博士科研启动基金(ZD200908)
- 作品数：4 被引量：11H指数：2
- 相关作者：王永娟朱善元韩小英吴双王安平更多>>
- 相关机构：江苏农牧科技职业学院昆山出入境检验检疫局扬州大学更多>>
- 发文基金：博士科研启动基金江苏省自然科学基金江苏省教育厅科研基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 鸡α-干扰素成熟肽的原核表达及其多价血清的制备被引量：8
- 2013年
- 以PCR方法从活化的鸡外周血淋巴细胞中扩增鸡α-干扰素的成熟肽基因序列,构建原核表达质粒pET32a-α和pGEX6p-α;SDS-PAGE及Western blotting法检测两载体特异性表达成熟肽;将纯化的pET32a-α诱导表达产物免疫小鼠,收获小鼠血清并以pGEX6p-α诱导表达产物检测其中特异性抗体滴度。结果表明:扩增的鸡α-干扰素成熟肽基因成功表达,原核表达产物免疫小鼠可产生特异性抗体,抗体效价为1∶12 000。其结果为制备安全、高效的重组干扰素奠定了基础,为定量检测机体内产生的α干扰素进而了解机体免疫状态提供较为可靠的技术手段。
- 王永娟朱善元左伟勇韩小英吴双王安平洪伟鸣黄文强
- 关键词：Α-干扰素原核表达抗体
- 靶向传染性法氏囊病病毒(IBDV)VP2有效miRNA的筛选被引量：2
- 2010年
- 为筛选出能有效抑制传染性法氏囊病病毒(IBDV)VP2基因复制的miRNA,采用RT-PCR方法从病毒基因组中进行结构蛋白VP2的基因扩增与序列测定,构建融合表达载体pVP2-EGFP。根据VP2测序结果,借助genscript软件设计针对VP2的5条miRNA,分别命名为miVP2A、miVP2B、miVP2C、miVP2D和miVP2E,将合成的5条miRNAs分别插入到pRFPRNAiC中形成miVP2s表达载体,这些载体分别与pVP2-EGFP共转染DF-1细胞系,通过NortheringBlotting方法检测miVP2s的表达,利用荧光共聚焦显微镜定性、流式细胞术定量的方法进行有效miVP2s的筛选。结果显示:miVP2s能成功表达;转染miVP2s表达载体组的绿色荧光蛋白(GFP)强度和数量都明显弱于或少于阴性对照组;miVP2s对VP2的抑制效率为59.7%到78.5%。表明所设计的miRNAs对VP2均有抑制作用,其中miVP2A和miVP2E效果最为显著。
- 王永娟崔平福孙怀昌
- 关键词：VP2MIRNA流式细胞术
- 鸡γ-干扰素成熟肽基因的克隆、表达与抗血清制备被引量：2
- 2012年
- 为了制备安全、高效的重组鸡γ-干扰素及抗血清,以PCR方法从活化的鸡外周血淋巴细胞中扩增鸡γ-干扰素的成熟肽基因序列,并构建原核表达质粒pET32a-γ和pGEX6p-γ;SDS-PAGE法检测2个载体特异性表达成熟肽的情况;将纯化的pET32a-γ诱导表达产物免疫小鼠,收获小鼠血清,并以pGEX6p-γ诱导表达产物检测其中特异性抗体滴度。结果显示,扩增的鸡γ-干扰素成熟肽基因能成功表达,原核表达产物免疫小鼠可产生特异性抗体,抗体效价为1∶16 000。表明所用的表达系统可以制备安全、高效的重组干扰素,能够为定量检测机体内产生的γ-干扰素进而了解机体针对病原的免疫状态提供较为可靠的技术手段,为其他一些尚无商品化抗体的生物分子鉴定提供参考方法。
- 王永娟朱善元左伟勇王安平吴双洪伟鸣黄文强韩小英
- 关键词：Γ-干扰素原核表达抗体
- 禽源细胞中miRNA表达方法建立及基因沉默效率检测
- 2010年
- 从Genscript软件预测的10个GFP报告基因序列特异性miRNA中随机选择1个,通过PCR法合成相应双链寡核苷酸,插入含鸡U6启动子的pRFPRNAiC载体,获得pRFPRNAiGFP;将pRFPRNAiGFP与peGFP-N1共转染COS-1、293-T、CEL和CEF细胞,在RT-PCR法确定miRNA表达后,根据转染细胞中GFP阳性细胞数及荧光强度变化,比较鸡U6启动子在哺乳动物源和禽源细胞中介导的miRNA沉默效率。结果显示,pRFPRNAiGFP在哺乳动物和禽源细胞中都能表达抑制性miRNA,但在禽源细胞中的基因沉默效率较高。因此,pRFPRNAiC可作为禽源细胞中表达miRNA的载体,GFP则是检测沉默效率的很好的报告基因,本研究为在禽源细胞中进行RNAi研究创建了平台。
- 王永娟朱善元崔平福
- 关键词：GFPMIRNA
