湖南省教育厅优秀青年基金(11B106)
- 作品数：2 被引量：7H指数：2
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- 相关机构：中南大学南华大学中南大学湘雅三医院更多>>
- 发文基金：湖南省教育厅优秀青年基金国家自然科学基金国家教育部博士点基金更多>>
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- 日本血吸虫琼脂-石蜡双包埋纵向切片的制备被引量：4
- 2012年
- 将日本血吸虫用双层琼脂预包埋后制作琼脂块,利用乙醇、异丁醇和正丁醇脱水,石蜡包埋后常规切片、脱蜡,即可进行各种染色步骤。该法可获得完整的纵向虫体连续切片,且容易对预定切面进行准确定位。
- 王可耕曾庆仁张愉快周军蔡力汀梁瑜刘彦
- 关键词：日本血吸虫
- 日本血吸虫脱尾童虫表膜结合短肽的筛选与鉴定被引量：3
- 2013年
- 目的筛选噬菌体十二肽库中与日本血吸虫(Shistosoma japonicum)脱尾童虫表膜特异性结合而不与尾蚴表膜结合的短肽并鉴定。方法利用M13噬菌体十二肽库,经体外逆向差异筛选日本血吸虫尾蚴和脱尾活童虫,从第3轮回收的结合噬菌体中随机挑取15个克隆进行测序获取目标噬菌体后,采用ELISA法、洗脱回收率实验(以M13KE为阴性对照)和免疫组织化学法检测日本血吸虫脱尾童虫、尾蚴与噬菌斑克隆的特异性结合。荧光显微镜观察人工合成的阳性噬菌体短肽与日本血吸虫脱尾童虫体外的特异性结合。构建目的片段pEGFP-C2质粒体外转染日本血吸虫脱尾童虫。结果经3轮逆向差异筛选后.噬菌体回收率从第1轮的3.50×10^(-5)%到第3轮的3.20×10^(-2)%,富集度明显提高。DNA测序结果表明,15个噬菌体克隆分别含有ZL6、ZL4和ZL1等3个不同的短肽序列。ELISA结果显示,M13噬菌体短肽ZL4(MppZL4)、MppZL6和MppZL1分别与脱尾童虫膜蛋白结合后的P/N值为6.72,3.65和2.22,分别与尾蚴膜蛋白结合后的P/N值为1.58,5.15和1.20。洗脱回收率实验结果显示.MppZL4与脱尾童虫洗脱回收率[(4.60±0.27)×10^(-2)%]远高于MppZL6[(2.10±0.23)×10^(-3)%]、MppZL1[(1.20±0.28)×10^(-3)%]和M13KE[(1.30±0.60)×10^(-7)%)(P<0.01)。免疫组化结果显示,日本血吸虫脱尾童虫与MppZL4特异性结合.阳性率为83.0%(83/100)。荧光显微镜检测结果显示,人工合成的RhB-ZL4可与日本血吸虫脱尾童虫体外特异性结合。构建的ZL4/pEGFP-C2质粒体外可成功转染日本血吸虫脱尾童虫。结论筛选获得的短肽ZL4能与日本血吸虫童虫表膜特异性结合.不与尾蚴表膜结合。
- 刘彦张组萍王可耕顾孔珍蔡立汀曾庆仁
- 关键词：日本血吸虫表膜噬菌体展示技术
