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长江学者和创新团队发展计划(PC-SIRT0459)
作品数:
1
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相关作者:
曲璇
张健
申亮亮
陈苏宁
刘新平
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相关机构:
第四军医大学
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发文基金:
陕西省自然科学基金
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作者
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林伟
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赵华栋
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吴琳
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陈苏宁
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2008
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Sp1基因RNA干扰载体的构建及鉴定
被引量:2
2008年
目的:构建干扰载体pSilencer3.1-Sp1,并初步研究其对Sp1基因的干扰作用。方法:根据Sp1cDNA编码序列,设计并合成针对Sp1基因的特异性RNA干扰片段,并将其克隆入pSilencer3.1-H1neo干扰载体中,构建Sp1基因小干扰RNA(siRNA)真核表达载体pSilencer3.1-Sp1;分别将阴性对照载体pSilencer3.1与重组载体pSilencer3.1-Sp1经脂质体LipofectAMINE2000介导转染HeLa细胞,采用RT-PCR、Western blot方法分别检测Sp1基因的转录与表达水平。结果:构建了Sp1基因siRNA真核表达载体pSilencer3.1-Sp1,经酶切、测序鉴定证实克隆正确,并在mRNA水平和蛋白水平证实了载体的干扰效果。结论:特异性siRNA能明显抑制Sp1基因在HeLa细胞中的表达,为进一步研究Sp1的生物学功能和作用机制奠定了实验基础。
曲璇
陈苏宁
吴琳
申亮亮
林伟
赵华栋
刘新平
张健
关键词:
RNA干扰
小干扰RNA
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