海南省自然科学基金(312087)
- 作品数：3 被引量：5H指数：1
- 相关作者：喻达辉黄桂菊范嗣刚毕晓敏朱文杰更多>>
- 相关机构：上海海洋大学中国水产科学研究院南海水产研究所中国水产科学研究院更多>>
- 发文基金：国家现代农业产业技术体系建设项目中央级公益性科研院所基本科研业务费专项海南省自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 合浦珠母贝表皮生长因子样(EGF-like)基因的克隆与表达分析被引量：4
- 2015年
- 为探究表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)在合浦珠母贝幼体发育以及组织生长过程中的作用,实验通过RACE技术克隆了合浦珠母贝EGF-like基因并做了相应的表达分析。实验结果获得c DNA全长序列4 107 bp,命名为Pf-egf1,开放阅读框(ORF)702 bp,编码234个氨基酸,包含一个信号肽序列和一个跨膜结构域,功能结构域分析发现Pf-egf1具有一个EGF-like结构域,有6个半胱氨酸残基,由3个二硫键维持,是表皮生长因子家族及其相关蛋白的特征结构域,但其余序列与现有相关基因序列差异较大,推测可能是一个新的EGF-like基因。表达结果显示,Pf-egf1 mRNA在合浦珠母贝外套膜、闭壳肌、鳃、肝胰腺、珍珠囊、肠和性腺中均有表达,在肠中的表达显著高于其他组织;在合浦珠母贝幼体发育的担轮期、D型期、壳顶期、眼点期和变态期的表达呈现逐渐升高的趋势,并且其在变态期的表达量极显著地高于其他时期。上述结果表明,Pf-egf1基因可能在合浦珠母贝肠道修复和幼虫变态发育阶段起着重要作用,为进一步开展育珠与生长调控奠定了基础。
- 朱文杰黄桂菊张东玲范嗣刚刘宝锁毕晓敏喻达辉
- 关键词：合浦珠母贝表皮生长因子基因克隆表达谱
- 合浦珠母贝矿化基因Pearlin重组蛋白的表达条件优化被引量：1
- 2015年
- 为了获得稳定高表达的合浦珠母贝(Pinctada fucata)壳基质蛋白Pearlin基因的重组融合蛋白,该研究从合浦珠母贝外套膜总RNA中扩增得到Pearlin的c DNA,将其ORF克隆至原核表达载体p ET32a构建得到重组质粒p ET32a-Pearlin,并转化表达宿主菌大肠杆菌(E.coli)BL21(DE3),得到的原核重组融合蛋白p ET32a-Pearlin约为34.19 k D。对重组融合蛋白表达所需IPTG诱导浓度、培养温度、培养基pH及IPTG诱导时间、时机进行了优化。结果显示,IPTG浓度在0.6~1.4 mmol·L^(-1)范围内诱导效果最佳;在IPTG终浓度为1 mmol·L^(-1)、相同培养时间(6 h)下,37℃表达蛋白最多;重组蛋白在p H分别为6.0、7.0、8.0的培养基中表达量变化不大;在IPTG诱导浓度一定的条件下,最佳诱导时间为4~6 h;在IPTG诱导浓度和诱导时间一定的条件下,在转接3~4 h后进行IPTG诱导蛋白表达量较理想。对重组融合蛋白p ET32a-Pearlin的可溶性进行检测,发现在不同的诱导条件下,融合蛋白都主要以包涵体形式存在。
- 毕晓敏黄桂菊范嗣刚朱文杰喻达辉
- 关键词：合浦珠母贝原核表达表达条件优化包涵体
- 养殖生态因子对合浦珠母贝α-淀粉酶基因表达的影响
- 2013年
- 运用实时荧光定量PCR技术对不同温度、盐度、饵料浓度及吊养水层下合浦珠母贝α-淀粉酶基因表达量进行了测定。结果表明,21℃时α-淀粉酶mRNA表达量最高,低于或高于此温度时,表达量均呈现下降趋势,且差异显著;α-淀粉酶mRNA相对表达量随盐度升高呈现先上升后下降的趋势,表达量最高值出现在盐度27时,并与其他各盐度间差异显著;饵料浓度从8×104cells/mL升高至20×104cells/mL的过程中,表达量呈现先下降后上升的趋势,浓度为16×104cells/mL时表达量最低;吊养深度对α-淀粉酶mRNA相对表达量影响较大,浅水层(1、2、3 m)低于深水层(4、5 m),且差异极显著。
- 李璐甄昕黄桂菊薛桂英范嗣刚刘宝锁喻子牛喻达辉
- 关键词：合浦珠母贝Α-淀粉酶基因表达饵料浓度
