广东省自然科学基金(10151018201000018)
- 作品数：3 被引量：7H指数：2
- 相关作者：陈伟燕张振辉江子欣熊旭明杨其霖更多>>
- 相关机构：广州医科大学广州医学院第二附属医院更多>>
- 发文基金：广东省自然科学基金广州市医药卫生科技项目广东省科技计划工业攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- MicroRNA-29a在脂多糖诱导人单核细胞凋亡中的作用和机制被引量：3
- 2013年
- 目的探讨microRNA-29a（miR-29a）对人单核细胞株THP-1凋亡的作用及其机制。方法体外培养人单核细胞株THP-1和人胚肾细胞株293T，合成人miR-29a的拟似物（mimic）和抑制剂（inhibitor）。用脂质体LipofectamineRNAiMAX转染miR-29a的mimic或inhibitor进入THP-1细胞，分组处理后收集细胞标本。第1组细胞转染mimic（100nmol／L）48h；第2组细胞先转染inhibitor（100nmolfL）24h，再用脂多糖（LPS）诱导24h，分别用流式细胞仪方法检测两组细胞凋亡，用realtimeRT—PCR方法检测抗凋亡基因Bcl-2和Mcl-1的表达变化。构建Bcl-2和Mcl-1的荧光素酶报告基因载体，用脂质体Lipofectamine2000转染293T细胞（DNA质粒和miRNA片段共转染），双荧光素酶报告基因系统（1uciferase）检测荧光素酶的表达变化。应用SPSS13．0统计软件，采取单因素方差分析或￡检验进行数据统计分析。结果THP-1细胞转染miR-29a的mimic48h后，细胞凋亡较对照组增加（17．38％增加至42．06％）；单独用LPS诱导THP-1细胞，24h后细胞凋亡较对照组增加；THP-1细胞先转染inhibitor24h后，再用LPS诱导24h，细胞凋亡较单独用LPS诱导组减少（由51．50％降至38．09％）；THP·1细胞转染miR-29a的mimic后，抗凋亡基因Bcl-2和Mcl-1的表达水平降低明显（P〈0．05）。另外，Luciferase检测结果显示，在293T细胞中，双萤光报告系统显示miR-29a可特异抑制带有Bcl-2和Mcl-13’UTR上野生型识别元件的报告基因表达（P〈0．05）。结论上调miR-29a的表达水平能促进THP-1细胞发生凋亡，下调miR-29a的表达水平则能抑制LPS诱导的THP-1细胞凋亡，miR-29a调控THP-1的凋亡水平是通过靶向于两个抗凋亡基因Bcl-2和Mcl-1实现的，提示miR-29a在调控免疫细胞的凋亡过程中具有重要的作用。
- 熊旭明张振辉江子欣陈伟燕杨其霖刘卫江
- 关键词：单核细胞脂多糖凋亡BCL-2基因MCL-1基因
- 微小RNA-141对人单核细胞合成高迁移率族蛋白B1的调控作用被引量：2
- 2013年
- 目的探讨微小RNA-141（miR-141）对人单核细胞株THP-1高迁移率族蛋白B1（HMGBl）表达的调控作用。方法体外培养THP-1细胞，化学合成人miR-141的拟似物和抑制剂。用脂质体Lipofe伽t。mineRNAiMAX转染miR-141的拟似物或抑制剂进入THP-1细胞，转染48h后分别用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）和蛋白质免疫印迹试验（Western blotting）检测HMGBl的mRNA和蛋白表达。结果转染100nmol／LmiR-141拟似物后，可提高THP-1细胞miR-141的表达水平（35．33±7．24比1．21±0．20，t=-8．408，P=0．010）；转染100nmol／LmiR-141抑制剂后，可抑制THP-1细胞miR-14l的表达水平（0．55±0．12比1．09±0．05，t=7．473，P=0．002）。与相应对照组比较，THP-1细胞在过表达miR-141后，HMGBI的mRNA和蛋白表达明显下调（mRNA：0．43±0．06比0．97±0．08，t=9．760，P=0．001；蛋白：0．63±0．12比1．00±0．11，t=2．991，P=0．040）；而抑制THP—1细胞中miR-141后，HMGBl的mRNA和蛋白表达均明显上调（mRNA：2．13±0．11比1．16±0．13，t=-9．977，P=0．001；蛋白：1．78±0．04比0．96±0．09，t=-13．778，P=0．000）。结论miR-141能调控人单核细胞HMGBl的表达水平，提示miR-141在调控免疫细胞的炎症反应过程中具有重要的作用。
- 张振辉陈晓辉江子欣陈伟燕熊旭明
- 关键词：微小RNA炎症因子高迁移率族蛋白B1
- miR-142-3p对THP-1细胞释放炎症因子的调控作用被引量：2
- 2014年
- 目的探讨miR-142-3p对人单核细胞株THP-1释放炎症因子的调控作用。方法体外培养人单核细胞株THP-1,(1)以不同浓度(0.5和2.0μg/mL)脂多糖(LPS)诱导THP-1细胞24 h;(2)将miR-142-3p的拟似物(mimic,100 nmol/L)转染至THP-1细胞48 h;(3)先将miR-142-3p的抑制剂(inhibitor,100 nmol/L)转染至THP-1细胞24 h,再用不同浓度(0.5和2.0μg/mL)LPS诱导THP-1细胞24 h。处理后收集细胞培养液,用ELISA法分别检测THP-1细胞培养液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的释放量。结果 (1)两种浓度LPS诱导THP-1细胞后,TNF-α、IL-6和MCP-1的释放量均增加(P<0.01),并表现出LPS浓度依赖性,高浓度者释放量较低浓度者增加。(2)THP-1细胞转染miR-142-3p mimic 48 h后,TNF-α、IL-6和MCP-1的释放量增加(P<0.05,P<0.01)。(3)THP-1细胞转染miR-142-3p inhibitor 48 h后,再以0.5μg/mL LPS诱导后,IL-6的释放量减少(P<0.05)。结论 LPS能诱导THP-1细胞释放TNF-α、IL-6和MCP-1。过表达miR-142-3p能促进THP-1细胞释放TNF-α、IL-6和MCP-1。抑制THP-1细胞miR-142-3p的表达可减少LPS诱导的IL-6释放。miR-142-3p参与调控THP-1的炎症因子释放,提示miR-142-3p在调控免疫细胞的炎症反应过程中具有重要的作用。
- 张振辉江子欣杨其霖陈伟燕熊旭明
- 关键词：内毒素脂多糖微小RNA炎症因子单核细胞
