福建省自然科学基金(C0540009)
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
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- 相关机构：福建医科大学附属口腔医院福建医科大学更多>>
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- 人表皮生长因子受体胞内酪氨酸激酶结构域原核表达
- 2006年
- 目的研究人表皮生长因子受体(EGFR)胞内酪氨酸激酶结构域的原核表达及纯化条件。方法构建原核表达人EGFR胞内酪氨酸激酶结构域的重组质粒pGEX/GST-EGFR-TKD,在大肠杆菌中表达目的融合蛋白,通过在尿素中变性、在梯度尿素中透析复性,经GST融合蛋白纯化,肠激酶去除GST“标签”后获得人EGFR胞内酪氨酸激酶结构域蛋白。结果限制酶切分析和测序表明成功构建重组质粒pGEX/GST-EGFR-TKD;SDS-PAGE分析表明,异丙基硫代-β-D半乳糖苷诱导下可以表达融合蛋白GST-EGFR-TKD,但以不溶性包涵体的形式存在。经尿素变性、梯度透析复性及去除GST“标签”后,获得重折叠的人EGFR胞内酪氨酸激酶结构域蛋白。结论在大肠杆菌中可成功表达人EGFR胞内酪氨酸激酶结构域蛋白。
- 蔡志宇曲延征欧阳奇明黄晓晶陈泽辉
- 关键词：原核细胞谷胱甘肽转移酶质粒
- EGFR胞内酪氨酸激酶结构域在人肿瘤细胞中的稳定表达被引量：1
- 2006年
- 目的:探讨在人肿瘤细胞中稳定表达EGFR-TKD的方法。方法:采用磷酸钙共沉淀基因转染技术,将已构建的pEF-BOS/GST-EGFR-TKD质粒DNA与pBabe-puro质粒DNA共同导入体外培养的人非小细胞肺癌细胞系H1299中。加入嘌呤霉素,对转染的细胞加压筛选,以获得成功转染的细胞。免疫荧光法对重组质粒在H1299中的表达水平及定位进行检测。结果:经嘌呤霉素筛选,8d后对照组细胞全部死亡。转染组部分细胞存活,形成单克隆集落,经多次传代培养后,荧光显微镜下观察见多数集落的细胞胞质内表达GST-EGFR-TKD。结论:通过磷酸钙共沉淀法可成功转染H1299细胞,获得稳定表达EGFR-TKD的人肿瘤细胞。
- 蔡志宇曲延征欧阳奇明黄晓晶陈泽辉
- 关键词：表皮生长因子受体人肿瘤细胞体外转染
