国家高技术研究发展计划(2007AA100606)
- 作品数：24 被引量：99H指数：5
- 相关作者：张改平李学伍杨苏珍陈陆杨继飞更多>>
- 相关机构：河南农业大学河南省农业科学院中国农业科学院哈尔滨兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家科技支撑计划郑州市科技领军人才培育计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学理学一般工业技术更多>>
- 光学表面等离子共振测定盐酸克伦特罗的试验研究被引量：10
- 2012年
- 为了实现高灵敏度定量检测盐酸克伦特罗,提出了一种新颖的、无标记、快速的内嵌TSPR1K23生物传感器的光学表面等离子共振(Surface plasmon resonance,SPR)盐酸克伦特罗测定方法,并通过试验验证了光学表面等离子共振生物测定装置的性能.光学表面等离子共振盐酸克伦特罗测定装置由集成光学SPR生物传感器、微流通池、便捷更换芯片的夹具、触电屏,USB接口板及光电转换电路板组成.在光学SPR芯片金膜表面固定盐酸克伦特罗抗原,在标准样品中(盐酸克伦特罗抗体质量浓度33.75 mg·L-1)分别添加0,10,20,40 mg·L-1的盐酸克伦特罗抗原,采用竞争免疫反应方法建立的盐酸克伦特罗测定标准曲线,相关系数0.997,相对标准偏差6.5%.
- 李会芹李遂亮李伟江敏魏文松胡枫江赵媛媛胡建东
- 关键词：盐酸克伦特罗生物传感器
- 猪伪狂犬病病毒野毒环媒恒温检测方法的建立及应用
- 环媒恒温检测方法(LAMP)是一种快速简便特异的检测方法,已广泛应用于多种细菌病和病毒病的检测。本实验成功建立了检测猪伪狂犬病病毒(PRV)野毒的LAMP检测方法。利用该方法所建立的反应体系在恒温65℃水浴锅中作用60 ...
- 张超范崔尚金刘杉杉胡泉博
- 关键词：猪伪狂犬病病毒
- 文献传递
- 改进的光学表面等离子共振角度光谱分析方法被引量：4
- 2009年
- 提出了一种新颖的最大响应差调制方法,从理论和试验方面对比分析了角度调制和最大响应差调制的灵敏度,可以实现快速寻找共振位点.结果表明,基于最大响应差的快速共振位点寻找方法,不仅共振位点获得时间大大缩短,而且还提高了光学表面等离子共振生物分析仪的灵敏度.
- 赵媛媛蒋国良高献坤胡建东胡敬芳张润娜汪兴莉
- 关键词：灵敏度
- 单抗介导的银加强金标免疫技术检测传染性支气管炎病毒被引量：2
- 2009年
- 利用胶体金标记纯化的羊抗鼠IgG，建立了一种银加强金标免疫技术（SECGA）检测IB抗原。检测抗原时先将抗原点样于硝酸纤维素膜（NCM）中央，封闭后浸于l：40IBV单抗中作用10min，洗涤后再浸于1：4金标羊抗鼠IgG液中作用1h，银染10min后观察，在膜上出现灰黑斑点的为阳性结果，反之，不出现斑点为阴性结果。SECGA对IB抗原最低检测量为0．703ng／点（2μL），对含毒尿囊液的最低检测量为10^2.9EID50，检测IBV M41在鸡胚中繁殖时以36-54h含毒量最高；检测SPF鸡气管粘液，至少于感染后3d内检出病毒。结果表明，SECGA检测抗原可用于IBV早期诊断，具有群特异性、快速、敏感、简便，不需特殊设备、结果易判定等优点，尤适于基层实验室或现场应用。
- 王新卫何宏轩王泽霖吴艳云王承民
- 关键词：传染性支气管炎病毒单克隆抗体胶体金
- 猪瘟兔化弱毒株E^(rns)基因在大肠埃希氏菌中的表达、纯化
- 2009年
- 将猪瘟兔化弱毒株Erns基因亚克隆到原核表达载体pGEX-6p-1中,经PCR和双酶切鉴定以及序列分析,表明已成功构建了重组质粒。将重组质粒转化到大肠埃希氏菌BL21(DE3)中进行表达,经SDS-PAGE和Western-Blot检测,结果表明,融合表达蛋白的分子量约为55kD,目的蛋白表达量占菌体总蛋白的45%。表达蛋白与兔抗CSFV多抗发生特异性反应,具有良好的反应原性。利用GST亲和层析柱对Erns融合蛋白进行了纯化。
- 王丽杨艳艳张红李清州李学伍张改平
- 关键词：猪瘟兔化弱毒原核表达纯化猪瘟
- 光学表面等离子共振生物传感检测系统检测雌二醇的研究
- 2012年
- 设计了一种基于光学表面等离子共振(Surface plasmon resonance,SPR)生物传感检测系统,该生物传感检测系统由集成光学SPR生物传感器、微流池、便捷更换芯片夹具、触摸屏、信号处理电路和USB接口板组成,将该系统用于检测环境刺激中的雌二醇.先在集成光学SPR生物传感器芯片的金膜表面固定雌二醇抗原,然后分别将质量浓度为25,50,100,200 mg.L-1的雌二醇抗原添加到标准质量浓度的样品中进行预反应,将反应后的溶液流过光学SPR生物传感器芯片表面,建立了雌二醇测定标准曲线,其相关系数为0.997 8.
- 魏文松穆琳瑛李会芹王顺李宏伟侯金博江敏胡建东
- 关键词：生物传感器环境雌激素雌二醇
- 猪伪狂犬病毒的增殖、纯化和鉴定被引量：8
- 2010年
- 以伪狂犬病毒(PRV)活疫苗Bartha弱毒株接种于幼仓鼠肾细胞(BHK-21)使其增殖,通过PCR方法鉴定了病毒。以组织细胞半数感染剂量(TCID50)对病毒效价进行了评定,利用蔗糖密度梯度离心法纯化了病毒。结果表明,培养的病毒滴度为103.25TCID50/mL,纯化后的病毒经SDS-PAGE电泳显示,获得了较纯的蛋白条带。
- 王大伟李学伍王丽史西保
- 关键词：伪狂犬病毒纯化
- 高致病猪繁殖与呼吸综合征病毒JXA1株Nsp2基因分段克隆表达及其单克隆抗体的制备被引量：4
- 2009年
- 分析猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)非结构蛋白Nsp2,扩增和克隆JXA1株Nsp2基因的4个片段,并将它们分别插入pGEX-6P-1表达载体构建重组表达质粒,经IPTG诱导表达得到蛋白,纯化后进行活性鉴定。以分段表达的蛋白为抗原,建立间接ELISA方法用于杂交瘤细胞株的筛选。用PRRSVNVDC-JXA1株灭活疫苗对BALB/c小鼠进行常规免疫,最后一次用活毒加强免疫,取其脾细胞与SP2/0细胞在聚乙二醇作用下融合,经过选择性培养、有限稀释筛选到1株针对Nsp2的杂交瘤细胞株6B8。鉴定结果表明,该株杂交瘤细胞仅与4个蛋白片段中的Nsp2F1有反应,细胞经长期体外培养和冻存后复苏能稳定分泌抗体,上清效价达1∶210,腹水效价达1∶106。本研究成功表达了4个PRRSV JXA1株的非结构蛋白Nsp2的片段,以其为抗原建立筛选方法,得到1株针对Nsp2的单克隆抗体,为研究Nsp2功能和建立相关诊断方法奠定物质基础。
- 胡鸿惠曹振赵铁柱王斌秦亚嫚杨璐王传彬陈西钊田克恭
- 关键词：NSP2单克隆抗体
- 猪口蹄疫O型合成肽疫苗抗原多肽的串联表达及活性鉴定
- 2011年
- 为获得含合成肽疫苗抗原多肽的重组表达蛋白,根据猪口蹄疫O型合成肽疫苗中抗原多肽的氨基酸序列,使用大肠杆菌偏好性密码子人工合成该抗原多肽的双拷贝基因序列,并克隆至表达载体pET32a中,构建原核表达质粒pET32a-P2。将重组质粒转化BL21(DE3),经IPTG诱导表达,收集诱导的菌液进行SDS-PAGE电泳和Western-blot分析。结果显示,在分子量27 kD处有1条明显的蛋白表达条带,且能被O型FMDV阳性血清识别。对表达产物进行可溶性分析,结果显示,表达蛋白几乎全部以可溶形式存在。表达蛋白经Ni-NTA树脂亲和纯化,SDS-PAGE显示纯化的目的蛋白在27 kD处有单一目的条带,具有较高的纯度。ELISA检测结果显示,纯化的重组蛋白具有较高的活性。结果表明,该抗原多肽的双拷贝串联重复序列在大肠杆菌中得到了可溶性高效表达,为开发诊断试剂和基因工程疫苗奠定了基础。
- 卢清侠郭军庆郝慧芳杨苏珍邢广旭杨继飞王世红张改平
- 关键词：猪口蹄疫合成肽疫苗抗原多肽蛋白纯化活性鉴定
- O型口蹄疫病毒VP1蛋白的原核表达及功能鉴定被引量：5
- 2009年
- 为获得具有免疫原性的FMDV VP1蛋白,以O型FMDV重组质粒PMD18T-VP1为模板,利用PCR技术扩增得到O型FMDVVP1基因片段,将此基因片段与原核表达载体pET32a连接,构建重组表达载体,命名为pET-VP1,经PCR和测序鉴定后,用IPTG诱导表达,收集诱导的菌液进行SDS-PAGE电泳和Western-Blot分析。结果显示,在分子量约为45 ku处有1条明显的蛋白条带,且能被口蹄疫阳性血清识别,表达产物通过包涵体纯化后用透析法复性;ELISA检测结果显示,所复性的蛋白具有较高的活性。结果表明,FMDV VP1蛋白在大肠杆菌中得到高效表达,为开发诊断制剂和疫苗的研制打下基础。
- 杨苏珍张改平鲍登克乔松林万博樊剑鸣职爱民李学伍
- 关键词：口蹄疫病毒VP1基因原核表达蛋白复性
