国家自然科学基金(30860193)
- 作品数：5 被引量：17H指数：2
- 相关作者：石国庆冯静杨华曾宪垠贾斌更多>>
- 相关机构：新疆农垦科学院石河子大学南京晓庄学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家现代农业产业技术体系建设项目国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 牛输卵管上皮细胞转人胶原蛋白cDNA基因及转基因克隆胚胎
- 2012年
- 以2岁奶牛输卵管为材料,用胰酶消化法分离得到了牛输卵管上皮细胞。输卵管上皮细胞在DMEM/F12培养基中生长良好。用一代牛输卵管上皮细胞为靶细胞,对其进行了电穿孔转染,转染对象是分子大小为31 085bp的以β-casein启动子为基础的含有人胶原蛋白cDNA基因和EGFP、Neor双标记基因的质粒。电穿孔试验发现,牛输卵管上皮细胞在低渗缓冲液中电转染可以获得阳性转染子,其中以90mOsm/kg为最佳。电压以800V为好,电压高和低都不利于电穿孔的成功。成功转染的细胞用800mg/L G418进行筛选,在10d后获得了较大的阳性细胞克隆簇。对获得的阳性细胞克隆簇进行扩大后,得到了较纯的阳性细胞克隆系,流式细胞仪检测其纯度为81.6%。在荧光显微镜下选择阳性细胞作为核移植供体细胞进行了转基因克隆试验,结果显示以转基因和非转基因细胞为核供体获得的重构胚融合率差异显著(51.9%比63.2%),获得的桑椹胚/囊胚率差异不显著(20.3%比25.5%)。对获得的具有绿色荧光的胚胎进行DNA分析,结果显示这些胚胎成功转入了外源基因,并且转入的外源基因结构完整。
- 吕自力王亮刘婷婷石国庆
- 关键词：输卵管上皮细胞电穿孔胶原蛋白转基因克隆
- 动物生物反应器研究进展被引量：4
- 2011年
- 用微生物、植物、动物、人细胞或者专一性酶,通过生物方法将原料转化为特定产品的容器称为生物反应器(Bioreactor).生物反应器的发展经历了三个阶段:细菌基因工程、细胞基因工程和转基因动物生物反应器.转基因动物生物反应器可以缩短重组蛋白的生产时间,具有很多优点,同时携带目的基因的阳性细胞克隆还可以长期冻存,长久作为核移植的供体,能够重复生产转基因动物.
- 石国庆朱汇万鹏程代蓉管峰
- 关键词：生物反应器转基因动物基因介导
- 基于TM影像光谱指数的棉花病害严重度估测被引量：9
- 2011年
- 通过获取多时相试验区TM影像和大田同步调查棉花黄萎病,将TM影像光谱指数与病害严重度进行相关分析,建立棉花病害严重度估测模型.结果表明:随着病害严重度的增加,TM影像光谱指数B2,B4,SATVI,OSAVI,MSAVI,TSAVI,SVNSWI,SNSWIa,SNSWIb,SVNI,DNSIa,DNSIb,NDSWIa,NDSWIb,RNSWIa,RNSWIb,DVNI,EVI,TVI,SAVI,DVI,NDVI,RVI和PVI逐渐减小,B1,B3,B7和RI逐渐增加,NDGI呈现先增后降的趋势,而B5呈现先降后增的趋势.病害严重度与TM影像光谱指数B1,B3和RI均呈极显著正相关,与B4,OSAVI,MSAVI,TSAVI,SVNSWI,SNSWIa,SNSWIb,SVNI,DNSIa,DNSIb,NDSWIa,NDSWIb,RNSWIa,RNSWIb,DVNI,EVI,TVI,NDGI,SAVI,DVI,NDVI,RVI和PVI均呈极显著负相关,与SATVI呈显著负相关,与B2,B5和B7均未达显著相关.建立的8个TM影像光谱指数估算棉花黄萎病模型均通过显著性检验,且以DVI和DNSIb为自变量的线性模型精度最高,表明利用多时相TM卫星影像光谱指数进行棉田病害定量诊断是可行的.
- 陈兵李少昆王克如苏毅陈江鲁金秀良吕银亮刁万英
- 关键词：棉花TM影像光谱指数
- 睾丸和卵巢打点注射pIRES2-EGFP质粒生产转基因兔的研究(英文)被引量：2
- 2010年
- 为探讨直接用注射器对睾丸和卵巢打点注射pIRES2-EGFP质粒转染兔的精子细胞和卵母细胞,建立操作方便、效率高、成本低、可批量生产转基因兔的可行性。选择5只成年新西兰雄兔、29只经产新西兰雌兔,每侧睾丸和卵巢内分别打点注射0.5~0.8 mg/mL质粒0.25 mL。①第3周随机取一只雄兔睾丸做冰冻切片,于荧光显微镜下观察转染情况。②（Ⅰ：1#♂×7♀、Ⅱ：2#♂×7♀、Ⅲ：3#♂×7♀、Ⅳ：4#♂×7♀）其它雄兔于第6周和第7周与3日前做过卵巢注射并超排处理的雌兔配种,最后采集新生仔兔耳组织,提取基因组DNA,经PCR和Southern杂交检测阳性率。结果显示雄兔睾丸冰冻切片于荧光显微镜下可见绿色荧光,统计所得后代转基因阳性率,并进行差异分析,其中Ⅰ组后代阳性率最高,PCR和Southern杂交检测阳性率为93.55%和83.87%,Ⅳ后代阳性率最低,依次为80.65%和70.97%,但是各组之间差异不显著。上述实验结果表明,对睾丸和卵巢同时注射外源基因可获得较高阳性率的转基因后代,生产转基因的方法操作简便、高效,为日后大规模制备一些大型家畜的转基因后代奠定了基础。
- 宋天增冯静曾宪垠杨剑波杨华张红琳杨井泉韩猛立贾斌赵宗胜石国庆
- 关键词：转基因兔
- 用注射器直接对睾丸打点注射EGFP生产转基因兔的试验研究被引量：2
- 2010年
- 为探讨直接用1 mL注射器对睾丸打点注射pIRES2-EGFP建立操作方便、效率高、成本低、可批量生产转基因兔的可行性。选择4只成年新西兰雄兔,双侧睾丸内分别打点注射0.5～0.8 mg/mL浓度的质粒0.25 mL,第3周和第8周分别取4^#和3^#雄兔睾丸做冰冻切片,置荧光显微镜下观察是否发绿色荧光。其它雄兔于第3周开始参与配种,最后采新生仔兔耳组织提取其基因组进行PCR和Southern杂交检测阳性率。结果表明,雄兔睾丸冰冻切片于荧光显微镜下可见绿色荧光,PCR和Southern杂交检测表明在睾丸注射后的第6周和第7周进行配种所得后代阳性率最高。不同雄兔后代经PCR和Southern杂交检测平均阳性率存在差异（P〈0.05）,2^#雄兔后代平均阳性率达到56.46%,3^#雄兔的最低达36.96%的阳性率。表明用注射器直接对睾丸打点注射外源基因生产转基因的方法操作简便、高效,为大规模制备一些大型家畜的转基因后代奠定了基础。
- 宋天增冯静曾宪垠杨剑波杨华皮文辉张红琳贾斌赵宗胜郭延华石国庆
- 关键词：转基因兔转基因
