国家现代农业产业技术体系建设项目(CARS-45-16)
- 作品数：8 被引量：33H指数：2
- 相关作者：周勇曾令兵范玉顶刘文枝江南更多>>
- 相关机构：中国水产科学研究院长江水产研究所上海海洋大学华南农业大学更多>>
- 发文基金：国家现代农业产业技术体系建设项目中央级公益性科研院所基本科研业务费专项国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 池塘养殖患病泥鳅两种病毒病原的电镜观察初报被引量：2
- 2018年
- 利用电子显微镜技术,对湖北荆州池塘养殖患病泥鳅的组织进行超薄切片电镜观察。电镜观察结果显示:在患病泥鳅的脾脏、肾脏、心脏及肠道组织中观察到大量球形和杆状两种形态的病毒颗粒。球形病毒颗粒无囊膜,直径约50~75 nm;杆状病毒颗粒有囊膜,形态多样,大小约为(50~100)nm×(300~500)nm;细胞培养分离病毒结果显示,球状病毒可在鲫鱼脑组织细胞系(Gi CB)中增殖,可导致细胞出现典型的细胞病变效应(CPE,cytopathic effect),但没有观察到Gi CB细胞中杆状病毒的增殖。
- 刘文枝范玉顶江南赵建青周勇曾令兵
- 关键词：病毒病原电镜观察细胞培养
- 鲫脑组织细胞系酵母双杂交cDNA文库的构建及初步应用被引量：1
- 2019年
- 为深入研究鲤疱疹病毒Ⅱ型CyHV-2与宿主细胞相互作用机制,以鲫脑组织细胞系(Gibel carp brain,GiCB)总RNA为模板,反转录合成cDNA,扩增获得双链cDNA,与载体pGADT7-Rec共转化酵母菌Y187,构建了GiCB细胞酵母双杂交cDNA文库。以CyHV-2 ORF25编码蛋白为诱饵,与GiCB细胞酵母双杂交cDNA文库杂交,筛选与其互作的GiCB细胞受体。结果显示:GiCB细胞酵母双杂交cDNA文库转化效率为1.03×10~6 CFU/μg,滴度为1.24×10~6 CFU/mL,PCR扩增结果表明文库中插入片段的大小在1.5 kb左右。将表达CyHV-2 ORF25编码蛋白的诱饵菌与GiCB细胞酵母双杂交cDNA文库杂交后,筛选得到与ORF25编码蛋白相互作用蛋白的阳性克隆,为进一步研究CyHV-2的感染机制奠定了前期基础。
- 许晨周勇史玉恒范玉顶刘文枝江南赵建青曾令兵
- 关键词：酵母双杂交
- 表没食子儿茶素没食子酸酯衍生物及过硫酸氢钾复合物粉体外抑制Ⅰ型草鱼呼肠孤病毒的研究
- 2023年
- 【目的】为了将表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin gallate, EGCG)的2种衍生物和过硫酸氢钾复合物粉(compound potassium peroxymonosulfate powder, KMPS)运用于体外细胞实验中,以评估这3种药物对I型草鱼呼肠孤病毒(grass carp reovirus, GCRV)的抑制和杀灭效果。【方法】利用MUSE法和CCK-8法评估表没食子儿茶素没食子酸酯棕榈酸酯(epigallocatechin gallate palmitate,EGCG-P)、乙酰化表没食子儿茶素没食子酸酯(peracetylated epigallocatechin gallate, Ac EGCG)和过硫酸氢钾复合物粉3种药物对细胞的安全浓度,利用体外细胞感染病毒模型,使用不同浓度测试物处理病毒或细胞后感染病毒,通过实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction, q RT-PCR)法分析不同测试物对病毒的抑制和杀灭效果。使用不同浓度测试物处理细胞后,利用q RT-PCR法检测宿主免疫相关基因变化情况。【结果】EGCG-P和Ac EGCG对GCRV-JX01感染细胞的抑制作用呈剂量依赖性,且EGCG-P的抑制效果优于Ac EGCG,EGCG-P浓度为10μg/m L和40μg/m L时病毒量相对于对照组上清中病毒的滴度分别降低了102 copies/μL和103 copies/μL,而Ac EGCG浓度为60μg/m L和120μg/m L时才能达到相同抑制效果。杀灭实验结果表明,EGCG-P、Ac EGCG和KMPS对GCRV-I毒株均有杀灭效果,最低有效杀灭剂量KMPS (5μg/m L)
- 徐伟闻金萱李鹏飞吕利群王浩
- 关键词：草鱼出血病草鱼呼肠孤病毒
- 池塘养殖患病黄颡鱼病毒病原的电镜观察初报被引量：1
- 2021年
- 应用电子显微镜技术,对池塘养殖下颌出血的患病黄颡鱼Pelteobagrus fulvidraco内脏组织进行超薄切片电镜观察。在患病黄颡鱼的脾脏和肾脏组织中观察到大量球形无囊膜病毒样颗粒,直径约30~40 nm;病毒粒子分布在宿主细胞的细胞质中,有的由单位膜包裹在包涵体中,而正常黄颡鱼组织中未观察到球形样病毒颗粒。
- 刘文枝薛明洋周勇李逸群范玉顶孟彦曾佳曾令兵
- 关键词：病毒病原电镜观察
- “禽-鱼”综合生产中高密度养殖危害水禽生产性能问题的机理研究进展
- 水禽业的强劲发展使生产规模不断扩大,南方"禽-鱼"综合生产中单位水面载禽密度也不断上升,更多的水禽向水体中排放更多氮磷等营养物质和有害肠道细菌如大肠杆菌和沙门氏菌等。有害细菌利用氮磷等营养物质活泼增殖,往往导致大肠杆菌病...
- 施振旦刘丽孙爱东
- 关键词：内毒素防控措施
- 文献传递
- 鲤疱疹病毒Ⅱ型ORF25截短蛋白的多克隆抗体制备与免疫原性分析被引量：5
- 2018年
- 鲫(Carassius auratus)造血器官坏死症是我国养殖鲫中新出现的一种传染性病毒性疾病,其病原为鲤疱疹病毒Ⅱ型(Cy HV-2),为研制针对该病的有效诊断试剂和疫苗,分析了Cy HV-2 ORF25基因编码蛋白的抗原表位,利用原核表达系统对Cy HV-2 ORF25编码蛋白富含抗原表位的区域进行截短表达,制备了抗Cy HV-2 ORF25编码蛋白的多克隆抗体,通过间接免疫荧光和免疫保护力测定等实验研究了截短表达蛋白的免疫原性。结果显示,原核表达的截短蛋白t ORF25分子质量约为28 k W,蛋白纯化后免疫日本大耳兔制备的多克隆抗体可特异性识别在Gi CB上增殖的Cy HV-2。将截短表达蛋白t ORF25免疫异育银鲫后,感染Cy HV-2,其相对免疫保护率达47%。
- 周勇史玉恒范玉顶刘文枝江南赵建青许晨曾令兵
- 关键词：原核表达多克隆抗体免疫原性
- 鲤疱疹病毒Ⅱ型ORF66截短蛋白多克隆抗体的制备及互作多肽筛选被引量：2
- 2023年
- 为深入探究鲤疱疹病毒Ⅱ型(Cyprinid herpesvirus 2,CyHV-2)在感染过程中的生物学功能,构建了ORF66截短基因的原核表达质粒pET28a-tORF66,转化至BL21感受态细胞后利用IPTG(Isopropyl-beta-Dthiogalactopyranoside)16℃诱导蛋白表达,经尿素溶解透析获得溶解的重组蛋白后免疫6周龄小鼠,制备鼠抗tORF66多克隆抗体。将纯化后重组蛋白进行噬菌体展示以此来筛选互作蛋白。经Western Blot检测显示,抗体能够识别感染鲫鳍条细胞系GICF细胞中的鲤疱疹病毒Ⅱ型,效价较高,特异性较好。噬菌体淘选结果通过生物信息学分析显示,得到一条出现频次最高的多肽N′-LHLHQNRMSLSR-C′。该多肽与金鱼基因组中的3个基因有较高的同源性,推断其可能与rORF66重组蛋白相互作用。这将为深入探究ORF66在CyHV-2病毒感染过程中的生物学功能、开发抗CyHV-2病毒新药物及寻找潜在的药物靶点提供新依据。
- 张小米阙顺政龙晨王浩吕利群
- 关键词：原核表达多克隆抗体噬菌体展示
- “禽-鱼”高密度养殖对水禽生产性能危害的研究被引量：23
- 2011年
- 水禽业的强劲发展使生产规模不断扩大,南方"禽-鱼"综合生产中单位水面载禽密度也不断上升,更多的水禽向水体中排放氮磷等营养物质和有害肠道细菌如大肠杆菌和沙门菌等。有害细菌利用氮磷等营养物质活泼增殖,往往导致大肠杆菌病的暴发。有害菌死亡后释放的内毒素会污染水体,危害水禽健康,严重降低种水禽繁殖性能和雏禽生长速度和免疫机能,也使水禽易感染和发生其他疾病。适当控制水禽养殖规模和单位水面载禽密度,并通过饲料添加芽胞杆菌抑制肠道有害菌的增殖和在粪便中的排放,以及在水体中应用光合细菌以吸收氮磷等营养物质从而竞争抑制有害菌在水体中的增殖,是降低水体细菌和内毒素污染,提高水禽的健康、免疫机能和生产性能的关键新技术。
- 施振旦刘丽孙爱东
- 关键词：细菌内毒素免疫机能
- 不同基因型草鱼呼肠孤病毒通用RT-PCR检测方法的建立及应用被引量：1
- 2018年
- 根据Gen Bank登录的草鱼呼肠孤病毒(grass carp reovirus,GCRV)不同基因型毒株编码VP2蛋白的S2节段保守序列,设计1对简并引物,通过优化反应条件及灵敏度和特异性评价,建立了一种能同时检测三种基因型GCRV的通用RT-PCR检测方法。结果显示:该方法在三种基因型GCRV中均扩增出大小约590 bp的特异性条带;灵敏度试验结果显示,该方法对于I、Ⅱ、Ⅲ型GCRV的检测限分别为380、250和380拷贝/μL。该方法可特异性地检测目前已知的三种基因型GCRV,而在大鲵虹彩病毒(GSIV)、锦鲤疱疹病毒(KHV)、鲤疱疹病毒Ⅱ型(Cy HV-2)、鲤春病毒血症病毒(SVCV)和传染性脾肾坏死病毒(ISKNV)中无扩增产物。利用该方法检测49份草鱼出血病疑似样品,结果显示均为GCRV阳性,其中I型阳性率为8. 2%,Ⅱ型阳性率为85. 7%,Ⅲ型阳性率为2%,I、Ⅱ型混合感染阳性率为4. 1%,其他类型的混合感染未检测到。结果表明,本研究建立的针对I、Ⅱ和Ⅲ型GCRV的RT-PCR检测方法具有通用性好、省时高效的突出特点,同时还兼具较高的灵敏度和特异性。
- 范玉顶马杰周勇江南刘文枝曾令兵
- 关键词：RT-PCRVP2蛋白
