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转基因生物新品种培育专项(20092X08010-022B)
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相关作者:
马志永
邱亚峰
史子学
赵福广
王晓杜
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相关机构:
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发文基金:
转基因生物新品种培育专项
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甲型H1N1流感病毒HA基因在昆虫细胞中的截短表达
2011年
目的:利用Bac-to-Bac Baculovirus Expression System表达重组HA蛋白,Western blot及IFA方法鉴定其表达。方法:采用PCR方法扩增A/California/04/2009(H1N1)HA基因,将其克隆到pFastBacHT A载体上,重组质粒pFastBacHT-HA经双酶切及测序鉴定正确后,转化阳性重组载体进入E.coli DH10Bac感受态细胞中,通过Bluo-gal蓝白斑筛选、PCR鉴定获得重组转座子rBacmid-HA。从重组转座子中提取rBacmid-HA质粒DNA转染sf 9昆虫细胞,制备重组杆状病毒。重组杆状病毒感染sf 9细胞表达重组蛋白,Western blot及IFA鉴定重组蛋白表达情况。结论:成功构建了甲型H1N1流感病毒HA基因的昆虫杆状病毒表达载体,该表达载体转染昆虫细胞后制备的重组杆状病毒病毒滴度较高,重组杆状病毒表达的重组蛋白经Western blot及IFA鉴定后具有良好的免疫反应原性。
贾园
沈阳
邱亚峰
史子学
邵东华
王晓杜
邓绪芳
王皓婷
赵福广
马志永
关键词:
H1N1
BAC-TO-BAC
BACULOVIRUS
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