国家自然科学基金(30973215)
- 作品数：5 被引量：40H指数：4
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- 相关机构：四川大学泸州医学院附属医院教育部更多>>
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- 脑源性神经生长因子经自噬对胚鼠神经元缺氧损伤的保护作用被引量：1
- 2012年
- 目的探讨脑源性神经生长因子(BDNF)对胚鼠缺氧神经元是否有保护作用及其机制是否与激活自噬有关。方法将SD大鼠胚鼠(孕17～19 d)的大脑皮质神经元在体外进行原代细胞培养,并进行神经元鉴定。培养7～10 d,选取生长良好的神经元用于前后两部分实验。1.第一部分随机分为3组,对照组:不加入药物,只作缺氧处理;3-甲基腺嘌呤组(3-MA组):提前加入不同浓度的3-MA后作缺氧处理,依次为5 mmol.L-13-MA组、10 mmol.L-13-MA组、20 mmol.L-13-MA组;BDNF组:提前加入不同浓度的BDNF后作缺氧处理,依次为50μg.L-1BDNF组、100μg.L-1BDNF组、200μg.L-1BDNF组。观察不同剂量3-MA、BDNF对缺氧神经元损伤的作用。之后以细胞计数盒-8(CCK-8)测定各组细胞活力,确定干预缺氧神经元的最佳药物浓度。2.第二部分分为3组,对照组:单纯缺氧,不加药物;100μg.L-1BDNF组:加入100μg.L-1BDNF;10 mmol.L-13-MA组:加入10 mmol.L-13-MA。免疫蛋白印迹法检测3组缺氧神经元在不同缺氧时间点细胞自噬微管相关蛋白轻链3(LC3)的表达情况,以LC3Ⅱ/ac-tin的相对表达量判断自噬发生的程度。结果 1.免疫荧光鉴定:与未缺氧神经元比较,缺氧神经元突触回缩,细胞网状结构被破坏。2.神经元细胞活力:50μg.L-1BDNF组缺氧神经元细胞活力最强,100μg.L-1BDNF组缺氧神经元细胞活力其次(Pa<0.05);随3-MA剂量加大,各剂量组神经元活力明显降低。3.免疫印迹:于缺氧1 h、3 h、5 h,100μg.L-1BDNF组缺氧神经元的LC3表达量,均较对照组相应时间点明显上调(Pa<0.05)。结论 BDNF通过自噬途径对缺氧损伤神经元起保护作用。
- 陈艾周晖童煜毛萌
- 关键词：脑源性神经生长因子神经元自噬
- 脑源性神经营养因子通过PI3K/Akt/mTOR信号途径对胚鼠缺氧神经元的保护作用被引量：18
- 2013年
- 目的探讨脑源性神经生长因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)对缺氧(oxygen deprivation,OD)神经元的保护作用是否与激活自噬有关,其信号通路是否通过PI3K/Akt/mTOR途径。方法 1)建立胚鼠神经元OD损伤模型;CCK-8法观察不同浓度BDNF对OD神经元细胞活性的影响;2)检测OD神经元1,3,5h自噬微管相关蛋白轻链3(LC3)的表达,情况观察BDNF对OD神经元的保护作用是否与自噬有关;3)检测p-Akt,p-mTOR,p-p70S6K以及LC3II的表达,对比BDNF与自噬激活剂雷帕霉素(mammalian target of rapamycin,Rapamycin)对Akt/mTOR/p70S6K的影响,以及自噬被3-MA抑制后,BDNF对Akt/mTOR/p70S6K的影响。结果 1)50μg/L BDNF可对OD神经元起保护作用(P<0.05),100μg/L BDNF效应次之;2)BDNF和/或Rapamycin在下调p-Akt/p-mTOR/p-p70S6K表达的同时可上调LC3II的表达;当3-MA抑制自噬后,BDNF对LC3II的上调作用被抑制。结论 BDNF通过PI3K/Akt/mTOR/p70S6K信号途径激活自噬,发挥对OD神经元的保护作用。
- 陈艾熊励晶马骄童煜毛萌
- 关键词：脑源性神经生长因子自噬哺乳动物雷帕霉素靶蛋白
- PC12细胞氧糖剥夺/再灌注损伤中自噬与凋亡现象被引量：6
- 2012年
- 目的观察氧糖剥夺/再灌注(OGD/OGD-R)诱导大鼠嗜铬细胞瘤细胞PC12细胞自噬和凋亡的发生及进展。方法PC12细胞经氧糖剥夺及再灌注处理建立OGD/OGD-R模型,在处理不同时间点,应用流式细胞仪检测OGD组及OGD-R组细胞活性和凋亡率;Western blot法检测自噬相关蛋白LC3、Beclin 1表达;免疫荧光法观察自噬小体;分别使用自噬上下游抑制剂(3-甲基腺嘌呤、E64 d+pepstatin A)进行调控,观察自噬的波动。结果随着氧糖剥夺时间的延长,OGD组细胞形态损伤逐步加重,凋亡率显著增高,呈时间依赖性;OGD-R组早期细胞活性略有恢复,随着再灌注时程的延长,细胞凋亡率逐渐增高。自噬相关蛋白LC3Ⅱ在OGD短暂处理后其表达即有上升,3 h左右达到峰值,6～8 h恢复到基础水平;Beclin 1蛋白呈先上升后平稳下降趋势。OGD 3 h时间点诱导自噬合并3-甲基腺嘌呤处理后自噬体减少明显;而E64 d+pepstatin A可导致LC3Ⅱ的积聚。OGD-R阶段LC3Ⅱ进一步升高至再灌注12 h后开始下降,Beclin 1蛋白表达呈升高趋势并持续至再灌注24 h。结论 OGD/OGD-R均能激活PC12细胞自噬与凋亡,可为探索自噬与凋亡间潜在的串流奠定基础。
- 董琳童煜毛萌
- 关键词：自噬PC12氧糖剥夺再灌注
- 小自噬的研究进展被引量：7
- 2012年
- 自噬（autophagy）是继坏死和凋亡后发现的第3种细胞死亡形式,与疾病的发生息息相关,是目前细胞领域研究的热点之一.自噬是指细胞在自噬相关基因（autophagy-related gene,Atg）的调控下利用溶酶体/液泡降解自身受损的细胞器和大分子物质的过程,在进化过程中有高度的保守性.本文就目前小自噬（microautophagy）的研究近况作一综述.
- 陈艾童煜毛萌
- 关键词：基因
- Bcl-2蛋白对自噬和凋亡的调控及其相关机制被引量：8
- 2012年
- 凋亡和自噬是真核生物中重要的生理和病理现象，在哺乳动物发育，维持细胞稳态中起重要作用，并与疾病的发生、发展密切相关。两者在形态学、信号通路及生化代谢途径方面有着显著区别。凋亡的典型特征是胞质皱缩，核固缩，DNA降解，凋亡小体形成，而残余的细胞会被吞噬细胞识别、吞噬并降解；自噬以包裹胞质内容物的双层膜结构的自噬小体出现为标志，并与溶酶体融合形成自噬溶酶体。自噬在决定细胞命运时具有两面性：一方面，过度激活自噬会导致细胞死亡；另一方面，自噬也可作为细胞的自救行为，在某些病理状态下（如饥饿、生长因子剥夺、缺氧缺血等）通过降解胞质内容物维持自身存活。目前认为，凋亡和自噬有着潜在联系。Bcl-2蛋白是一个与凋亡和自噬均密切相关的蛋白。近年来，随着对Bel-2蛋白构象与功能的进一步研究，发现其在凋亡和自噬过程中具有双重调控的功能，并介导两者之间的交织和串流。本文重点综述Bcl-2蛋白在凋亡和自噬调控中的相关机制及其内在联系。一。
- 董琳童煜毛萌
- 关键词：BCL-2蛋白凋亡关机DNA降解BEL-2
