国家自然科学基金(30973219)
- 作品数：6 被引量：15H指数：3
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- 小鼠Islet-1基因慢病毒表达载体的构建及其诱导C_3H_(10)T1/2细胞向心肌样细胞特异性分化被引量：8
- 2011年
- 目的研究Islet-1对干细胞分化的影响。方法用PCR钓取目的基因,将目的基因与pLenO-WPI载体连接,选取阳性质粒,与辅助质粒共同感染293T细胞生产出慢病毒载体。感染C3H10T1/2细胞,实时荧光定量PCR及Western blot检测Islet-1和心肌、肝脏、骨骼及神经各系统相关标志物的表达,免疫荧光检测心肌肌钙蛋白T(cTnT)表达部位。结果 PCR及测序显示目的片段正确插入,实验组有Islet-1表达;心肌早期发育相关基因GATA-4、MEF2C、NKx2.5在检测到荧光蛋白1周后升高,2周到达高峰,3周后可检测到心肌特异性蛋白cTnT(0.582±0.0576),其时序性表达呈随时间增强趋势;cTnT表达于胞质;肝脏系统特异性标志AFP及ALB、骨骼系统特异性标志BGP及BALP、神经系统特异性标志Nestin及GFAP均未表达。结论 Islet-1具有特异性促进干细胞向心肌样细胞分化的作用。
- 智深深田杰刘官信鲁荣林建萍刘建平朱静
- 关键词：慢病毒表达载体心肌样细胞
- 小鼠Islet-1基因慢病毒表达载体的构建及其促进C3H10T1/2细胞向心肌样细胞特异性分化的作用
- 研究Islet-1对干细胞特化心肌样细胞的调控作用。用PCR获取目的基因,将目的基因与pLenO-WPI载体连接,选取阳性质粒,与辅助质粒共同感染293T细胞生产出慢病毒载体。感染C3H10T1/2细胞,实时荧光定量PC...
- 智深深朱静田杰吕铁伟鲁荣邓兵刘建平林建萍
- 关键词：慢病毒表达载体心肌样细胞
- 文献传递
- lslet-1在乙酰化调控网络中特异性辅助C3H10T1/2细胞向心肌细胞分化
- 筛选并分析转染Islet-1慢病毒载体的MSCs转化为心肌样细胞过程中与Islet-1相互作用的乙酰化酶(HATs)或去乙酰化酶(HDACs),明确Islet-1在C3H10T1/2分化为心肌样细胞乙酰化调控网络中的关键...
- 林建萍朱静田杰吕铁伟鲁荣邓兵刘建平智深深
- 关键词：慢病毒转染心肌样细胞乙酰化
- 文献传递
- Islet-1在C3H10T1/2细胞向心肌细胞分化过程中对心肌特异性基因组蛋白乙酰化修饰的促进作用
- 研究高表达Islet-1之后的C3H10T1/2细胞定向分化为心肌细胞过程中表达增加的心肌特异蛋白基因上组蛋白乙酰化水平的变化情况。Islet-1基因慢病毒转染小鼠骨髓间充质干细胞C3H10,逆转录及实时荧光定量PCR时...
- 鲁荣朱静田杰吕铁伟林建萍邓兵刘建平智深深
- 关键词：乙酰化
- 文献传递
- 组蛋白乙酰化酶调控MSCs经5-azaC诱导后的细胞周期和增殖特性被引量：3
- 2010年
- 目的阐述组蛋白乙酰化酶GCN5在间充质干细胞(MSC)经5-氮杂胞苷(5-azaC)诱导过程中的作用及其转录调控机制。方法 MTT法、流式细胞术检测细胞周期和细胞增殖;定量PCR检测P21基因表达;CH IP技术验证GCN5募集蛋白复合体与P21基因的相互作用及P21基因启动子区域的乙酰化水平;Co-IP技术分离、串联质谱技术鉴定GCN5募集蛋白复合体组成。结果 MSCs经5-azaC诱导3 d后,G0/G1期细胞比例、P21基因表达量最高,此后逐渐降低,细胞增殖指数及G2/S期细胞比例与上述结果相反;筛选出GCN5募集蛋白复合体为:依赖ATP的染色质重塑复合体成分、转录起始复合体成分、转录因子和锌指结构蛋白;诱导组GCN5与P21基因启动子区域结合能力及P21基因启动子区域组蛋白H3乙酰化水平高于未诱导组。结论 GCN5募集蛋白复合体通过结合于P21基因启动子区域参与调控MSCs经5-azaC诱导体外分化过程中细胞周期G0/G1期和细胞增殖特性的调控。
- 周娜朱静田杰张亚兰邓兵李娅莎
- 关键词：间充质干细胞细胞周期CHIP
- 小鼠Islet-1基因RNAi慢病毒载体的构建被引量：3
- 2011年
- 目的构建高效沉默小鼠Islet-1基因的慢病毒载体。方法针对小鼠Islet-1基因设计3个RNAi靶序列,合成相应的短发卡RNA(shRNA)寡核苷酸序列(oligo):Sh1、Sh2、Sh3,分别插入经酶切后的PLVTHM载体。经PCR和测序方法筛选阳性克隆,抽提阳性克隆质粒经大肠埃希菌扩增后,与其辅助包装质粒共同感染293T细胞制备慢病毒载体,利用斑形成试验测定病毒滴度。感染C3H10T1/2细胞株,以流式细胞仪检测其感染效率、荧光定量PCR检测其干扰效率。结果与正常C3H10T1/2细胞比较,测序及PCR结果显示目的片段插入正确;病毒滴度值为3.87×108TU/ml;慢病毒载体对C3H10T1/2细胞感染效率达90.36%;3个靶点(抑制效率分别为76.8%5、5.1%和11.7%)均有干扰效果,与正常细胞比较,Sh1靶点干扰效果最为显著(76.8%,P<0.05)。结论成功构建高效沉默Islet-1基因慢病毒载体。
- 智深深朱静田杰刘官信鲁荣林建萍刘建平
- 关键词：慢病毒感染RNA干扰细胞分化
- Islet-1诱导C_3H_(10)T1/2细胞向心肌样细胞分化过程中对心肌特异蛋白基因上组蛋白乙酰化的促进作用被引量：3
- 2012年
- 目的研究Islet-1诱导C3H10T1/2细胞定向分化为心肌样细胞过程中表达增加的心肌特异蛋白基因GATA4、NKX2.5、MEF2c上组蛋白乙酰化水平的变化情况。方法 Islet-1基因慢病毒感染小鼠骨髓间充质干细胞C3H10,Western blot检测转染后乙酰化的组蛋白H3表达情况,逆转录及实时荧光定量PCR时序性检测出心肌特异性蛋白基因GATA4、NKX2.5、MEF2c的mRNA表达达高峰的时间点,采用染色质免疫共沉淀技术(chromatin immunoprecipitation,CHIP),用CHIP级乙酰化H3抗体免疫沉淀与其所结合的DNA,采用实时荧光定量PCR扩增抗体所富集的心肌特异性蛋白基因GATA4、NKX2.5、MEF2c启动子区域的DNA量,比较感染组和未感染组与抗体所结合的上述3种心肌特异蛋白基因的表达情况。结果感染高表达Islet-1的C3H10T1/2细胞组蛋白H3的乙酰化水平较未感染组升高3.04倍(P<0.05),在心肌特异性蛋白基因GATA4、NKX2.5、MEF2C的mRNA表达达高峰的2周时间点,乙酰化的H3抗体所结合的心肌特异性蛋白基因GATA4、NKX2.5、MEF2c与未转染Islet-1的细胞组相比较,表达增加(P<0.05)。结论高表达Is-let-1之后C3H10T1/2细胞定向分化为心肌样细胞过程中表达增加的心肌特异蛋白基因上组蛋白乙酰化水平增高。
- 鲁荣朱静田杰刘官信林建萍刘建平
- 关键词：乙酰化
- Islet-1在乙酰化调控网络中特异性辅助C3H10T1/2细胞向心肌样细胞分化被引量：4
- 2012年
- 目的筛选并分析转染Islet-1慢病毒载体的C3H10T1/2细胞转化为心肌样细胞过程中与Islet-1相互作用的组蛋白乙酰化酶(HATs)和组蛋白去乙酰化酶(HDACs),明确Islet-1在C3H10T1/2细胞分化为心肌样细胞乙酰化调控网络中的关键枢纽作用。方法培养转染Islet-1慢病毒载体的C3H10T1/2细胞,观察细胞形态。免疫荧光和免疫印迹检测Islet-1的表达部位和最高表达时间点。免疫共沉淀与Islet-1结合的蛋白。免疫印迹验证Islet-1相互作用的HATs和HDACs。结果诱导组细胞形态出现心肌样细胞改变。各组Islet-1主要在胞质表达。诱导组Islet-1表达量在诱导后3周最高(0.782±0.015)。诱导组Islet-1表达量显著高于空白对照组和C3H10组(分别为0.819±0.026,0.127±0.006和0.126±0.001)(P<0.05),免疫共沉淀技术可行。与Islet-1相互作用的HATs和HDACs有GCN5、P300/CBP和HDAC4。结论 Islet-1与GCN5、P300/CBP和HDAC4相互作用特异性辅助C3H10T1/2细胞向心肌样细胞分化。
- 林建萍田杰刘官信鲁荣刘建平智深深朱静
- 关键词：C3H10T1/2细胞心肌样细胞组蛋白乙酰化
- Islet-1 Promotes Cardiac Specific Differentiation of C3H10T1/2 Cells through Histone Acetylation Regulation
- Objective To investigate the effect of Islet-1 on the process of mesenchymai stem cells (MSCs) differentiation...
- 尹耐靖Lu RongLIN Jian-pingZHI Shen-shenYANG Chun-meiZHANG Chun-minTlAN Jie朱静
- 关键词：CARDIOMYOCYTEDIFFERENTIATION
- 文献传递
- 肿瘤微环境中致骨髓间充质干细胞瘤化因子作用分析
- 证实并分析肿瘤微环境培养存在的致瘤性酪氨酸激酶信号分子IL-6,BFGF,HGF在致骨髓间充质干细胞(MSCs)瘤化的作用。采取骨髓贴壁法获得纯化的MSCs;大鼠皮层星型胶质细胞纯化法获得星型胶质细胞;实验组1采取C6胶...
- 刘建平朱静田杰吕铁伟鲁荣邓兵林建萍智深深
- 关键词：微环境肿瘤微环境骨髓间充质干细胞
- 文献传递
