国家自然科学基金(30973218)
- 作品数：9 被引量：24H指数：3
- 相关作者：许峰王少华姚兰党红星董欣鑫更多>>
- 相关机构：重庆医科大学第二军医大学南京大学更多>>
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- Wnt信号通路与支气管肺发育不良被引量：5
- 2012年
- Wnt信号通路是一条在进化上保守的信号传导途径，主要由经典的Wnt／β-catenin途径和非经典的Wnt／平面细胞极性途径及Wnt／Ca^2＋途径组成，该通路从多个水平参与肺发育及多种肺部疾病过程。支气管肺发育不良（bronchopulmonary dysplasia，BPD）是在肺发育不成熟基础上由于炎症损伤及损伤后肺纤维化异常修复所导致的慢性肺疾病。该文就Wnt信号通路与肺发育、肺部炎症和肺纤维化的关系作一综述，以期揭示Wnt信号通路与BPD之间的可能联系，为BPD的防治提供新的切人点。
- 王少华许峰
- 关键词：WNT信号通路肺发育炎症肺纤维化支气管肺发育不良
- 降钙素基因相关肽对高氧暴露胎鼠原代肺泡Ⅱ型细胞的保护作用及其Wnt信号机制被引量：3
- 2012年
- 目的探讨降钙素基因相关肽(calcitonin generelated peptide,CGRP)是否可促进高氧损伤肺泡Ⅱ型上皮细胞(typeⅡalveolar epithelial cells,AECⅡ)的存活及其可能涉及的Wnt信号机制。方法 SD胎鼠原代AECⅡ分为空气组、高氧组、高氧+CGRP组、高氧+CGRP+hCGRP8-37组,采用MTT测定各组细胞增殖,流式细胞仪检测细胞死亡,Western blot检测Wnt7b、β-catenin及p-β-catenin表达。结果与空气组对照比较,高氧暴露24 h后死亡细胞数显著升高(P<0.01),细胞增殖活性明显受到抑制(P<0.01),CGRP干预可明显下调高氧暴露后死亡细胞数(P<0.01),减弱高氧对细胞增殖的抑制作用(P<0.01)。高氧暴露后Wnt7b及β-catenin蛋白表达水平明显降低(P<0.01),p-β-catenin表达水平显著增加(P<0.01),CGRP干预后,与单纯高氧暴露组相比Wnt7b、β-catenin蛋白表达水平增加,而p-β-catenin表达水平降低,具统计学差异(P<0.01)。结论 CGRP可减少高氧诱导的细胞死亡、减弱高氧对细胞增殖的抑制效应,改善AECⅡ存活,Wnt7b/β-catenin通路可能参与了CGRP这一调控过程。
- 王少华许峰党红星
- 关键词：降钙素基因相关肽高氧WNT信号
- 氢气对高氧暴露下肺泡Ⅱ型上皮细胞损伤的保护作用机制研究被引量：3
- 2018年
- 该文探讨了氢气对高氧暴露下早产大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞(type Ⅱ alveolar epithelial cells,AECⅡ)损伤的作用机制研究。将原代分离培养的早产鼠AECⅡ分为4组:空气组、高氧组、高氧+氢气组、高氧+氢气+PD98059组。空气组、高氧组分别置于氧浓度为21%的空气和95%的氧气中;高氧+氢气组在高氧暴露前加入氢气;高氧+氢气+PD98059组在高氧暴露前同时加入氢气和ERK1/2特异性抑制剂PD98059,再置于氧浓度为95%的密闭氧仓中。各组均培养24 h后,CCK-8法检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡情况;Western blot检测ERK1/2、p-ERK1/2、Bax蛋白质水平;荧光定量PCR检测Bax和caspase-3 m RNA水平。结果发现,与空气组比较,高氧组细胞凋亡率显著增加(P<0.01),细胞增殖能力、p-ERK1/2蛋白质水平明显降低(P<0.01),Bax蛋白质与mRNA水平均明显升高(P<0.01),caspase-3 mRNA水平明显升高(P<0.01);与高氧组比较,高氧+氢气组细胞凋亡率显著减低(P<0.01),细胞增殖能力升高(P<0.01),p-ERK1/2蛋白质水平明显升高(P<0.01),Bax蛋白质与mRNA水平均降低(P<0.05),caspase-3 mRNA水平降低(P<0.05);当加入ERK1/2抑制剂PD98059后,氢气的保护作用被消除(P<0.05)。氢气可通过激活MAPK-ERK1/2信号通路抑制凋亡相关基因的表达,改善高氧导致AECⅡ的凋亡和增殖受限,促进细胞存活。
- 吴丹姚兰方芳许峰刘成军
- 关键词：高氧氢气
- Notch信号在神经肽P物质对高氧暴露肺泡Ⅱ型上皮细胞的保护作用机制被引量：2
- 2014年
- 目的探讨Notch信号在神经肽P物质(substance P,SP)对高氧状态下早产大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)的作用机制。方法将原代分离培养的大鼠孕19d胎鼠AECⅡ随机分为4组:空气组和高氧组分别暴露在210mL/L和950mL/L氧气中;高氧+SP组于暴露前加SP;高氧+SP+L703.606组在高氧+SP组基础上加入SP受体拮抗剂L703.606。各组均培养24h后,流式细胞仪检测细胞凋亡率;微孔板检测系统和激光共聚焦显微镜检测超氧化物阴离子水平;四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测定细胞增殖能力;QPCR检测Notch1、Notch3基因的表达;Western blot检测Notch1、Notch3蛋白的表达。结果与空气组比较,高氧组细胞凋亡率及超氧化物阴离子的含量均显著增高,增殖率显著下降(P<0.01);高氧+SP组可显著降低细胞凋亡率及超氧化物阴离子的表达,提高细胞增殖率(P<0.01)。高氧组Notch1基因和蛋白的表达均明显降低(P<0.01),Notch3基因和蛋白水平表达均明显升高(P<0.01),高氧+SP组与单纯高氧组比较,Notch1基因和蛋白水平表达升高,Notch3基因和蛋白水平表达降低,差异具有统计学意义(P<0.01)。高氧+SP+L703.606组与高氧组各指标比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 SP可通过调控Notch信号通路的表达,抑制高氧诱发的AECⅡ细胞凋亡,减轻氧化损伤,促进细胞增殖的作用。
- 董欣鑫姚兰方芳许峰
- 关键词：高氧神经肽P物质NOTCHLNOTCH3早产大鼠
- 神经肽P物质对高氧损伤肺泡Ⅱ型上皮细胞氧化/抗氧化状态的影响被引量：1
- 2013年
- 目的探讨神经肽P物质(Substance P,SP)对高氧损伤早产大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(Alveolar epithelial celltypeⅡ,AECⅡ)氧化/抗氧化状态的影响。方法将分离培养的原代早产大鼠AECⅡ随机分为4组:空气组(将细胞置5%CO2、21%O2的孵箱中)、高氧组(将细胞置5%CO2、95%O2的密闭氧仓中)、高氧SP组(细胞培养液中预先加入5×10-8mol/L的SP,再置高氧中)和高氧SP受体拮抗剂组(细胞培养液中预先加入5×10-8mol/L的SP和5×10-7mol/L的L703.606,再置高氧中),各组细胞培养24 h后,镜下观察细胞形态的变化;MTT法检测细胞的增殖活力;流式细胞术检测细胞周期;JC-1探针法检测细胞凋亡早期线粒体膜电位的变化;化学比色法检测细胞丙二醛(Malondialdehyde,MDA)含量、总抗氧化能力(Total antioxidative capacity,TAOC)及超氧化物歧化酶(Superoxidedismutase,SOD)的活力。结果与空气组比较,高氧组AECⅡ的增殖活力、S+G2期细胞比例、线粒体膜电位、SOD活力和TAOC均明显下降(P<0.01),MDA含量明显升高(P<0.01);与高氧组比较,高氧SP组AECⅡ的增殖活力、S+G2期细胞比例、线粒体膜电位、SOD活力和TAOC均明显升高(P<0.01),而MDA含量明显下降(P<0.01),SP受体拮抗剂可阻断该效应。结论 SP可明显减轻高氧导致的早产大鼠AECⅡ的氧化损伤,增强细胞的抗氧化能力,进而起到促进细胞增殖的作用。
- 董欣鑫姚兰方芳许峰
- 关键词：神经肽P物质高氧肺损伤
- 降钙素基因相关肽对氧化应激肺损伤保护作用的Wnt7b/β-catenin信号机制被引量：4
- 2015年
- 目的探讨高氧暴露后早产鼠肺组织Wnt7b和β-连环蛋白(β-catenin)水平变化,高氧、降钙素基因相关肽(CGRP)干预后Wnt通路下游基因转录调控因子T细胞因子(TCF)、靶基因c-myc mRNA的表达,了解Wnt信号转导途径是否参与了氧化应激导致的肺泡Ⅱ型内皮细胞(AECⅡ)损伤死亡和肺发育障碍,以及其与CGRP肺保护作用的关系。方法 western blot检测95%高氧暴露早产鼠肺组织及高氧、CGRP干预后原代AECⅡWnt7b、β-catenin蛋白水平,RT-PCR测定TCF及c-myc mRNA表达。结果高氧暴露后3天肺组织Wnt7b及β-catenin蛋白表达即较空气对照组显著增强(P<0.05),7天时蛋白水平达到峰值,14天时表达有所下降,但仍明显高于空气对照组(P<0.05)。与空气对照组比较,高氧组AECⅡTCF及c-myc mRNA表达明显增强(P<0.01),高氧+CGRP组较单纯高氧组TCF、c-myc mRNA表达水平升高更为显著(P<0.01),空气+CGRP组TCF、c-myc mRNA表达与空气对照组差异无统计学意义(P>0.05)。结论高氧暴露后Wnt7b/β-catenin信号通路激活,启动下游增殖相关基因转录,可能是氧化应激性肺损伤时AECⅡ自我修复的机制之一。CGRP可促进Wnt7b/β-catenin活化,Wnt7b/β-catenin信号转导途径可能参与了CGRP的肺保护作用。
- 王少华邹冬梅李龙辉李丽党红星许峰
- 关键词：降钙素基因相关肽氧化性应激肺损伤Β-连环蛋白
- 氢气对高氧致肺泡Ⅱ型上皮细胞损伤的保护作用被引量：6
- 2013年
- 目的探讨氢气对高浓度氧导致的早产大鼠肺泡型Ⅱ上皮细胞(AECⅡ)氧化应激性损伤的影响。方法将分离培养的原代AECⅡ随机分为空气对照组、高氧对照组、空气+氢气组、高氧+氢气组。空气组和高氧组分别暴露在21%和95%氧气中,空气+氢气组和高氧+氢气组细胞置于富氢培养基中。各组均于24 h后光镜观察细胞形态改变,采用四甲基偶唑氮蓝(MTT)法检测各组细胞增殖能力,JC-1荧光探针法检测各组细胞线粒体膜电位(△Ψ)变化,化学比色法测定细胞上清丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活力。结果与空气对照组比较,空气+氢气组各项指标均无显著差异,高氧对照组细胞的增殖活性明显受到抑制,细胞的△Ψ明显降低,MDA含量显著增高,SOD活性明显降低。氢气干预后,与高氧对照组相比,细胞的增殖活性和SOD活性均有所升高,△Ψ有所恢复,MDA含量显著下降(P<0.05)。结论氢气可显著减轻高氧导致的早产鼠AECⅡ的氧化损伤,提高细胞抗氧化能力,稳定细胞△Ψ,减弱高氧对细胞的增殖抑制效应。
- 姚兰许峰罗冲于攀董欣鑫孙学军刘成军
- 关键词：氢气高氧肺损伤氧化应激
- 神经肽P物质对高氧暴露下肺泡Ⅱ型上皮细胞的影响及其对信号分子Gli1的调控
- 2012年
- 目的探讨神经肽P物质(SP)对高氧暴露下早产鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)的影响及其对SHH信号通路下游信号分子Gli1的调控作用。方法分离纯化原代早产鼠AECⅡ,随机分为空气组、高氧组、高氧+SP组。空气组和高氧组分别在21%和95%氧浓度中暴露24h,高氧+SP组于高氧暴露前加入SP 1×10-8 mol/L。电子显微镜下观察AECⅡ的形态变化,MTT法检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡率,荧光定量PCR和Western blot法检测Gli1信号分子基因和蛋白表达水平。结果与空气组比较,高氧暴露24hAECⅡ出现明显的损伤和凋亡改变,凋亡率明显增加,细胞存活率明显降低。神经肽SP干预后可明显降低AECⅡ凋亡,细胞存活率明显升高。高氧刺激可促进SHH信号通路激活Gli1基因和蛋白表达在高氧损伤的AECⅡ表达增加,SP干预后,进一步促进Gli1的表达,其基因和蛋白表达明显增加。结论 SP是一个保护性的调控因子,可以降低高氧诱导细胞损伤和凋亡,促进细胞的存活,可能与激活SHH信号通路有关。
- 杨林党红星刘聪方芳许峰
- 关键词：P物质高氧GLI1
- 不同氧浓度暴露对早产鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞的损伤及CGRP的保护效应被引量：2
- 2012年
- 目的观察不同氧浓度对早产鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)的影响以及降钙素基因相关肽(CGRP)对AECⅡ的保护作用。方法将原代分离培养的孕19天早产鼠AECⅡ接种至6孔培养板,随机分为空气组、40%氧组、60%氧组、80%氧组及相关浓度氧CGRP组与相关浓度氧CGRP受体拮抗剂组。空气组和高氧组分别置于体积分数为21%的空气或40%、60%、80%的氧气中暴露24 h;CGRP组在暴露前加入CGRP;CGRP拮抗剂组在CGRP组基础上加入CGRP受体拮抗剂(CGRP8-37)。培养24 h后,用分光光度计测定各组丙二醛(MDA)、总抗氧化能力(TAOC)、超氧化物歧化酶(SOD)水平;用流式细胞仪检测活性氧(ROS)和细胞凋亡率;用逆转录—聚合酶链反应(RT-PCR)测定表面活性蛋白C(SP-C)的mRNA表达。结果与空气组比较,40%、60%、80%氧组MDA、ROS及细胞调亡率均显著增高,TAOC、SOD水平及SP-C mRNA表达均显著降低(P均<0.01)。与氧气组比较,高氧CGRP组细胞MDA、ROS水平及细胞调亡率均显著下降;而TAOC、SOD水平及SP-C mRNA表达均明显增高(P<0.01)。高氧CGRP拮抗剂组与高氧组各指标比较差异均无显著性。结论高于40%氧暴露24 h可导致早产鼠AECⅡ发生氧化损伤,诱导细胞凋亡及SP-C mRNA表达下降;随着氧浓度增加,损伤加重;而CGRP可部分减轻AECⅡ的氧化损伤,减少凋亡,促进SP-C mRNA表达,对高氧损伤的AECⅡ起保护作用。
- 王少华许峰党红星
- 关键词：氧浓度肺损伤降钙素基因相关肽
