国家自然科学基金(30973285)
- 作品数：6 被引量：7H指数：3
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- 喉黏膜间充质干细胞的分离培养及鉴定被引量：3
- 2011年
- 目的探讨喉部黏膜固有层中是否存在间充质干细胞（mesenchymal stem cells，MSC），并对其进行分离培养及鉴定。方法从喉部手术患者切下的组织中获取正常喉黏膜，消化培养法获得固有层来源的细胞，绘制细胞生长曲线观察其增殖情况，采用平板克隆形成实验获得多个不同形态的细胞克隆并计算其克隆形成能力。利用流式细胞仪对培养的第4代细胞进行表面标志物的分析；采用成脂、成骨、成神经诱导液对其进行多项分化能力的研究。结果经上述方法获得的喉黏膜MSC具有较快的增殖能力和较高的克隆形成能力（克隆形成率为7．1％）；高表达间充质的表面标志物CD29（16．9％）、CD44（97．4％）、CD90（89．5％）、CD105（85．9％）、CD146（2．5％）、stro-1（20．4％），不表达造血系的表面标志物CD34（1．2％）、CD45（0．8％）。在体外分别经成脂、成骨和成神经诱导分化后，油红O染色阳性，茜素红染色阳性，神经细胞特异性抗原S100呈阳性表达，提示喉黏膜MSC可向脂肪、骨骼和神经细胞分化。结论喉黏膜固有层中可分离得到具有快速增殖能力及多向分化潜能的MSC。
- 刘阳梁强梁媛媛邓志宏
- 关键词：喉黏膜间质干细胞细胞分化
- 声带组织切片方法的比较
- 2012年
- 目的:探讨犬声带冠状位切片与水平位切片各自的特点,为声带实验提供合适的切片方法。方法:家犬4只,2只取材后行冠状位石蜡切片,2只取材后行水平位石蜡切片。通过HE染色观察声带固有层的一般组织结构,Masson三色染色观察固有层中胶原的排列情况。结果:HE染色示冠状位、水平位切片均可见声带表面被覆复层鳞状上皮,固有层内有大量排列紧密的纤维组织,纤维组织中夹杂少量腺体,固有层下方为肌层。冠状位切片可观察声带某一点冠状面固有层的情况,若观察整个声带的情况需声带连续切片;水平位切片可在一张切片中观察到前联合、声带膜部及声带突部位的固有层情况,解剖标志明显,利于定位。Masson三色染色示冠状位、水平位切片均可见固有层浅层有较细的胶原纤维束,中层有较粗的纤维束与较细的纤维束交织排列,深层纤维束排列更紧密。结论:冠状位切片可观察声带某一点冠状面固有层的整体情况,水平位切片可在一张切片中观察到前联合、膜部及声带突部位的固有层情况。
- 韩鹏赵昱王延辉梁媛媛刘阳杨润琴邓志宏
- 关键词：声带MASSON三色染色
- 比格犬会厌黏膜来源干细胞的分离培养与生物学特性鉴定
- 2013年
- 目的:探讨建立喉部黏膜间充质干细胞的分离培养方法,并对其生物学特性进行鉴定,为进一步研究其在喉部瘢痕中形成的作用及喉部组织工程提供参考。方法:以比格犬喉部会厌背侧(舌面)黏膜为研究对象,采用消化培养的方法分离具有间充质干细胞样细胞。选取第3代细胞对其进行生物学特性鉴定,首先利用MTT法检测其增殖活性及克隆形成情况,然后通过流式细胞术检测细胞表面分子标记物CD29及CD34的表达情况,最后应用第3代细胞对其进行成脂肪细胞和成骨细胞分化培养,观察其分化能力。结果:分离培养细胞形态较为一致,绝大多数呈梭形,排列不规则。MTT增殖活性实验及克隆形成试验结果显示,所分离的细胞具有良好的增殖活性和克隆形成率;流式细胞术结果显示,该细胞表达CD29间充质干细胞细胞表面标记物,低表达造血干细胞细胞表面标记物CD34;同时,该细胞诱导分化成脂肪细胞和成骨细胞实验表明,其具有多向分化潜能。结论:从比格犬会厌背侧黏膜分离的细胞具有间充质干细胞样特性,为进一步研究喉部瘢痕形成机制及喉部组织工程提供了技术基础。
- 梁媛媛韩鹏杨润琴刘阳邓志宏
- 关键词：间充质干细胞生物学特性
- 不同部位喉黏膜间充质细胞的分离培养被引量：3
- 2011年
- 目的:探讨不同部位喉黏膜间充质细胞的分离、培养方法,为喉部组织工程提供更多的可供选择的种子细胞。方法:收集临床上喉部手术病人切下的不同部位的喉黏膜,主要是会厌的背侧黏膜和声带的黏膜,各3例,共计6例。对会厌背侧的黏膜采用消化培养的方法,对声带部位的黏膜采用组织块培养法。最后通过免疫荧光染色对两种方法所获得的细胞进行鉴定,确定其来源于喉黏膜的间充质。结果:通过两种方法均可以成功获得相应部位的细胞,免疫荧光染色vimentin均呈阳性表达且CK均呈阴性表达,证明了获得的细胞确实是来源于间充质。结论:本实验成功的培养出了喉部不同部位的间充质细胞,为喉部的组织工程提供了更多的可供选择的种子细胞。
- 刘阳韩鹏梁媛媛邓志宏
- 关键词：喉黏膜间充质细胞
- 犬声带激光损伤模型的建立及意义
- 2012年
- 目的建立支撑喉镜下犬声带激光损伤模型,观察其声带损伤愈合的大体形态学及组织学变化,为研究声带损伤后的修复提供动物模型。方法选用中华田园犬5只,4只于支撑喉镜下以半导体激光损伤双侧声带膜部中后1/3,深达甲杓肌,1只犬未行任何处理作为对照组。分别在术后4d、2、4及8w于支撑喉镜下观察声带大体形态改变后,各处死1只犬取声带损伤部位组织,通过HE染色、Masson三色染色、EVG染色、爱先蓝染色及免疫组化染色观察声带固有层胶原、弹力纤维、透明质酸(HA)及纤维连接蛋白(fibronectin)含量及分布的变化。结果术后4d支撑喉镜下见犬双侧声带充血水肿,组织切片示上皮未被覆固有层,损伤处大量炎性细胞侵润,固有层、肌层结构混乱不清;2w时喉镜下见声带充血水肿较前减轻,切片示受损部位上皮完全被覆,炎性细胞较前减少,胶原增生并排列紊乱,弹力纤维含量减少,HA含量下降,纤维连接蛋白含量增加;4w时喉镜下见声带炎症反应基本消失,受损部位表面不规则,瘢痕形成,切片示受损部位固有层被致密的纤维组织所替代,胶原含量持续增加,弹力纤维含量略下降,HA含量持续下降,Fibronectin含量持续增加;8w时喉镜下仍可见声带瘢痕,损伤处局部萎缩,切片示胶原呈粗大条索状,弹力纤维含量趋于稳定,HA含量下降,Fibronectin含量略上升。结论半导体激光可造成犬声带膜部热损伤模型,损伤后声带固有层内大量纤维组织形成,胶原含量上升,弹力纤维含量降低,HA含量降低,为研究声带损伤修复提供了可靠的动物模型。
- 韩鹏梁媛媛赵昱刘阳杨润琴邓志宏
- 关键词：声带动物模型支撑喉镜
- 脂肪干细胞复合脱细胞真皮基质用于声带注射的实验研究被引量：3
- 2011年
- 目的 探索脂肪干细胞（adipose-derived stem cell,ASC）与脱细胞真皮基质微粒（micronized acellular dermal matrix,MADM）复合培养后用于声带内注射的可行性.方法 体外分离培养兔ASC,取第3代细胞,用细胞膜红色荧光探针（DiI）标记,并与已制备好的MADM复合培养,形成细胞和材料复合体,应用荧光显微镜、扫描电镜了解ASC黏附材料情况,四唑类化合物3-（4,5-dimethylthizazol-2-yl）-5-（3-carboxymethoxyphenyl）-2-（4-sulfonyl）-2H-tetrazolium,inner salt（MTS）比色法检测细胞增殖情况.ASC-MADM复合体培养3 d后与适量胶原混合后注入异体兔单侧声带内,术后2、4、8周内镜观察,并分别处死动物,检测ASC在声带中存活、分布情况.结果 MADM所含胶原纤维松散、多孔隙,具有良好三维结构;ASC可黏附其生长并能不断增殖,与没有复合MADM的对照组比较细胞增殖水平差异有统计学意义（P值均＜0.05或＜0.01）.ASC-MADM复合体注入兔声带肌后均存活良好,连续内镜观察、冰冻切片、HE染色显示声带局部无不良反应,ASC-MADM复合体在兔声带内基本无炎症细胞浸润,ASC可在声带内存活8周.结论 MADM是较理想的细胞支架材料,ASC能黏附MADM生长并增殖.ASC-MADM复合体异体动物声带内注射可存活且无不良反应.
- 梁强刘阳邓志宏李晓冰李晓峰赵昱梁媛媛金岩
- 关键词：脂细胞声带
