广州市科技计划项目(2002J1-C0361)
- 作品数：10 被引量：18H指数：3
- 相关作者：蒋建伟陈涛严玉霞陈超张小鹰更多>>
- 相关机构：暨南大学暨南大学附属第一医院焦作市人民医院更多>>
- 发文基金：广州市科技计划项目广东省医学科学技术研究基金广东省“十五”重大科技专项更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学更多>>
- 增殖细胞核抗原siRNA序列的设计、合成与筛选被引量：3
- 2008年
- 目的:设计并筛选能有效抑制人肝癌SMMC-7721细胞、人结肠癌Caco2细胞、人胃癌SCG-7901细胞增殖的增殖细胞核抗原(PCNA)siRNA。方法:总结以往提出的siRNA设计原则的基础上,设计4条PCNAsiRNA,体外转录合成PCNAsiRNA;并作用于3种肿瘤细胞,WST-8法检测细胞增殖活性,筛选能有效抑制肿瘤细胞增殖的siRNA序列;RT-PCR检测细胞PCNA mRNA水平;免疫细胞化学方法检测PCNA蛋白表达水平。结果:4条PCNA siRNA中,有3条序列(No.2、No.4、No.3)的siRNA能有效抑制3种肿瘤细胞的增殖;其中No.2、No.4作用效果最优,以50 nmol/L浓度作用48 h,对3种肿瘤细胞的增殖抑制率均可达到62%以上,No.2、No.4 PCNAsiRNA均能在mRNA和蛋白水平显著下调PCNA的表达。结论:PCNA siRNA能在体外有效抑制SMMC-7721细胞、Caco2细胞、SCG-7901细胞的增殖,其适宜作用浓度为50 nmol/L,适宜作用时间为48 h。
- 蒋建伟史金桃吴智慧曾慧兰严玉霞陈涛丁文婷
- 关键词：增殖细胞核抗原SIRNA结直肠肿瘤肝肿瘤胃肿瘤
- 增殖细胞核抗原反义核酸联合5-FU抑制肝癌细胞生长
- 2008年
- 目的:探讨增殖细胞核抗原(PCNA)基因反义寡核苷酸(ASODN)联合5-FU对离体肝癌细胞及小鼠肝癌生长的抑制作用。方法:用5-FU、5-FU联合PCNA ASODN、5-FU联合聚乙烯亚胺(PEI)介导的PCNA ASODN(PEI-ASODN)分别转染人肝癌SMMC-7721细胞,改良MTT法(WST法)分析细胞生长增殖抑制效果;建立小鼠肝癌腋下移植瘤和腹水瘤模型,腋下移植瘤模型小鼠,隔日给药共5次,第13天杀小鼠,观察小鼠瘤重、瘤体积改变;腹水瘤模型小鼠,连续腹腔注射给药7次,记录小鼠平均存活天数,绘制小鼠存活曲线。结果:5-FU联合PEI-ASODN时,5-FU对肝癌细胞的IC50降低为0.165μg/mL,肝癌细胞对5-FU敏感性提高了49.7倍;肝癌腋下移植瘤小鼠各治疗组的瘤重、瘤体积均得到不同程度的抑制,其中以5-FU联合PCNA反义核酸组最高;对于腹水瘤小鼠,以5-FU和PCNA反义核酸联合治疗组平均生存时间最长。结论:5-FU联合PEI-ASODN能有效抑制肝癌细胞增殖,抑制小鼠肝癌的生长,延长小鼠存活时间。
- 吴志慧蒋建伟陈涛陈超丁文婷陈妙巧
- 关键词：肝癌反义核酸增殖细胞核抗原5-氟尿嘧啶
- 晚期糖基化终产物对人肾小管上皮细胞增殖和凋亡的影响被引量：2
- 2008年
- 目的:研究晚期糖基化终产物(advanced glycation end products,AGEs)对人肾小管上皮细胞株(HKC)的细胞毒性作用。方法:以体外培养的HKC细胞为研究对象,采用MTT法测定不同质量浓度(0、50、100、200、400、800 mg/L)AGEs对HKC生长的抑制作用,应用流式细胞仪分析细胞的凋亡情况,RT-PCR分析不同浓度AGEs处理HKC后其IL-1β,TNF-α,HMGB1基因的转录水平变化。结果:AGEs质量浓度为100、200、400、800 mg/L时分别刺激HKC细胞24和48 h后,均能显著抑制细胞的增殖,且抑制作用具有时间和剂量依赖性。流式细胞仪分析发现,AGEs能促使HKC发生凋亡,凋亡率亦随AGEs浓度的增高而增加。RT-PCR方法检测显示,AGEs使HKC细胞IL-1β、TNF-α、HMGB1基因的表达上调。结论:AGEs可抑制人肾小管上皮细胞的增殖,并诱导其发生凋亡,此作用可能与其上调IL-1β、TNF-α和HMGB1基因的表达有关。
- 李琳娜王利娟何可可李海成何金花蒋建伟刘誉
- 关键词：晚期糖基化终产物细胞毒性人肾小管上皮细胞
- 促肝细胞生长素改善单侧输尿管梗阻大鼠肾脏纤维化的研究被引量：4
- 2007年
- 目的:研究促肝细胞生长素(hepatocyte growth-promoting factor,pHGF)改善梗阻性肾病肾小管间质纤维化的疗效和机制。方法:17只SD大鼠随机分为假手术组(SOR)、单侧输尿管梗阻组(UUO)和pHGF治疗组。给药组用促肝细胞生长素pHGF(30μg.kg-1.d-1)大鼠腹腔注射,其余组给予等剂量生理盐水。14 d后收获大鼠。通过测定肾皮质羟脯氨酸含量比较纤维化改变;肾脏病理分析用H.E.和Masson染色,免疫组化检测TGF-β1,α-SMA,FN在肾组织中的表达。结果:肾组织羟脯氨酸定量UUO组明显高于SOR组,pHGF组,pHGF组介于二者之间,P(0.01;Masson染色SOR组仅在血管和基底膜处有绿染的胶原纤维,UUO组胶原成分增多,而pHGF组较UUO组明显改善,P(0.01。免疫组化显示pHGF能明显降低梗阻肾组织TGF-β1,α-SMA,FN的表达水平降低,与UUO组比较,P(0.01。结论:pHGF能有效缓解梗阻性肾病肾小管间质纤维化。
- 陈超蒋建伟周序珑严玉霞吴颜晖陈涛张小鹰
- 关键词：促肝细胞生长素单侧输尿管梗阻肾间质纤维化
- CTGF反义寡核苷酸对大鼠肾间质纤维化的影响被引量：3
- 2008年
- 目的研究结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)反义寡核苷酸(antisense oligodeoxynucleotide,ASODN)对单侧输尿管梗阻(unilateral ureteral obstruction,UUO)大鼠肾间质纤维化的影响,探讨CTGF ASODN应用于临床的可能。方法32只SD大鼠随机分为假手术组(sham-operation group,SOR)、单侧输尿管梗阻组(unilateral ureteral obstruction group,UUO)、CTGF错义寡核苷酸(missense oligodeoxynucleotide,MSODN)对照组和CTGFASODN治疗组。第15天收获大鼠。碱水解法测定肾组织胶原含量;Masson染色观测肾皮质胶原染色情况;免疫组化检测α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、纤连蛋白(fibronectin,FN)、转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)在肾皮质中的蛋白表达。RT-PCR检测肾皮质中α-SMA的mRNA表达水平。结果肾皮质胶原检测CTGF ASODN组与UUO组、CTGF MSODN组比较,胶原含量减少(均P<0.01);Masson染色:CTGF ASODN组较UUO组、CTGF MSODN组胶原染色面积减少;免疫组化:CTGF ASODN与UUO组、CTGF MSODN组比较,肾皮质α-SMA,FN,TGF-β1的阳性表达面积、阳性染色强度均下降(均P<0.05);RT-PCR:CTGF ASODN组抑制α-SMA的mRNA表达水平与UUO组、CTGF MSODN组比较差异均有显著性(均P<0.05)。结论CTGF ASODN有效缓解UUO大鼠肾间质纤维化。
- 陈超蒋建伟周序珑严玉霞吴颜晖陈涛张小鹰
- 关键词：结缔组织生长因子反义寡核苷酸单侧输尿管梗阻肾间质纤维化
- 促肝细胞生长素部分逆转巨噬细胞趋化因子和马兜铃酸Ⅰ诱导的人肾小管上皮细胞转分化
- 2010年
- 目的观察促肝细胞生长素(hepatocyte growth-promoting factor,pHGF)对巨噬细胞趋化因子(monocyte chemo-tatic protein-1,MCP-1)协同马兜铃酸Ⅰ(aristolochic acidⅠ,AAⅠ)诱导的人肾小管上皮细胞(HKC)凋亡及上皮细胞-间质细胞转分化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的影响。方法体外培养的HKC随机分为:空白对照组、转分化模型组及不同浓度pHGF(0.15、1.5、15、150、1500ng/ml)处理组。转分化模型组采用MCP-1(0.1μg/ml)协同AAⅠ(10μg/ml)诱导HKC转分化模型;pHGF处理组采用不同浓度pHGF对转分化模型HKC进行处理;空白对照组常规培养。采用WST-8法和流式细胞术观察各组细胞增殖和凋亡情况;RT-PCR检测各组细胞α-SMA mRNA表达;免疫组化检测各组细胞α-SMA、TGF-β1、FN蛋白的表达。结果与空白对照组相比,转分化模型组、不同浓度pHGF处理组HKC细胞增殖抑制率,凋亡细胞所占比例,α-SMA mRNA表达均明显升高(P<0.01),提示转分化模型制备成功。与转分化模型组细胞相比,pHGF(150ng/ml)处理组HKC增殖抑制率明显降低(P<0.01),各浓度pHGF处理组HKC凋亡细胞所占比例均明显降低(P<0.01),HKC细胞α-SMA mRNA表达下调(150ng/ml pHGF处理组尤明显);α-SMA、TGF-β1、FN蛋白表达下调。结论pHGF(150ng/ml)可部分逆转MCP-1协同AAⅠ诱导的HKC增殖抑制、凋亡和EMT。
- 陈超蒋建伟周序珑严玉霞陈涛张小鹰
- 关键词：促肝细胞生长素肾小管上皮细胞细胞凋亡
- 晚期糖基化终产物对人肝细胞株LO2增殖和凋亡的影响被引量：2
- 2009年
- 目的:研究晚期糖基化终产物(AGEs)对人正常肝细胞株LO2的作用。方法:以体外培养的LO2细胞株为研究对象,采用MTT法测定不同质量浓度(0、3.75、7.5、15、30、60 g/L)AGEs对LO2生长的抑制作用,应用流式细胞仪分析细胞的凋亡情况,RT-PCR分析不同质量浓度AGEs处理LO2后其IL-1β,TNF-α,HMGB1的基因转录水平变化。结果:当LO2细胞在AGEs质量浓度分别为3.75、7.5、15、30、60 g/L保温48 h后,细胞的增殖均受到显著性抑制,且抑制作用具有剂量依赖性。流式细胞仪分析发现AGEs促使LO2发生凋亡,凋亡率亦随AGEs浓度增高而增加。RT-PCR方法检测显示,AGEs使LO2细胞中IL-1β,TNF-α,HMGB1的基因mRNA的表达水平增高。结论:AGEs可抑制人正常肝细胞株LO2的增殖和诱导其凋亡,并能上调IL-1β,TNF-α和HMGB1基因的表达。
- 李海成何金花王明刘誉
- 关键词：晚期糖基化终产物细胞凋亡毒性
- 增殖细胞核抗原小干扰RNA对人结肠癌CaCO_2细胞抑制作用被引量：4
- 2007年
- 目的观察增殖细胞核抗原(PCNA)小干扰RNA(siRNA)对人结肠癌CaCO_2细胞抑制作用。方法WST-8法和克隆形成抑制研究No.2和No.4 PCNA siRNA对CaCO_2细胞的作用;碘化丙锭(PI)单染检测细胞周期,Hochest33258染色观察凋亡形态,膜联蛋白(Annexin)V和PI双染测定凋亡百分率。结果No.2和No.4 PCNA siRNA与CaCO_2细胞作用,增殖抑制率分别为(72.24±1.01)%和(74.67±3.35)%;克隆形成抑制率均达90%;两种药物转染细胞均出现明显亚二倍体峰,Sub-G_1+G_0/G_1期减少,S+G_2/M期增多;siRNA处理组细胞有较多凋亡形态变化;凋亡率随浓度增加而增加,且早期凋亡率持续高于晚期凋亡/坏死率。结论PCNA siRNA显著抑制人结肠癌CaCO_2细胞增殖及克隆形成;细胞停留于G_2/M期,明显诱导细胞凋亡。
- 陈洁史金桃蒋建伟陈涛
- 关键词：增殖细胞核抗原小干扰RNA结肠癌
- PKC-α反义核酸提高SMMC-7721细胞对化疗药物的敏感性研究被引量：1
- 2008年
- 目的探讨蛋白激酶C(protein kinase c)反义核酸(antisense oligonucleotides,ASODN)联合5-Fu、HCPT、As2O3三种化疗药物对肝癌SMMC-7721的体外高效抑制作用。方法以聚乙烯亚胺(poly-ethylenei mine,PEI)作载体转染PKC-αASODN,用WST-8法检测单纯使用5-Fu、As2O3、HCPT三种化疗药物以及其联合PEI-ASODN对SMMC-7721细胞的增殖抑制作用,并分别计算抑制率和IC50。结果5-Fu、As2O3、HCPT与PEI-ASODN物联合使用后,其IC50分别降低到3.9μg/ml、2.67μmol/L、1.46μg/ml,化疗药物的敏感性分别提高到单用化疗药物的2.86、1.84和4.01倍。结论PEI介导的PKC-αASODN与化疗药物5-Fu、As2O3、HCPT联合使用,可提高肝癌细胞对化疗药物的敏感性,通过与化疗药物的相加或协同作用,减少化疗药物的用量。
- 陈涛蒋建伟黄志宏严玉霞陈超张小鹰
- 关键词：蛋白激酶C反义核酸化学治疗聚乙烯亚胺
- α-SMA在培养生长板软骨细胞中的表达
- 2007年
- 目的探讨α-SMA在原代培养生长板软骨细胞中的表达及传代培养对其表达的影响。方法分离、培养大鼠肋生长板软骨细胞(rat costochondral growth plate chondrocyte,RGC),免疫细胞化学(ICC)和Western blot分别对1-5代RGC中α-SMA的表达进行定性和半定量分析。结果原代培养的RGC不表达α-SMA,随着传代次数的增加,α-SMA阳性染色的细胞比例从原代的0增加到第5代的24.2±4.3%(n=3),Western blot结果与ICC结果一致。结论本研究首次发现原代培养的RGC并不表达α-SMA,随着RGC传代次数的增加,表达α-SMA的细胞比例和表达量不断升高。
- 季煜华曾耀英胡萍肇静娴
- 关键词：生长板软骨细胞Α-平滑肌肌动蛋白免疫细胞化学WESTERNBLOT
