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利用TMT标记结合2D LC-MS/MS技术分析不同时期水牛睾丸曲精细管差异蛋白质组被引量：3: 2014年; 旨在采用TMT标记结合二维高效液相色谱/串联质谱联用的技术对不同时期水牛睾丸曲精细管的差异蛋白质组进行分析。分别提取不同时期(幼年期、老年期)水牛睾丸曲精细管总蛋白,TMT试剂标记后进行强阳离子交换柱分离多肽、nano LC分离,同时在线连接电喷雾串联(rbitrap质谱进行分析,通过SEQUEST软件搜库并对鉴定的差异蛋白数据进行生物信息学分析。结果表明:共筛选出定量差异倍数≥2倍的差异蛋白89个,以幼年期水牛睾丸曲精细管作为对照,上调蛋白质51个,下调蛋白质38个。生物信息学分析表明,TMT标记技术结合二维液相色谱串联质谱可以对不同发育时期水牛睾丸曲精细管蛋白进行有效地分离和鉴定。本研究结果为探索精子发生过程中蛋白质表达的变化规律提供了试验依据,找出可能与精子发生相关的标志性蛋白:谷胱甘肽S转移酶P(GSTP1)、过氧化氢酶(CAT)、热休克蛋白(HSP90AA1和HSPA)。; 黄愉淋付强黄德伦潘宏黄凤玲梁贤威张明; 关键词：蛋白质组

利用MALDI-TOF质谱比较水牛卵泡液多肽变化的研究被引量：2: 2012年; 为检测卵泡内小肽的表达,采用基质辅助激光解离串联飞行时间质谱(MALDI-TOF/TOF MS)建立了成熟卵泡液的多肽表达模型,比较小卵泡(直径<4mm)、中等卵泡(直径4～8mm)和成熟卵泡(直径>8mm)的多肽表达变化。结果表明,3种形态的卵泡液存在12个显著差异多肽,其中在成熟卵泡内上调6个,下调有5个;在中等卵泡内上调4个,下调5个。其中分子质量约为1746u的多肽在成熟卵泡中特异性表达,可作为卵泡成熟的潜在生物标志物之一。; 付强刘振方杨丽张明卢克焕; 关键词：水牛卵泡液 MALDI-TOF 多肽特异性表达

水牛精子蛋白质组双向电泳体系的建立和优化被引量：5: 2012年; 建立和优化一种适合水牛精子蛋白质组学研究的双向电泳技术。以水牛精子为研究对象,比较两种不同配方的裂解液,以及不同上样量对其2-DE图谱质量的影响。结果显示,以7 mol/L尿素、2 mol/L硫脲、4%CHAPS、1%DTT、0.5%Cocktail of protease inhibitors为裂解液,24 cm胶条上样量200μg时,可获得较好的精子总蛋白质2-DE图谱。运用ImageMaster 2-Dplatinum分析软件检测出约500个蛋白质点,蛋白质大部分分布在等电点5-7之间,分子量范围约40-90 kD。; 薛雯杨丽付强刘振方张明卢克焕; 关键词：水牛精子双向电泳蛋白质组学

去除高丰度蛋白质后水牛卵泡液的双向电泳差异分析被引量：4: 2014年; 以广西沼泽型水牛卵泡液为研究对象,用试剂盒免疫去除成熟及未成熟水牛卵泡液高丰度蛋白质后,采用已建立并优化的双向电泳体系对卵泡液蛋白质样品进行分离。软件分析发现,21个差异表达蛋白质与成熟卵泡液相比,10个蛋白质点表达上调,7个蛋白质点表达下调,3个蛋白质点缺失,1个蛋白质点在水牛未成熟卵泡液中特异性表达。经质谱分析,最终鉴定出3个蛋白质点:硫酸化糖蛋白、转铁蛋白和触珠蛋白。该研究成功分离并鉴定的水牛卵泡液差异蛋白质,为揭示水牛卵母细胞发育的微环境及其成熟机制提供试验依据。其中转铁蛋白对于水牛卵泡液的发育成熟具有十分重要的促进作用,而其它2个蛋白质对水牛卵泡液的成熟相关机制还尚未清楚,有待于进一步的试验研究。; 黄愉淋付强黄德伦陈富美黄凤玲梁贤威张明卢克焕; 关键词：差异蛋白质组双向电泳质谱鉴定

水牛卵泡液液相色谱分离及差异蛋白质分析被引量：1: 2012年; 本研究采用液相色谱-质谱分离鉴定技术,比较不同直径卵泡液(直径<2mm、直径2～4mm、直径>4mm)的蛋白质组分差异,收集显著差异的馏分,还原烷基化处理后酶解成肽段,再经反相色谱二次分离后质谱鉴定。结果表明,在优势卵泡中(直径>4mm)存在显著高表达的蛋白质峰,质谱鉴定结果为转铁蛋白(transferrin,TRF)。转铁蛋白的功能和表达的变化提示,该蛋白质的高表达可作为潜在排卵的标志物之一。同时,本研究采用的LC-MS技术将为卵泡液大规模蛋白质组分离和表达谱构建提供参考。; 付强杨丽刘振方张明卢克焕; 关键词：水牛卵泡液蛋白质液相色谱分离转铁蛋白

水牛卵泡液差异蛋白质双向电泳方法的建立及质谱分析被引量：3: 2013年; 旨在研究沼泽型水牛成熟前后卵泡内差异表达蛋白质的变化规律。采用双向凝胶电泳技术分离成熟卵泡液和未成熟卵泡液总蛋白质,建立和优化了卵泡液的双向电泳体系,并使用质谱鉴定差异表达蛋白点。结果显示,丙酮沉淀法处理得到的总蛋白质样品后,在24cm(pH 4～7)胶条且上样量350μg时得到分辨率较好的双向电泳图谱。软件分析得到11个差异蛋白点,以成熟卵泡液作为对照,5个蛋白点表达上调,3个蛋白点表达下调,1个蛋白点缺失,2个蛋白点在未成熟卵泡液中特异性表达。质谱成功鉴定出4个蛋白质:过氧化物酶-2、醛糖还原酶、牛纤维蛋白原的晶体结构、转甲状腺素蛋白。该研究建立了良好的卵泡液双向电泳体系,分析并鉴定一批水牛卵泡液差异蛋白质,对于研究水牛卵母细胞的发育微环境和成熟机制提供了新的研究线索。; 黄愉淋黄德伦官俊良潘秋庄付强黄凤玲张明卢克焕; 关键词：水牛卵泡液蛋白质组双向电泳质谱鉴定

用于质谱鉴定蛋白质胶内酶解方法的优化被引量：6: 2011年; 【目的】提高蛋白质胶内酶解效率,减少萃取过程中肽段的损失,增加质谱鉴定的成功率。【方法】在常规胶内酶解方法的基础上,优化脱色、酶解、萃取等步骤,包括:用铁氰化钾和硫代硫酸钠对银染胶块脱色,酶解温度提高至55℃,以40mmol/L碳酸氢铵作为酶切缓冲液,使用50%乙腈(ACN)水溶液3步萃取;并使用一步法胶内酶解探索快速胶内酶解方法。【结果】使用铁氰化钾和硫代硫酸钠可在短时间内将银染胶块完全脱色,55℃温浴可使酶切时间由20h减少为2h,以40mmol/L碳酸氢铵作为酶切缓冲液,可省去ZipTip脱盐步骤。优化后,质谱鉴定率提高30.0%(绝对值),且能明显高酶切效率,使目标肽段更高丰度地呈现出来。【结论】优化后的胶内酶解法可显著提高蛋白质胶内酶解的质谱鉴定成功率和肽段覆盖率,其中一步法胶内酶解法有效减少了胶内酶解时间和步骤,可用于高丰度蛋白质的快速质谱检测。; 胡炜付强朱平川杨丽刘振方张明; 关键词：质谱鉴定成功率

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国家自然科学基金(30860192)