广东省自然科学基金(037049)
- 作品数：7 被引量：7H指数：2
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- 相关机构：南方医科大学南方医院中国人民解放军第153医院中国人民解放军71320部队医院更多>>
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- 大肠癌线粒体DNA高突变Ⅰ区及Ⅱ区突变及其功能意义被引量：6
- 2012年
- 目的检测大肠腺癌线粒体DNA(mtDNA)D环区的高突变Ⅰ区(HVRⅠ)及高突变Ⅱ区(HVRⅡ)的突变情况,并探讨其意义。方法以癌组织和正常组织为对照,对63例大肠腺癌组织样本中的mtDNA D环HVRⅠ及HVRⅡ进行聚合酶链反应(PCR)扩增和序列分析。结果 24例肿瘤组织样本mtDAN D环中共发现45个核苷酸改变,包括点突变、插入突变和缺失突变,突变率为38.1%,其中30个位于HVRⅠ和HVRⅡ范围内,其发生率为66.7%。在12例肿瘤组织mtDAN D环中发现21个核苷酸多态性变化,其中12个位于HVRⅠ和HVRⅡ范围内,其发生率为57.1%。结论 mtDNA D环HVRⅠ和HVRⅡ的突变与大肠癌的发生相关,在大肠癌的发生中具有重要的意义。
- 姬宏莉姬宏娟杜芳曹小勇马永全
- 关键词：线粒体DNA大肠腺癌突变多态性
- mtDNA突变与大肠癌发病关系的基础研究
- 2007年
- 目的观察大肠癌突变型mtDNA转导NIH3T3细胞后转染细胞的生物学特性。方法通过脂质体法(lipofection2000TM)将大肠癌细胞突变的mtDNA真核表达载体转染NIH3T3细胞,利用G418抗性筛选克隆细胞;用荧光标记的染色体原位杂交(FISH)观察mtDNA在核内的整合情况;观察转染前后细胞异型性及进行染色体核型分析;PCR法检测转染细胞线粒体突变情况;流式细胞仪(FCM)检测转染细胞的凋亡情况;用四唑盐比色法(MTT)测定不同组间细胞增殖的吸光度值。结果突变的大肠癌mtDNA可通过影响NIH3T3细胞的mtDNA的突变、多态性和通过外源性mtDNA在核内的整合从而影响NIH3T3细胞的染色体核型及细胞增殖、凋亡等生物学行为。结论突变型mtDNA可能参与大肠癌的发生与发展。
- 肖冰宋卫兵姬宏莉阎丽赖卓胜王亚东
- 关键词：线粒体DNA突变荧光原位杂交细胞增殖
- 大肠癌线粒体DNA诱导NIH3T3细胞D-环突变被引量：2
- 2011年
- 目的观察突变的大肠癌细胞线粒体DNA(mtDNA)转染NIH3T3细胞后转染细胞mtDNA D-环突变特性。方法通过脂质体法(Lipofection 2000TM)将大肠癌细胞突变的mtDNA真核表达载体转染NIH3T3细胞,利用G418抗性筛选克隆细胞;用PCR法检测转染细胞线粒体突变情况。结果突变mtDNA导致转染细胞mtDNA的突变和多态性变化。结论突变的大肠癌mtDNA可致NIH3T3细胞mtDNA位点变化,但具体的机制和过程有待于进一步研究。
- 姬宏莉姬宏娟宋卫兵马永全杜芳王辉肖冰
- 关键词：线粒体DNA突变
- 人大肠癌线粒体DNA重组质粒的构建及对NIH3T3细胞的转染
- 2005年
- 目的: 构建pcDNA3 1( +) mtDNA真核表达重组体,并导入NIH3T3细胞.方法: 提取大肠癌细胞株(SW480,Lovo,HT29)mtDNA,扩增D loop区,产物用DNA自动测序法进行序列分析.利用DNA重组技术将其定向插人真核表达质粒pcDNA3 1( +),并用脂质体法导入NIH3T3细胞.结果:大肠癌细胞株SW480,Lovo,HT29细胞mtDNAD loop分别有10, 9, 8个突变位点.成功克隆1119kb的mtDNAD loop区至表达质粒pcDNA3 1( +),并导入NIH3T3细胞中.结论: 成功构建了pcDNA3 1( +) mtDNA真核表达重组体,并成功导入NIH3T3细胞中.
- 宋卫兵肖冰阎丽李良仁彭丹丹吴倩倩叶方鹏马莉
- 关键词：线粒体DNAD-环区质粒
- 突变的大肠癌线粒体DNA转染NIH3T3及LST细胞的研究被引量：1
- 2008年
- 目的了解大肠癌细胞株(SW480,LOVO,HT29)线粒体DNA的突变,克隆突变的大肠癌线粒体DNA(mtDNA)基因,构建pcDNA3.1(+)-mtDNA真核表达重组体,并导人NIH3T3及LST细胞,以探讨线粒体基因突变与肿瘤发生的关系。方法提取大肠癌细胞株(SW480,LOVO,HT29)mtDNA,扩增D—LOOP区,产物用DNA自动测序法进行序列分析。利用DNA重组技术将其定向插人真核表达质粒pcDNA3.1(+),并用脂质体法导人NIH3T3及LST细胞。用MitoCapture Mitochondrial Apoptosis Detection Kit试剂盒染色后用流式细胞仪及荧光显微镜检测转染细胞的凋亡情况。扩增并测序分析转染细胞的D—LOOP区突变特点。结果检测出大肠癌细胞株SW480、LOVO和HT29细胞mtDNAD-LOOP分别有10、9和8个突变位点。转染前后,各组间细胞凋亡无明显变化。转染细胞的核基因组可扩增出目的基因及Neo基因。4株NIH3T3转染细胞mtDNAD-环区分别检测到9、11、8和4个突变点,并相应有3、4、3和2个多态性变化。结论转染突变的大肠癌细胞mtDNA后转染细胞的mtDNA均可发生多处的突变位点;通过转染后突变的外源性的mtDNA可以整合到核基因组内;突变的mtDNA转染LST细胞及NIH3T3细胞后,不影响转染细胞的凋亡改变;mtDNA的突变可能通过影响体细胞mtDNA的突变和通过外源性mtDNA在核内的整合从而影响癌基因或抑癌基因的表达异常,从而参与肿瘤的发生发展。
- 宋卫兵肖冰张振书毛丹姬宏莉王新颖
- 关键词：线粒体DNAD-环区突变转染
- 突变的大肠癌mtDNA影响NIH3T3细胞增殖和凋亡的研究
- 2007年
- 目的初步研究突变的大肠癌mtDNA与肿瘤发病机制的关系。方法将已构建的重组表达载体转染NIH3T3细胞,通过MTT法及流式细胞仪(FCM)分别观察其增殖和凋亡的影响。结果各组间NIH3T3细胞的凋亡率不同,差异有显著性(P<0.001),各组间NIH3T3细胞的增殖差异有显著性。结论突变的大肠癌mtD-NA可通过影响NIH3T3细胞的生物学行为,致其有恶性转化倾向,但具体的机制和过程有待于进一步研究。
- 姬宏莉肖冰陈佳奇张宇声宋卫兵姬宏娟
- 关键词：线粒体DNA转染
- 大肠癌细胞线粒体DNAD-环区的突变
- 2005年
- 目的研究线粒体DNAD-环区在大肠癌细胞中的突变情况。方法用PCR与直接测序相结合的方法,对比分析三株大肠癌细胞系和一例原代培养的正常肠上皮细胞的线粒体DNAD-环区的突变位点。结果三株大肠癌细胞系和正常肠上皮细胞的线粒体DNAD-环区均存在不同程度的点突变,其中72位C→T,73位A→G,16298位C→T,16519位T→C这4个突变位点在3株癌细胞和正常肠上皮细胞中均可检测到。在SW480和Lovo细胞中检测到16224位T→C、16311位T→C两个相同的突变位点,在SW480和HT29中检测到114位C→T、498位C→T、16234位C→T3个相同的突变位点,不同大肠癌细胞系中相同的突变位点考虑为细胞的特征性改变。结论大肠癌细胞线粒体DNAD-环区具有多态性和特征性突变,细胞特征性的突变可能与大肠癌患者的易感性有关。
- 阎丽肖冰宋卫兵叶方朋赖卓胜王亚东
- 关键词：线粒体DNAD-环区大肠癌细胞系特征性改变直接测序HT29
