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国家自然科学基金(81100541)
作品数:
3
被引量:12
H指数:2
相关作者:
刘伏友
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孙林
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相关机构:
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中国血液净化
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PI3K/Akt信号调节腹膜间皮细胞上皮-间充质转分化
被引量:6
2014年
目的通过体内外实验探讨P13K/Akt信号对腹膜透析腹膜间皮细胞上皮-间充质转分化(EMT)的调节作用。方法40只12周龄ICR小鼠腹腔置管行腹膜透析,制备腹膜间皮细胞的上皮.间充质EMT小鼠模型,成膜后分为PD模型组和对照组。采用实时定量PCR、Western印迹和组织免疫荧光等方法检测腹膜组织磷酸化丝氨酸/苏氨酸激酶(pAkt)的表达及EMT相关蛋白和mRNA的表达[包括紧密连接蛋白(ZO-1)、波形蛋白(Vimentin)、纤连蛋白(FN)]。体外实验观察转化生长因子(TGF)B1对人腹膜间皮细胞(HPMCs)Akt磷酸化和核转位及ZO-1、Vimentin表达的影响。采用P13K/Akt抑制剂LY294002预处理和负显性Akt(DN-Akt)质粒转染HPMCs,抑制P13K/Akt信号,观察其对TGF-β1诱导的HPMCs细胞ZO-1、Vimentin表达的影响。结果与对照组相比,模型组小鼠第28天壁层腹膜组织明显增厚,上皮细胞标志物ZO-1mRNA和蛋白表达降低,间充质细胞标志物Vimentin和FN的mRNA和蛋白表达升高,Akt磷酸化水平(pAkt)也明显升高(均P〈0.01)。体外实验发现:TGF.B1抑制HPMCs细胞ZO-1表达,增加Vimentin和pAkt表达(均P〈0.01),且呈浓度依赖性;LY294002、DN-Akt处理可抑制pAkt表达,对TGF-β1诱导的HPMCsZO-1mRNA和蛋白下调表达有明显回复作用,并抑制TGF-β1引起的VimentinmRNA和蛋白的高表达(均P〈0.01)。结论P13K/Akt信号参与调节PD腹膜间皮细胞EMT,以P13K/Akt信号为靶点可望为腹膜纤维化的防治提供一种新途径。
彭翔
刘伏友
孙林
肖力
王铭
李军
关键词:
磷脂酰肌醇3-激酶
腹膜间皮细胞
血液净化技术临床与研究新进展
被引量:5
2013年
近年,血液净化的基础和临床研究均得到迅速发展,透析设备、透析技术、透析模式不断更新,使血液净化技术临床运用范围不断扩大、透析效能不断提高,现将血液净化技术主要研究进展情况简述如下。
刘煜
刘伏友
肖力
关键词:
血液净化技术
透析设备
透析技术
透析模式
透析效能
miR-129-5p在腹膜间皮细胞转分化中的作用与机制
被引量:1
2015年
目的探讨miR-129—5p(microRNA-129—5p)对腹膜间皮细胞上皮.间充质转分化(EMT)的调节作用及可能的分子机制。方法通过新开管腹膜透析(PD)和PD6个月以上两组患者腹透流出液分离培养腹膜间皮细胞,采用Taqman探针实时荧光定量PCR法检测其中miR-129-5p的表达差异。5μg/L TGF—β1刺激腹膜间皮细胞株(HPMCs)0~72h,观察TGF—β1对HPMCs细胞miR-129—5p表达的影响;预转染miR-129-5p前体(pre-miR-129—5p)使HPMCs中miR-129—5p过表达,再给予5μg/L TGF—β1刺激48h,采用实时荧光定量PCR、Western印迹和细胞免疫荧光等方法,观察过表达miR-129-5p对TGF—β1诱导的HPMCs EMT相关蛋白和基因表达的影响。同时,观察5μg/L TGF-β1作用不同时间(0—72h)对HPMCsSmad作用蛋白1(SIP1,miR-129-5p生物预测下游因子)表达的影响以及过表达miR-129—5p对其mRNA和蛋白水平的调节作用。结果PD6个月以上组患者透出液分离培养的腹膜间皮细胞中miR-129—5p的表达显著低于新开管组(P〈0.01);5μg/L外源性TGF-β1刺激,可使HPMCs的miR-129-5p表达明显降低,呈时间依赖性,pre—miR-129—5p预转染可明显恢复TGF-β1诱导的上皮标志物E—cadherin mRNA和蛋白的表达,并抑制TGF-β1引起的间充质标志物Vimentin mRNA和蛋白的高表达(均P〈0.01)。另外,TGF-β1可呈时间依赖性增加SIP1的mRNA和蛋白表达(均P〈0.01),而pre-miR-129—5p可明显抑制TGF-β1诱导的SIP1蛋白表达(P〈0.01),对其mRNA表达无明显影响(P〉0.05)。结论miR-129—5p可能参与PD状态下腹膜间皮细胞EMT,并可能通过转录后调控SIP1参与该过程,以miR-129-5p/SIP1为靶点,可望为PD腹膜纤维化防治提供一种新途径。
周循
刘伏友
罗盈
唐丹
阳石坤
孙林
肖力
关键词:
腹膜透析
细胞转分化
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