国家自然科学基金(30973225)
- 作品数：7 被引量：8H指数：2
- 相关作者：徐如祥杨志军戴宜武郭永坤张业森更多>>
- 相关机构：北京军区总医院首都医科大学安徽医科大学更多>>
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- 脐血源神经干细胞移植治疗大鼠脊髓损伤及其差异基因表达被引量：2
- 2014年
- 目的 评估脐血源神经干细胞（UCBNSCs）移植治疗脊髓损伤（SCI）后大鼠后肢功能恢复情况,并通过基因芯片筛选出移植治疗后对照组和实验组差异表达基因,分析相关基因与损伤脊髓功能恢复的关系,以期为SCI的基因治疗打下基础. 方法 50只健康雌性SD大鼠按随机数字表法分为假手术组（n=10）、磷酸盐缓冲液（PBS）注射组（n=20）、UCBNSCs移植组（n=20）.假手术组仅在显微镜下行T9-11椎板打开,不做其他处理.后2组打开T9-11椎板后横断脊髓,制作大鼠脊髓全断模型.1周后UCBNSCs移植组行UCBNSCs（1×10^9/L细胞悬浮液10μL）脑室穿刺移植,PBS注射组用PBS代替.移植术后1d、1周、2周、4周、6周、8周分别对3组大鼠行血脑屏障（BBB）行为评分.第8周分别取PBS注射组和UCBNSCs移植组各7只SD大鼠,取得SCI处组织样本,行基因芯片分析,筛选出差异表达基因. 结果 PBS注射组和UCBNSCs移植组造模后均出现了瘫痪、尾部活动障碍及排尿功能障碍等.随着时间的延长,2组后肢功能均有所恢复,在术后2周、4周、6周和8周2组间差异具有统计学意义（P＜0.05）.芯片分析筛选出24个差异表达基因,其中表达上调有20个,表达下调有4个. 结论 UCBNSCs移植治疗大鼠SCI有确切疗效,通过基因芯片分析推测其可能通过分化为神经元、增加损伤微环境中神经营养因子表达、抑制炎症反应和促进损伤局部的氧供等方式发挥作用.
- 吴月奎王尚武孙起军霍铁军马建华郭海若秦家振戴宜武徐如祥
- 关键词：脊髓损伤差异基因
- 脊髓损伤的干细胞治疗研究进展被引量：3
- 2014年
- 脊髓损伤是临床上常见的中枢神经系统的严重创伤，可造成运动、感觉障碍及自主神经功能紊乱，高位损伤者甚至影响呼吸循环功能，具有极高的致残率和致死率，给患者及家属带来严重的经济和精神负担，也造成了巨大的社会压力。外伤是脊髓损伤最常见的原因，常由交通事故、坠落及暴力打伤引起，其他常见的原因有肿瘤压迫、感染、医源性损伤等。
- 吴月奎王尚武戴宜武徐如祥
- 关键词：脊髓损伤干细胞
- hTfR报告基因慢病毒载体构建及其在神经干细胞的表达研究被引量：2
- 2013年
- 目的探讨人转铁蛋白受体（hTfR）基因慢病毒载体构建方法及其在神经干细胞（NSCs）中的表达情况,为NSCs的MR分子成像提供实验基础。方法利用聚合酶链反应技术伊CRl扩增hTfR基因，并克隆到pLenti6.3载体，构建出慢病毒表达载体pLentil6．3-hTfR-IRES-EGFP。利用Lipofectin2000试剂将PLP1、PLP2、PLP-VSVG和pLenti6．3-hTfR-IRES-EGFP共转染293T细胞进行慢病毒包装，48h后收集病毒上清，体外感染NSCs。细胞流式筛选稳定表达hTfR的细胞，通过实时定量PCR和Westernboltting检测hTfR的表达，细胞免疫荧光技术对过表达的hTfR进行亚细胞的定位。结果成功构建危珊基因慢病毒表达载体，包装的慢病毒颗粒成功感染NSCs。实时定量PCR和Westernboltting鉴定出hT瓜在NSCs中过表达，hTfR基因表达相对值为2．275±0．281。细胞免疫荧光检测到过表达的hTfR主要在细胞膜上表达。NSCs分化后，hTfR在胶质细胞和神经元中稳定表达。结论本研究所用方法能成功构建hTfR慢病毒表达载体并筛选出稳定表达hTfR的NSCs系,为下一步活体内移植NSCs行MR分子成像实验研究奠定了基础。
- 郭永坤张业森刘春颖戴宜武黄瑾姚慧吴炳山姚学勤杨志军徐如祥
- 关键词：转铁蛋白受体慢病毒载体神经干细胞增强型绿色荧光蛋白
- 转铁蛋白受体基因在大鼠脑内表达成像的研究被引量：1
- 2013年
- 基因治疗是目前神经系统疾病的一种重要前沿治疗方法,已应用于多种疾病的治疗[1],病毒载体作为一种基因转移工具已被广泛用于基因治疗和细胞分子生物学研究[2].转铁蛋白受体基因是目前研究较多的磁共振报告基因之一[3],其配体转铁蛋白能够通过配体-受体系统通过血脑屏障[4].我们以转铁蛋白受体基因（TfR）为研究对象,利用核共振成像（MRI）的活体示踪技术将这些探针特异性结合的脑内转基因神经细胞.一、材料与方法1.材料：健康成年SD大鼠12只（清洁级）,Buker Sigma 7.0T超导型磁共振,转铁蛋白纳米铁螯合物（Tf-USPIO）购自北京万德高科.
- 张业森郭永坤姚慧徐如祥戴宜武杨志军
- 关键词：成年SD大鼠转铁蛋白受体基因成像脑内细胞分子生物学
- Sinerem标记大鼠骨髓基质细胞及移植后活体示踪研究
- 2010年
- 目的初步探索利用欣诺(Sinerem)和转染试剂体外磁性标记大鼠骨髓基质细胞这一方法的可行性,为将来临床上应用MRI追踪标记细胞奠定基础。方法无菌条件下行股骨取骨髓,梯度密度离心法分离获取大鼠骨髓基质细胞,使用Sinerem-多聚赖氨酸复合物(SE-PLL)标记骨髓基质细胞,采用普鲁士兰染色、电镜和台盼蓝排除实验等方法鉴定SE-PLL标记大鼠骨髓基质细胞的效率和细胞的活力,并对SE-PLL标记骨髓基质细胞的增殖和分化能力进行评估。将SE-PLL标记和未标记后的骨髓基质细胞分别移植入大鼠左右侧尾壳核脑内,细胞移植后1、4、7w应用MRI对脑内移植的细胞进行活体示踪,最后利用组织切片进行普鲁士兰染色。结果Sinerem可以高效率地标记骨髓基质细胞,标记效率在99%左右。普鲁士蓝染色显示SE-PLL标记骨髓基质细胞胞质内出现细小的蓝色铁颗粒。电镜结果显示SE-PLL标记的骨髓基质细胞胞质内含有许多包裹铁颗粒的囊泡。与正常未标记的细胞相比较,SE-PLL标记对骨髓基质细胞的活力、增殖和分化等能力没有明显的影响。MRI检查发现脑内移植的标记细胞在磁共振上呈明显的低信号改变,未标记细胞侧脑组织无明显的低信号改变,与组织学切片结果基本一致。结论以上结果提示Sinerem可以用来体外标记骨髓基质细胞,利用MRI技术可以对脑内移植后的标记细胞进行初步的活体追踪。
- 杨志军罗永春张洪钿徐如祥陈中灿姜晓丹
- 关键词：骨髓基质细胞神经干细胞
- 磁共振报告基因示踪神经干细胞的研究进展
- 2013年
- 近年来,随着分子影像学技术的进步,细胞示踪技术取得了长足的进步.为了能够对移植后的神经干细胞（neural stem cells,NSCs）及其分化细胞与宿主自身神经细胞加以鉴别和示踪,经常需要在干细胞移植前对其进行合适的标记.同时,研究人员非常希望能够在合适的示踪剂帮助下,利用无创伤性影像学技术识别移植后NSCs,活体监测NSCs在脑内的存活、迁移、整合乃至成瘤情况,借此来正确评价NSCs移植的疗效,并作为客观评价神经功能恢复程度的指标.当前细胞治疗在临床多种疾病的应用逐渐开展和深入,如何示踪和定量到靶器官或病灶的细胞是急需解决的问题,也是细胞治疗临床推广应用的关键技术之一[1],特别是干细胞治疗以及以干细胞为载体的基因治疗是目前医学领域的研究热点.
- 张业森杨志军徐如祥
- 关键词：神经干细胞核磁共振报告基因示踪
- 神经干细胞活体示踪的研究现状与前景
- 2013年
- 神经干细胞（neuralstemcells，NSCs）是一类具有自我更新能力和多分化潜能的细胞，在一定的条件可分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞。近年来，NSCs移植治疗神经系统疾病中的有效性和潜能日益受到重视，已在诸多中枢神经系统疾病显现出独特的优势，具有广阔的应用前景[1-3]。但NSCs移植治疗的疗效机制目前仍不详。为了明确NSCs移植后症状改善的原因，了解细胞移植后的生存状态，区分移植细胞和宿主细胞，监测移植后NSCs在宿主内的活力、分化、迁移、代谢机制以及整合情况，需要对移植的NSCs进行非侵袭性活体示踪。
- 郭永坤杨志军徐如祥
- 关键词：神经干细胞细胞移植分子影像学
