国家自然科学基金(31170329)
- 作品数：5 被引量：16H指数：3
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- 槲皮素对子宫颈癌细胞中乙酰肝素酶表达的影响被引量：1
- 2013年
- 目的探讨槲皮素对宫颈癌细胞中乙酰肝素酶（HPA）表达的影响。方法免疫荧光法检测宫颈癌细胞系HeLa、Caski细胞中HPA蛋白的表达。实验分为3组，槲皮素组：在HeLa、Caski细胞中加入含不同浓度（20、40、80μmol／L）槲皮素的RPMI 1640培养基；阳性对照组：小分子RNA（siRNA）转染HeLa、Caski细胞沉默其HPA的表达后，加入RPMI1640培养基；空白对照组：在HeLa、Caski细胞中仅加入RPMI1640培养基。3组HeLa、Caski细胞分别培养24、48、72h后，采用实时定量PCR技术和蛋白印迹法检测其HPAmRNA和蛋白的表达。结果（1）免疫荧光法检测显示，HeLa和Caski细胞中均有HPA蛋白的表达，均位于细胞核与细胞质中，呈红色荧光。（2）实时定量PCR技术检测显示，槲皮素组HeLa、Caski细胞中HPAmRNA的表达水平均随槲皮素浓度（分别为20、40、80μmol／L）的升高、处理时间（分别为24、48、72h）的延长而明显下降（P〈0．01），呈浓度和时间依赖性。与空白对照组相比，槲皮素组中40、80μmol／L槲皮素处理后HeLa、Caski细胞中HPAmRNA表达水平均明显下降（P〈0．05）；与阳性对照组相比，槲皮素组中80μmol／L槲皮素处理后HeLa细胞中HPAmRNA表达水平无明显变化（P〉0．05），而Caski细胞中HPAmRNA表达水平明显升高（P〈0．01）。（3）蛋白印迹法检测显示，槲皮素组HeLa、Caski细胞中HPA蛋白的相对表达水平均随槲皮素浓度（分别为20、40、80μmol／L）的升高、处理时间（分别为24、48、72h）的延长而明显下降（P〈0．01），呈浓度和时间依赖性。与空白对照组相比，槲皮素组中40、80μmol／L槲皮素处理后HeLa、Caski细胞中HPA蛋白表达水平明显下降（P〈0．05）；与阳性对照组相比，槲皮素组中80μmol／L槲皮素处理后HeLa、Caski细胞HPA蛋白表达水平无明显变化（P〉0．05）。结论槲皮素对宫颈癌细胞中HPAmRNA和蛋白的表�
- 张文婷张蔚钟亚娟吕琼莹程静
- 关键词：槲皮素葡糖醛酸糖苷酶宫颈肿瘤HELA细胞
- 槲皮素对宫颈癌细胞侵袭能力的作用机制被引量：3
- 2013年
- 目的探讨槲皮素对宫颈癌侵袭和转移的作用机制及其与乙酰肝素酶(heparanase,HPA)的相关性。方法构建宫颈癌Hela细胞组、Hela+槲皮素组、HPA-SiRNA-Hela组、HPA-SiRNA-Hela+槲皮素组4组细胞模型,应用Transwell小室基质划痕损伤实验方法,测定不同时间点各组宫颈癌Hela细胞侵袭能力的变化。结果在6,12,24h时,Hela+槲皮素组及HPA-SiRNA-Hela组与Hela细胞组比较,宫颈癌Hela细胞迁移能力明显下降(P<0.01);HPA-SiRNA-Hela组与Hela+槲皮素组比较差异无统计学意义(P>0.05);HPA-SiRNA-Hela+槲皮素组与其他3组比较,宫颈癌Hela细胞迁移能力均下降(P均<0.01)。结论槲皮素对宫颈癌Hela细胞的侵袭能力有明显抑制作用,HPA与宫颈癌Hela细胞的侵袭过程相关,而槲皮素对宫颈癌Hela细胞的侵袭能力的抑制作用可能与HPA相关。
- 程静张蔚吕琼莹张文婷钟亚娟
- 关键词：宫颈癌槲皮素乙酰肝素酶迁移
- 宫颈癌中乙酰肝素酶RNA干扰特异性靶点的构建及筛选被引量：1
- 2013年
- 目的设计合成对人乙酰肝素酶(heparanase,HPA)基因有特异性抑制作用的短发夹状RNA表达载体,筛选出对HPA沉默效果最佳的质粒。方法根据GenBank数据库提供的人HPA基因核苷酸序列,按短发夹RNA设计原则设计4对特异性寡核苷酸序列及阴性对照,分别克隆到pYr-1.1质粒载体中。用脂质体转染入Hela细胞,分别采用RT-PCR与细胞免疫荧光分析其对HPA在mRNA和蛋白质水平上表达的影响。结果经测序鉴定证实重组质粒构建成功;在构建的4个载体中,HPA-592组Hela细胞和Caski细胞HPA基因mRNA和蛋白质表达水平明显下降,对照组未发生明显改变。结论成功筛选出靶向人HPA的shRNA表达载体,转染宫颈癌Hela细胞和Caski细胞后可高效抑制HPA基因表达。
- 吕琼莹张蔚程静张文婷钟亚娟
- 关键词：宫颈癌HPAHELA细胞CASKI细胞RNAI
- 槲皮素和乙酰肝素酶与宫颈癌Caski细胞侵袭与迁移机制的研究被引量：4
- 2014年
- 目的:通过Transwell小室基质侵袭和划痕损伤方法研究宫颈癌Caski细胞系侵袭和迁移能力,观察其与槲皮素、乙酰肝素酶(HPA)的关系。方法:根据GenBank数据库提供的人HPA基因核苷酸序列,按照小发夹RNA(ShRNA)设计原则设计4对特异性的寡核苷酸序列及阴性对照,分别克隆到pYr—1.1质粒载体中。将筛选出的质粒转染到宫颈癌Caski细胞中,并将Caski细胞分为Caski细胞组、Caski+槲皮素组、HPA—ShRNA—Caski组(HPA蛋白基因沉默的宫颈癌Caski细胞)和HPA-ShRNA-Caski+槲皮素组。然后进行Transwell小室基质侵袭和划痕损伤实验,观察不同时间宫颈癌细胞的侵袭和迁移能力。结果:①在6、12、24小时时,Caski+槲皮素组和HPA-ShRNA-Caski组划痕宽度明显大于Caski细胞组(P<0.05;P<0.01);HPA—ShRNA—Cas—ki+槲皮素组划痕宽度均大于其他3组(P<0.01)。()Caski+槲皮素组和HPA—ShRNA—Caski组有细胞侵袭能力的细胞数较Caski细胞组下降(P<0.05),HPA—ShRNA—Caski+槲皮素组较其他3组均明显下降(P<0.01)。结论:槲皮素对宫颈癌Caski细胞的侵袭和迁移能力有明显抑制作用,而HPA与宫颈癌细胞的侵袭、迁移过程有关。槲皮素对宫颈癌的侵袭和迁移能力的抑制作用可能与HPA相关。
- 程静张蔚吕琼莹张文婷钟亚娟
- 关键词：宫颈癌槲皮素乙酰肝素酶迁移
- 槲皮素对宫颈癌HeLa细胞STAT3的表达及其信号通路的影响被引量：8
- 2011年
- 目的初步探讨信号转导子和转录激活子STAT3在宫颈癌发生发展中的作用以及槲皮素对宫颈癌细胞中STAT3表达的影响。方法用RT-PCR检测不同浓度的槲皮素作用人宫颈癌HeLa细胞中STAT3 mRNA的表达,并以细胞免疫荧光技术观察凋亡细胞内STAT3和磷酸化STAT3(P-STAT3)的改变。结果槲皮素处理HeLa细胞后,当槲皮素浓度从6.25μmol/L增加到50μmol/L,相同时间HeLa细胞内STAT3 mRNA表达逐渐降低,除6.25μmol/L组与溶剂对照组相比无统计学差异(P>0.05)外,余差异全部有统计学意义(P<0.05),且处理24h后,STAT3 mRNA表达量与给药浓度呈负相关,r1=-0.861,P=0.000;各时间段不同浓度组(6.25、12.5、25、50μmol/L)两两相比,差异均有统计学意义(P<0.05)。随着时间变化,相同浓度组中STAT3 mRNA表达明显降低,在给予6.25μmol/L槲皮素后,STAT3 mRNA的表达量呈时间依赖性,r2=-0.539,P=0.000。运用免疫荧光技术观察到STAT3蛋白及磷酸化水平随槲皮素浓度及时间增加表达呈明显下降趋势。结论槲皮素能明显抑制HeLa细胞的生长;槲皮素可抑制细胞内STAT3表达,从而可能通过抑制JAK/STAT信号通路诱导宫颈癌细胞凋亡。
- 陈娇张蔚敖良飞王丹莉余珍贵
- 关键词：宫颈肿瘤HELA细胞槲皮素信号传导
