国家自然科学基金(81170204)
- 作品数：6 被引量：54H指数：4
- 相关作者：李剑敏吴玲戴爽朱再胜刘根林更多>>
- 相关机构：温州医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金浙江省自然科学基金浙江省医药卫生科学研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- Drp1和Mfn2在棕榈酸诱导大鼠肝细胞损伤中的作用机制及姜黄素衍生物L6H4的干预作用被引量：7
- 2016年
- 目的:研究棕榈酸(PA)诱导肝细胞损伤的体外模拟非酒精性脂肪肝(NAFLD)模型中线粒体发动相关蛋白1(Drp1)和融合蛋白2(Mfn2)的作用机制以及姜黄素衍生物L6H4的保护作用。方法:1分别以不同浓度的PA、油酸(OA)和PA+姜黄素衍生物L6H4的混合培养基培养大鼠BRL-3A正常肝细胞24 h。用MTT法检测细胞活力,以筛选制作体外模拟NAFLD模型的最佳PA浓度及姜黄素衍生物L6H4的干预浓度。2将细胞分为4组:对照组(CON组)、油酸组(OA组)、棕榈酸组(PA组)及姜黄素衍生物L6H4干预组(L6H4组),分别给予正常培养基、含有OA的培养基、含有PA的培养基及含有PA和姜黄素衍生物L6H4的混合培养基进行干预,24 h后收获细胞。分别用羟胺法测定总超氧化物歧化酶(T-SOD)含量、硫代巴比妥酸法测定丙二醛(MDA)含量、Real-time PCR及Western Blot法检测肝细胞Drp1、Mfn2、Bcl-2、Bax、Caspase-3、TNF-αm RNA及蛋白的表达。结果:1不同浓度PA对BRL-3A细胞的生长均具有一定的抑制作用,差异具有统计学意义(P<0.05),并呈明显剂量依赖关系,0.1 mmol/L是分界点,而0.05 mmol/L OA对细胞活力无明显影响。因此选择0.05 mmol/L PA作为最佳造模浓度以建立NAFLD体外模型。2当姜黄素衍生物L6H4干预浓度≤10μmol/L时,细胞活力均高于75%,浓度>20μmol/L时,细胞活力降至50%以下,差异具有统计学意义(P<0.05)。10μmol/L时是分界点,因此选择5μmol/L作为后续L6H4干预浓度。3与CON组相比,PA组细胞MDA含量、Drp1、Bax、Caspase-3、TNF-α的m RNA及蛋白的表达均显著增加,差异均具有统计学意义(P<0.05);而T-SOD活力、Mfn2、Bcl-2的m RNA及蛋白表达则显著下降,差异均具有统计学意义(P<0.05);与PA组相比,L6H4组的MDA含量、Drp1、Bax、Caspase-3、TNF-α的m RNA及蛋白的表达均显著降低,差异均具有统计学意义(P<0.05),T-SOD活力、Bcl-2 m RNA及蛋白的表达显著提高,差异均具有统计学意义(P<0.05),但Mfn2的表达
- 郑靖宇吴欢汤雯刘成丁婷婷戴爽吴玲朱再胜李剑敏
- 关键词：棕榈酸
- 银杏叶提取物对1型糖尿病心肌病大鼠心肌Bcl-2、Bax和caspase-3表达的影响被引量：14
- 2014年
- 目的探讨银杏叶提取物(extract of Ginkgo biloba,EGB)对1型糖尿病心肌病大鼠心肌Bcl-2、Bax和caspase-3表达的影响。方法将30只SD雄性大鼠随机分成3组:正常对照组(Con组,n=10)、糖尿病模型组(DM组,n=10)和银杏叶提取物治疗组(EGB组,n=10)。用链脲佐菌素(strepozotocin,STZ)进行腹腔注射,建立1型糖尿病动物模型后用银杏叶提取物注射液腹腔注射建立EGB组,其余两组给予相同体积的生理盐水。于12周末用超声心动图仪测定左心室舒张末期容积(LVIDV)、左心室收缩末期容积(LVISV)、左心室射血分数(LVEF)和每搏射血量(SV);测定左心室重量指数、血糖和血胰岛素水平;用TUNEL法测定心肌细胞的凋亡指数(AI);用RT-PCR和Western blot法分别检测其Bcl-2、Bax和caspase-3的表达。结果与Con组相比,DM组大鼠LVIDV(P<0.01)、SV(P<0.01)、胰岛素含量(P<0.01)和心肌组织Bcl-2(P<0.05)的表达都显著降低;而左心室重量指数和血糖浓度(P<0.01)、心肌组织中Bax(P<0.05)、caspase-3(P<0.05)的表达以及Bax/Bcl-2比例均明显升高。当EGB干预治疗后,与DM组相比,大鼠LVIDV(P<0.05)、SV(P<0.05)、胰岛素含量(P<0.05)和心肌组织Bcl-2(P<0.05)的表达均显著升高;而左心室重量指数(P<0.05)、血糖浓度(P<0.01)、心肌组织中Bax(P<0.05)、caspase-3(P<0.05)的表达以及Bax/Bcl-2比例(P<0.05)均明显降低。但是TUNEL染色显示各组大鼠的心肌细胞凋亡率(cardiomyocyte apoptosis index,CAI)没有明显的差异(P>0.05)。结论银杏叶提取物可以通过增加Bcl-2的表达,降低Bax、caspase-3表达及Bax/Bcl-2比例,减少心肌细胞的凋亡,从而提高了糖尿病心肌病的心肌功能。这也提示EGB通过调节心肌凋亡相关基因的表达,减少细胞的凋亡是其治疗糖尿病心肌病的重要机制之一。
- 袁风菊卢璐刘根林李鹏郑靖宇杨开颜李剑敏
- 关键词：银杏叶提取物糖尿病心肌病
- 银杏叶提取物对Ⅰ型糖尿病心肌病大鼠心肌TGF-β_1和collagen表达及间质纤维化的影响被引量：23
- 2013年
- 目的:研究银杏叶提取物(EGB)对I型糖尿病心肌病大鼠心肌TGF-β1和collagen表达及间质纤维化的影响。方法:(1)在体实验,取30只雄性SD大鼠随机分为正常对照组(CON组)、糖尿病组(DM组)和EGB干预组(EGB组);用链脲佐菌素诱导I型糖尿病大鼠模型,于第12周末测定大鼠体重、左心室重量、血糖、糖化血红蛋白和血胰岛素;用超声心动图仪检测左室舒张末期容积(LVEDV)、左室收缩末期容积(LVESV)、左室射血分数(LVEF)和每搏射血量(SV);用天狼星红染色、免疫组织化学染色及RT-PCR方法分别检测左心室心肌胶原含量、转化生长因子β1(TGF-β1)蛋白表达及TGF-β1、procollagen I和collagen Ⅲ mRNA表达。(2)离体实验,分离培养SD大鼠乳鼠心肌细胞并分别用低糖(LG组)、高糖培养基(HG组)和EGB干预(HG+EGB组);RT-PCR方法检测各组心肌细胞TGF-β1、procollagen I和collagen Ⅲ的mRNA表达。结果:(1)与CON组相比,DM组大鼠血糖(P<0.01)、糖化血红蛋白(P<0.05)、左心室重量指数(P<0.01)、心肌间质胶原纤维含量(P<0.05)以及心肌组织内TGF-β1(P<0.05)、procollagen Ⅰ(P<0.05)和collagen Ⅲ(P<0.05)表达均明显升高,而血胰岛素水平(P<0.01)、LVEDV(P<0.01)和SV(P<0.01)明显降低;EGB干预治疗后,与DM组相比,EGB组糖尿病大鼠血糖(P<0.01)、糖化血红蛋白(P<0.05)、左心室重量指数(P<0.05)、心肌间质胶原纤维含量(P<0.05)以及心肌组织内TGF-β1(P<0.05)、procollagen Ⅰ(P<0.05)和collagen Ⅲ(P<0.05)表达均明显降低,血胰岛素水平(P<0.05)、LVEDV(P<0.05)和SV(P<0.05)明显升高。(2)与LG组比较,HG组心肌细胞TGF-β1(P<0.01)、procollagen Ⅰ(P<0.01)和collagen Ⅲ(P<0.01)mRNA表达明显升高;而EGB干预后,与HG组比较,EGB组心肌细胞TGF-β1(P<0.01)、procollagen Ⅰ(P<0.01)和collagen Ⅲ(P<0.01)mRNA表达明显降低。结论:EGB可通过调低糖尿病大鼠心肌组织TGF-β1的表达,减少心肌间质中collagen Ⅰ和Ⅲ合成及沉积,从而改善糖尿病心
- 刘根林袁风菊陆慈溧赵竞金可可田新桥邱俏蒙李剑敏
- 关键词：糖尿病银杏叶提取物心肌纤维化
- 银杏叶提取物对高糖环境中心肌细胞凋亡及Drp-1、Mfn-2表达的影响及其可能机制被引量：1
- 2015年
- 目的:探讨银杏叶提取物(EGB)对高糖环境中新生大鼠心肌细胞凋亡和线粒体凋亡途径中线粒体分裂蛋白1(Drp-1)、融合蛋白2(Mfn-2)、Bax、Bcl-2和Caspase-3表达的影响。方法:体外分离SD乳鼠心肌细胞,分别用低糖(LG组)、低糖+EGB(LG+EGB组)、高糖(HG组)和高糖+EGB(HG+EGB组)培养基培养心肌细胞。分别用流式细胞仪检测心肌细胞的凋亡率,用Western blot和/或RT-PCR分别检测心肌细胞Drp-1、Mfn-2、Bax、Bcl-2和Caspase-3的表达。结果:与LG组相比,HG组心肌细胞凋亡率、Drp-1、Bax、Caspase-3表达和Bax/Bcl-2比值均显著升高,差异均具有统计学意义(P<0.05),而Bcl-2、Mfn-2表达均降低,差异均具有统计学意义(P<0.05);与HG组相比,HG+EGB组心肌细胞凋亡率、Drp-1表达、Bax、Caspase-3、Bax/Bcl-2比值均显著降低,差异均具有统计学意义(P<0.05),而Bcl-2表达升高,差异具有统计学意义(P<0.05),但Mfn-2的表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论:EGB通过上调高糖环境中心肌细胞Bcl-2的表达,同时下调Drp-1、Bax和Caspase-3的表达,从而减少心肌细胞的凋亡。这可能是EGB防治糖尿病心肌病的机制之一。
- 李剑敏吴玲张迪郑靖宇戴爽袁风菊吴欢彭天庆
- 关键词：银杏叶提取物心肌细胞线粒体凋亡
- 高脂饮食诱导肥胖小鼠模型中氧化应激、炎症递质对骨代谢的影响及其可能机制被引量：10
- 2014年
- 目的:探讨高脂饮食诱导肥胖小鼠模型中氧化应激和炎症递质对骨代谢的影响及其可能机制。方法:选用5周龄C57BL/6雄性小鼠16只,随机平均分为正常饮食组、高脂饮食组,分别用正常饮食和高脂饮食喂养。于实验16周末,测各组动物体质量,处死后取内脏脂肪并测量内脏脂肪/体质量比值;用ELISA法测量血清抗酒石酸酸性磷酸酶5b(TRACP-5b)、血清骨钙素(OC)、白介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α);分别用硫代巴比妥酸(TBA)法和羟胺法检测胫骨骨组织丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性;用骨密度仪检测右侧股骨骨密度(BMD);分别用免疫组织化学技术和实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术检测骨组织骨保护素(OPG)和核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)蛋白及mRNA的表达;HE染色光镜观察左侧股骨组织形态学改变。结果:与正常饮食组相比,高脂饮食组体质量、内脏脂肪/体质量比值、骨组织RANKL mRNA/OPG mRNA比值、血清TRACP-5b、IL-6和TNF-α水平、骨组织RANKL表达及骨组织MDA均明显升高,差异均具统计学意义(P<0.05);而血清OC水平、骨组织OPG表达、骨组织SOD及BMD均明显下降,差异均具统计学意义(P<0.05)。在组织形态学上,发现高脂饮食组股骨干骺端骨小梁分布稀疏,骨小梁变细及断裂,伴骨髓腔中有大量脂肪浸润。各指标的相关分析结果显示:BMD与骨组织SOD呈正相关(r=0.627,P<0.01),与内脏脂肪/体质量比值(r=-0.858,P<0.01)、骨组织MDA均呈负相关(r=-0.538,P<0.01);SOD与OPG mRNA呈显著正相关(r=0.637,P<0.01),与TNF-α(r=-0.673,P<0.01)、IL-6(r=-0.874,P<0.01)、RANKL mRNA(r=-0.760,P<0.01)及RANKL/OPG比值(r=-0.768,P<0.01)呈显著负相关;而MDA与TNF-α、IL-6、OPG mRNA、RANKL mRNA以及RANKL/OPG无显著相关性(P>0.05)。结论:高脂饮食诱导肥胖能导致骨质疏松病理组织学改变,其机制可能与其上调炎症递质表达和氧化应激增加有关。
- 朱再胜戴爽吴玲郑靖宇黄卡特李剑敏
- 关键词：高脂饮食骨保护素核因子-ΚB受体活化因子配体氧化应激
- SIRT1在非酒精性脂肪肝病大鼠肝脏中的表达及姜黄素衍生物L6H4的干预作用被引量：1
- 2018年
- 目的:探讨SIRT1在非酒精性脂肪肝病(NAFLD)模型大鼠肝脏中的表达改变及姜黄素衍生物L6H4干预作用。方法:雄性SD大鼠24只,随机均分为正常组(control组)、模型组(NAFLD组)和治疗组(L6H4组)。control组给予基础饲料,其余2组全程给予高脂饲料,并从第9周开始用姜黄素衍生物L6H4干预治疗,于第20周末处死各组大鼠。取全血检测各组大鼠的TG、TC、LDL-C及HDL-C水平;取肝组织分别用于HE及Masson染色观察大鼠肝组织病理学改变;羟胺法测定T-SOD活性及硫代巴比妥酸法测定MDA含量;RT-PCR及Westernblot检测大鼠肝脏组织SIRT1、MFN2及DRP1m RNA和蛋白表达情况。结果:光镜下,NAFLD组大鼠肝组织可见明显脂肪变性及纤维化,L6H4组肝组织病理变化较NAFLD组明显减轻。与control组比,NAFLD组大鼠血清中TG、TC和LDL-C浓度及肝组织中MDA含量和DRP1的表达量均明显增加,而血清HDL-C浓度及肝组织中T-SOD活性,SIRT1和MFN2的表达量均显著降低,差异均具有统计学意义(P<0.05);与NAFLD组相比,L6H4组大鼠血清中TG、TC和LDL-C的浓度及肝组织中MDA含量,DRP1的表达量均显著降低,而血清HDL-C浓度及肝组织中T-SOD活性,SIRT1和MFN2的表达量均明显升高,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:姜黄素衍生物L6H4对NAFLD具有保护作用,其机制可能是通过调高SIRT1的表达,从而减弱NAFLD中肝细胞对胰岛素的抵抗和脂质过氧化反应,减轻氧化应激损伤、抑制线粒体分裂。
- 丁婷婷吴杭菲刘成汤雯王圣凯郑靖宇朱再胜彭天庆
- 关键词：非酒精性脂肪性肝病线粒体融合蛋白2
