您的位置： 专家智库 > >

广东省自然科学基金(04011314)

作品数：4 被引量：19H指数：2
相关作者：田生礼张建华邢苗刘士德刘刚更多>>
相关机构：深圳大学深圳市南山区疾病预防控制中心深圳市微生物基因工程重点实验室更多>>
发文基金：广东省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
相关领域：生物学更多>>

文献类型

  • 4篇中文期刊文章

领域

  • 4篇生物学

主题

  • 3篇多头绒泡菌
  • 2篇酵母
  • 1篇原质团
  • 1篇酶基因
  • 1篇酵母菌
  • 1篇酵母菌发酵
  • 1篇酵母双杂交
  • 1篇碱性纤维素酶
  • 1篇发酵
  • 1篇巴氏毕赤酵母
  • 1篇毕赤酵母
  • 1篇PROTEI...
  • 1篇RIBOSO...
  • 1篇SIRNA
  • 1篇GLUCAN...
  • 1篇沉默
  • 1篇PLASMI...

机构

  • 4篇深圳大学
  • 1篇华南农业大学
  • 1篇深圳市南山区...
  • 1篇深圳市微生物...

作者

  • 4篇田生礼
  • 3篇刘士德
  • 3篇邢苗
  • 3篇张建华
  • 1篇李明华
  • 1篇林子扬
  • 1篇孔舒
  • 1篇王绍文
  • 1篇程彩霞
  • 1篇周卓龙
  • 1篇郑硕
  • 1篇欧阳秋玲
  • 1篇刘刚

传媒

  • 1篇中国生物制品...
  • 1篇生物工程学报
  • 1篇深圳大学学报...
  • 1篇分子细胞生物...

年份

  • 2篇2009
  • 1篇2008
  • 1篇2006
共 4 条 记 录，以下是 1-4
全选 清除 导出
排序方式：
多头绒泡菌微原质团瞬时表达系统的构建
2009年
真核生物多头绒泡菌的原质团是研究细胞周期的好材料。但尚无合适的表达体系可供选择。本研究用多头绒泡菌ardC actin基因启动子和终止子分别替换哺乳动物细胞表达质粒pDsRed1-N1的CMVIE和SV40 polyA片段,构建了多头绒泡菌红色荧光蛋白(RFP)表达质粒pXM1;用PardC-MCS-DsRed1-TardC替换pTB38表达盒PardC-hph-TardC,构建了多头绒泡菌RFP表达质粒pXM2。将多头绒泡菌转录延伸因子类似蛋白(PELF1)基因与质粒pXM2重组,构建了PELF1红色荧光融合蛋白(PELF1-RFP)表达质粒pXM2-pelf1。通过荧光显微镜和激光扫描共聚焦显微镜观察RFP表达发现,电转参数为4kV/cm(电场)、1A(电流)、70μs(电击时间)时,质粒pXM1和pXM2电转多头绒泡菌微原质团(≤500μm)后24～48h内,RFP荧光最显著;而PELF1-RFP则主要聚集在多头绒泡菌细胞核,说明本试验建立的表达系统可以用于研究特定蛋白在多头绒泡菌内的瞬时表达。
刘士德程彩霞林子扬张建华李明华周卓龙田生礼邢苗
关键词：多头绒泡菌
采用酵母双杂交法筛选PSRPK相关蛋白基因被引量：3
2006年
本课题组在前期研究中,从多头绒泡菌中分离到一个SR蛋白激酶基因psrpk,并将其编码蛋白命名为PSRPK(SR protein kinase ofPhysarum Polycephalum).为分离PSRPK相关蛋白基因以了解PSRPK的功能,构建了转化率为2×106转化子/3μg pGADT7-Rec、密度为5.35×108cells/mL、滴度为2.34×109cfu/mL的多头绒泡菌酵母双杂交AD库.以PSRPK为饵蛋白筛选该文库得到接合率为41.18%的杂交酵母,在SD/-Leu/-Trp/-Ade/-H is培养板上筛选获得1476个杂交克隆,其中,X-gal滤纸显色呈强蓝色的克隆有342个.对大于500 bp的67个克隆测序获得35个cDNA片段,其中编码Plasm in C、branched-chain am inoacid am inotransferase(BCAT)类似蛋白、MSF1类似蛋白、m ixed-linked glucanase precursor类似蛋白、FCY1p类似蛋白和40S ribosomal protein S2类似蛋白等7个cDNA片段在阳性杂交酵母克隆中出现多次,其余仅出现一次.在35个cDNA片段的编码序列中有15个具有同源蛋白,31个编码序列的丝氨酸含量大于或等于6%,符合激酶底物的组成特征.
欧阳秋玲刘士德张建华王绍文田生礼邢苗
关键词：多头绒泡菌酵母双杂交PLASMINGLUCANASERIBOSOMALPROTEIN
碱性纤维素酶基因在巴氏毕赤酵母中的表达及重组酵母菌发酵工艺的优化被引量：15
2009年
目的克隆碱性纤维素酶基因,构建酵母整合型表达质粒,在巴氏毕赤酵母中表达,并对重组菌的发酵工艺进行优化。方法应用PCR技术从嗜碱性芽孢杆菌ATCC21833中扩增碱性纤维素酶基因,克隆至酵母整合型表达载体pGAPZαA中,构建重组表达质粒pGAPZαA-ATCC21833,并转化至巴氏毕赤酵母GS115。通过单因素实验及正交实验,确定重组酵母的最佳发酵培养基。在20L发酵罐中进行高密度发酵,观察碳源对批式发酵的影响,并检测在4种流加方式(连续恒速流加、间歇匀速流加、间歇递减流加、维持底物浓度流加)下的菌体干重及发酵液中的酶活性。结果重组表达质粒pGAPZαA-ATCC21833经酶切及DNA测序证明构建正确,其基因序列与嗜碱性芽孢杆菌KSM-635的碱性纤维素酶基因序列一致。最佳发酵培养基组成为6%葡萄糖、2%硫酸铵、12g/L磷酸二氢钾。碳源浓度对于重组酵母菌体生长及产酶至关重要。SDS-PAGE表明表达产物的相对分子质量约为103000。维持底物浓度的流加方式可获得最高的菌体干重(29.8g/L)及酶活力(24U/ml)。结论已成功构建了表达碱性纤维素酶的巴氏毕赤酵母工程菌,并确定了维持底物浓度的流加方式为最佳发酵方式。
田生礼邵睿刘刚孔舒
关键词：碱性纤维素酶巴氏毕赤酵母发酵
siRNA对多头绒泡菌丝氨酸/精氨酸蛋白激酶表达的沉默被引量：1
2008年
SR蛋白激酶(serine/arginine protein-specific kinase,SRPK)是一类特异磷酸化剪接因子SR蛋白的激酶家族,可调节SR蛋白的选择型剪接,影响SR蛋白在核内的分布与定位,在pre-mRNA剪接调控上具有重要的作用。目前对于多头绒泡菌SRPK的功能仍不清楚。为了进一步研究PSRPK的功能,设计可转录小干扰RNA(siRNA)的寡核苷酸序列含U6启动子的载体pSIREN-RetroQ定向连接,构建了真核表达质粒pSIREN-PSRPK-1,pSIREN-PSRPK-2,pSIREN-PSRPK-3,pSIREN-PSRPK-4,pSIREN-PSRPK-5及对照质粒pSIREN-PSRPK-Neg。把编码PSRPK基因的cDNA与红色荧光蛋白表达载体pDsRed-N1重组,构建了表达PSRPK-红色荧光融合蛋白的表达质粒pP-SRPK-DsRed。将真核表达质粒和质粒pPSRPK-DsRed共转染HEK293细胞。转染后72h通过倒置荧光显微镜观察,结果表明,pSIREN-PSRPK-2和pSIREN-PSRPK-5可以有效沉默红色荧光融合蛋白的表达;进一步采用RT-PCR和Northern点杂交分析表明,pSIREN-PSRPK-2和pSIREN-PSRPK-5对红色荧光融合蛋白mRNA表达具有明显的抑制作用与倒置荧光显微镜下观察到的结果一致。这为进一步研究多头绒泡菌SRPK的功能奠定了实验基础。
田生礼郑硕刘士德张建华邢苗
关键词：SIRNA多头绒泡菌
全选 清除 导出
共1页<1>
聚类工具0