国家科技支撑计划(2007BAD86B04)
- 作品数：6 被引量：26H指数：3
- 相关作者：刘业兵张晓杰朱向博汤德元王晶钰更多>>
- 相关机构：中国兽医药品监察所西北农林科技大学贵州大学更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划国家自然科学基金贵州省农业攻关项目更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 猪流感H1N1亚型病毒dM2蛋白的原核表达及鉴定
- 2012年
- 为构建猪流感病毒H1N1亚型dM2蛋白的原核表达系统,获得具有生物活性的GST-dM2重组蛋白。研究从H1N1亚型猪流感病毒核酸中克隆出M2全长基因,采用OE-PCR技术得到缺失跨膜区的M2基因(dM2),构建重组表达质粒pGEX-6p-dM2,转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导表达后,进行GST亲和层析柱纯化和Western-blotting鉴定。结果表明GST-dM2融合蛋白在大肠杆菌BL21中获得较高表达,并以可溶形式存在,表达量为22.75%。纯化后的GST-dM2重组蛋白为38 kD,经Western-blotting证明具有良好的反应原性。GST-dM2重组蛋白的成功获得,为进一步研究猪流感亚单位疫苗奠定了基础。
- 孙跃辉刘业兵黄金海王芳张晓杰宁宜宝
- 关键词：猪流感病毒原核表达
- 猪细小病毒和猪圆环病毒2型二重液相芯片检测方法的建立被引量：5
- 2012年
- 作者拟建立检测猪细小病毒(PPV)和猪圆环病毒2型(PCV2)的二重液相芯片(xMAP)检测方法,以满足出入境检疫和临床高通量检测的要求。依据GenBank中PPV结构蛋白VP2基因及PCV2全基因序列,设计PPV和PCV2特异性探针、引物及探针互补序列,将探针与磁性微球偶联,对下游引物和探针互补序列标记生物素,采用不对称性二重PCR扩增靶序列,将PCR产物与偶联好的探针进行杂交,用液相芯片仪进行检测。通过对检测条件优化,建立检测PPV、PCV2两种病毒的二重液相芯片技术,并对临床样本进行检测。建立的PPV和PCV2二重液相芯片检测方法,特异性良好,该方法对PPV和PCV2基因拷贝数检测下限分别为1.53×104、2.58×102;对56份临床样品检测表明,该方法与单项PCR检测结果符合率为100%。成功建立了PPV、PCV2二重xMAP检测方法,该检测技术可用于出入境检疫和兽医临床检验。
- 王晶钰朱向博刘业兵韩雪清王慧煜张丽张磊张晓杰唐攀
- 关键词：猪细小病毒猪圆环病毒2型
- 猪细小病毒和猪源脑心肌炎病毒的二重PCR检测方法的建立被引量：2
- 2012年
- 试验旨在建立能同时检测猪细小病毒(porcine parvovirus,PPV)和猪源脑心肌炎病毒(encephalomyocarditis virus,EM-CV)的二重PCR检测方法。根据GenBank中PPV VP2基因和EMCV 3D基因序列,利用Premier 5.0软件设计出PPV和EMCV的特异性引物。通过优化反应条件,建立了能同时特异性检测PPV和EMCV的二重PCR方法,PPV和EMCV的敏感性检测极限分别达7.62和1.22×10-1pg/μL。通过对临床36份样品的检测结果表明,该二重PCR检测方法敏感、特异,适合于临床检测应用。
- 朱向博刘业兵王晶钰张晓杰梁耀峰王利勤董睿陈婷李成山
- 关键词：PPVEMCV二重PCR
- 猪捷申病毒HB株的分离与全基因序列分析被引量：9
- 2012年
- 为分析河北省某规模化猪场猪捷申病毒(PTV)的遗传变异和进化关系,作者成功分离到PTV HB株,对其进行了毒力测定和动物回归试验,设计引物进行了全基因序列测定,并与国内外42株PTV全基因序列进行了同源性比较。结果表明猪捷申病毒HB株病毒滴度为10-6.4 TCID50.mL-1,健康仔猪接毒28d后均出现明显猪捷申病症状,该毒株全基因组序列长度为7 090bp。系统进化树分析表明,猪捷申病毒HB株(JQ664746)属于PTV-8型血清型,和国内分离的PTV-jilin/2003株(GQ293092)同源性最高,从而为进一步研究该毒株的遗传变异提供参考。
- 张晓杰刘业兵汤德元朱向博
- 关键词：病毒分离全基因序列分析
- PRRSV和PCV-2二重PCR检测方法的建立及初步应用被引量：7
- 2010年
- 参考GenBank上已发表的猪繁殖与呼吸综合征病毒Nsp2基因序列和猪圆环病毒2型ORF1基因序列,分别设计并合成了可用于检测猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪圆环病毒2型的2对引物,扩增目的片段大小分别为421 bp和714 bp。在建立了用于检测猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪圆环病毒2型的单项PCR检测方法并优化单项PCR条件的基础上,建立了针对两种病毒的二重PCR检测方法。通过检测143份临床病料对二重PCR方法和单项PCR/RT-PCR方法进行了对比验证。结果显示,两者的总符合率在92.6%以上,表明该二重PCR检测方法可以用于临床病料的检测。
- 王林吴发兴吴美芹高许雷李平朱紫祥张燕霞张志李晓成单虎
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒猪圆环病毒2型二重PCR
- 猪捷申病毒与猪圆环病毒2型双重PCR检测方法的建立及初步应用被引量：3
- 2012年
- 为建立可同时检测猪捷申病毒(PTV)与猪圆环病毒2型(PCV2)的双重PCR方法,本研究根据GenBank登录的相关病毒基因序列,选择保守区域设计引物,经过反应条件的优化,建立了可同时检测以上2种病毒的PCR诊断方法,扩增片段长度分别为187 bp(PTV)、120 bp(PCV2)。通过实验证明该方法具有良好的特异性和较高的敏感性,对PTV、PCV2核酸检测最低浓度分别为2.8×10-2 ng和6.6×10-3 ng。应用该方法对43份临床样品进行检测发现,PTV阳性率为23%,PCV2阳性率为38%,PTV与PCV2共感染率为16%。该方法的成功建立,为快速高效地检测以上2种病毒提供有力手段。
- 张晓杰刘业兵汤德元李春燕曾智勇朱向博周莉王凤甘振磊
- 关键词：猪捷申病毒猪圆环病毒2型双重PCR
