福建省杰出青年科学基金(2010J06012)
- 作品数：2 被引量：6H指数：1
- 相关作者：毛海燕曹敏杰刘光明蔡娜蔡秋凤更多>>
- 相关机构：集美大学更多>>
- 发文基金：福建省杰出青年科学基金国家自然科学基金厦门市科技计划项目更多>>
- 相关领域：生物学轻工技术与工程医药卫生更多>>
- 拟穴青蟹新型过敏原肌质钙结合蛋白的纯化、鉴定及分子克隆被引量：5
- 2014年
- 为进一步认识蟹类的过敏原,采用免疫印迹方法,分析发现甲壳类过敏患者血清能与拟穴青蟹肌浆蛋白中分子质量约为21 kD的蛋白质产生特异的IgE结合反应,结果显示该蛋白可能是蟹类新型过敏原。通过硫酸铵盐析、阴离子交换和凝胶过滤柱层析等方法对21 kD-蛋白进行分离纯化,采用Western blotting和基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(matrix assisted laser desorption ionization-time of flight-mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)确认纯化的21 kD-蛋白为肌质钙结合蛋白(sarcoplasmic calcium binding protein,SCP)。采用SMART-RACE(Switching Mechanism At RNA Termini-Rapid Amplification of cDNA Ends)的方法获得SCP的cDNA序列,该序列全长986 bp,开放阅读框为579 bp,编码193个氨基酸,其理论分子质量21.94 kD,等电点4.44。拟穴青蟹SCP与甲壳类动物SCP具有较高的同源性,与昆虫SCP的同源性较差;三级结构模拟分析显示,SCP含有5个螺旋-转角-螺旋结构区,即EF-手型结构区,并在其中两个手型结构区形成2个钙离子结合位点;进一步预测得到SCP的4个线性抗原表位和3个构象性抗原表位。
- 毛海燕蔡娜陈亨莉曹敏杰蔡秋凤刘光明
- 关键词：拟穴青蟹纯化质谱分析分子克隆生物信息学分析
- R-藻蓝蛋白的分离纯化及抗食物过敏活性研究被引量：1
- 2013年
- 为探究R-藻蓝蛋白抗过敏功效,以坛紫菜为原料,通过25%～35%硫酸铵盐析和DEAE-Sepharose Fast Flow、Sephacryl S-200 HR两步柱层析获得了高纯度的目的蛋白(A620/A280>6.0).SDS-PAGE显示,该蛋白质由分子质量为17.7 ku和20.5 ku的两个亚基组成,紫外可见分光光度法测得其在620 nm、555 nm有两个特征吸收峰,可确认其为R-藻蓝蛋白.热稳定性和pH值稳定性实验结果显示,R-藻蓝蛋白在低于35℃、pH=4.0～9.0条件下光谱性质相对稳定.动物实验结果表明,100μg/mL高纯度R-藻蓝蛋白能够显著降低小鼠血清中IgE水平;细胞实验结果表明,40μg/mL R-藻蓝蛋白能够降低细胞因子IL-4、IL-13的蛋白质分泌量;基因表达量分析结果显示,R-藻蓝蛋白能够降低IL-4在淋巴细胞中的表达量.可见,坛紫菜R-藻蓝蛋白通过促使CD4+T cell向TH1型转化发挥抗食物过敏活性.
- 王有朝曹敏杰苏文金张凌晶毛海燕时超岚刘光明
- 关键词：坛紫菜R-藻蓝蛋白食物过敏原肌球蛋白
