV的卫星RNA与GRV的卫星RNA亲缘关系最近,与CMoMV的亲缘关系最远。
尹朝先包娜冉志伟陈海如李凡
关键词：卫星RNA系统进化
烟草丛顶病毒云南不同分离物全基因组序列测定与分析
2017年
【目的】探明烟草丛顶病毒(Tobacco bushy top virus,TBTV)云南不同分离物之间的遗传差异并完成系统进化分析。【方法】采用RT-PCR方法扩增获得云南不同地区10个TBTV分离物的全基因组序列。【结果】10个TBTV云南分离物的全基因组序列均为4 152 bp,基因组结构由4个开放阅读框(ORFs)构成,ORF2通过与ORF1发生-1位的移码(frameshift)表达融合蛋白,推测ORF1末端的GGAUUUU特征序列是确定ORF1与ORF2是否发生移码翻译的依据。各TBTV云南分离物全基因组序列的核苷酸序列同源性为84.9%~99.1%,其中来自德宏的分离物(TBTV-YDHo)变异最大。TBTV不同分离物间存在重组现象,且分离物之间亲缘关系与重组的发生有关,重组主要发生在变异较大的ORF1~ORF2区段。TBTV分离物的各区段中,ORF1和ORF1~ORF2变异最大,而ORF4和3'UTR较为保守。系统进化分析结果表明:TBTV作为幽影病毒属(Umbravirus)的成员之一,其与同属中的罂粟花叶病毒(Opium poppy mosaic virus,OPMV)亲缘关系最近,核苷酸序列同源性为61.1%~61.6%;与CMo V和CMo MV亲缘关系较远,同源性为54%~55.1%。除幽影病毒属外,TBTV与番茄丛矮病毒科(Tombusviridae)其他属的病毒核苷酸序列同源性为25.1%~49.8%;Tombusviridae中Umbravirus与香石竹环斑病毒属(Dianthovirus)的RNA2亲缘关系最远,与其他病毒属成员的亲缘关系都相对较近。【结论】TBTV云南各分离物之间存在一定的分子变异,有的存在重组现象;TBTV与OPMV亲缘关系最近。
吕婧刘芳谭冠林魏薇尹朝先马龑陈小姣和理淮陈海如李凡
烟草丛顶病毒ORF3的克隆及原核表达
2010年
利用RT—PCR方法，自烟草丛顶病毒（Tobacco bush top virus，TBTV）龙陵分离物（TBTV—YLLi）的RNA中扩增出ORF3目的片段，并克隆到pMD18-T载体上进行序列分析．结果表明，TBTV-YLLi的ORF3全长714bp，与TBTV其他分离物的核苷酸相似性和氨基酸相似性分别为98．3％～98．6％和95．4％～95．8％；与同属的花生丛簇病毒（Groundnut rosette virus，GRV）、豌豆耳突花叶病毒2号（Pea enation mosaic virus-2，PEMV-2）和胡萝卜拟斑驳病毒（Carrot mottle mimic virus，CMoMV）的核苷酸相似性分别为65．1％、61．6％和49．7％，氨基酸相似性分别为36．4％、34．6％和16．5％．将ORF3克隆到原核表达载体pET28a（＋）上，获得的重组子pET28-ORF3转化大肠杆菌BL21-plysS，使用终浓度为1．0mmol／L的IPTG在37℃诱导培养4h时，该融合蛋白表达量最高．融合蛋白经Ni^2＋亲和柱层析纯化后，SDS—PAGE电泳表明，融合蛋白相对分子质量约为35000，与预计的相对分子质量大小相一致．
龙亚芹左瑞娟李凡赵秀兰李玲陈海如
关键词：ORF3原核表达
利用重叠延伸PCR技术扩增长片段DNA被引量：22
2008年
重叠延伸PCR技术是一种通过寡聚核苷酸链之间重叠的部分互相搭桥、互为模板,通过多次PCR扩增,从而获得目的DNA基因片段的方法.该技术可以高效、快捷、经济地扩增长片段DNA,在基因功能研究方面显示出良好的应用前景.综述了重叠延伸PCR技术的原理、特点以及利用该技术构建长片段DNA的方法和注意事项,并对该技术的应用前景进行了展望.
魏薇李凡陈海如
关键词：基因
从烟草丛顶病病原复合物中分离烟草扭脉病毒的方法被引量：2
2014年
烟草丛顶病是由烟草丛顶病毒（TBTV）、烟草丛顶病毒类似卫星RNA（Sat-TBTV）、烟草扭脉病毒（TVDV）和烟草扭脉病毒相关RNA（TVDVaRNA）复合侵染引起的一类特殊病害,目前尚不清楚这些病原物各自在病害症状形成和病害传播中的作用。本文根据蚜虫传播烟草丛顶病复合病原物传毒特性的差异,探索了3种分离TVDV的生物学方法。方法A为将获得了烟草丛顶病复合病原物的蚜虫饥饿24h后,以单虫单苗的方式接到健康烟株上传毒,24h后灭虫。方法B为将无毒蚜虫饥饿2-4h后转接到感病烟株上饲毒48h,再以单虫单苗的方式接到健康烟株上传毒,24h后灭虫。方法C为将无毒蚜虫于感病烟株上饲毒48h后,以单虫单苗的方式接到健康烟株上传毒24h,此后每隔24h将蚜虫移到另一健康烟株上传毒,直到蚜虫死亡。其中方法 A和B均可将TVDV从烟草丛顶病病原复合体中分开,方法A操作简单、分离周期短且TVDV的分离效率高。单独TVDV侵染的烟株无明显的丛顶症状,叶片靠近主脉的地方会出现皱缩,生长后期叶片变得细长且顶端会发生扭曲。本试验可为研究TVDV与其他病原物、寄主植物和传播介体的相互作用提供很好的试验材料,也可为蚜虫传播的复合侵染病毒的生物学分离提供参考。
刘芳马琨玲兰平秀缪玉东李晓静李凡
关键词：烟草丛顶病蚜虫
云南烟草丛顶病复合病原物的寄主范围被引量：2
2015年
云南烟草丛顶病是由烟草丛顶病毒(TBTV)、烟草扭脉病毒(TVDV)、烟草丛顶病毒类似卫星RNA(Sat-TBTV)以及烟草扭脉病毒相关RNA(TVDVaRNA)复合侵染引起的一种危险性烟草病害。利用带毒烟蚜(Myzus persicae)对12种植物进行蚜虫传毒接种试验,传毒时间为15 d。结果发现:接种的辣椒、酸浆等茄科植物表现褪绿、黄化和皱缩等症状,而黄瓜、菜豆等非茄科植物未表现明显症状。利用RT-PCR技术检测接种植物中云南烟草丛顶病病原物的种类,发现酸浆、假酸浆、曼陀罗、番茄、矮牵牛和辣椒6种茄科作物均能感染云南烟草丛顶病中的4种病原物,而黄瓜、西葫芦、昆诺藜、豇豆、菜豆和油菜等6种植物只能感染云南烟草丛顶病中的部分病原物。其中,烟草扭脉病毒(TVDV)的检出率最高,为83.3%,表明TVDV在病害的发生及流行中起了重要作用,通过蚜虫传毒方式可以将云南烟草丛顶病中的部分病原物分开,有利于研究不同病原物在症状的形成及流行中的作用,同时为其他多种病毒复合侵染引起植物病害的研究提供参考。
马普权刘芳谭冠林田芝花李凡
关键词：烟草丛顶病病原物寄主范围蚜虫
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