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荔枝采后果皮褐变过程中差异表达基因的SSH分析被引量：4: 2013年; 以‘妃子笑’荔枝果实为材料,采用抑制差减杂交(SSH)与cDNA微阵列技术相结合,研究了采后荔枝果皮褐变过程中的基因差异表达。分别以采后0 h与32 h的果皮总RNA为驱动组与检测组,构建了正向与反向SSH文库,分别获得了282个与76个阳性克隆。通过cDNA微阵列杂交筛选获得了在采后32 h果皮中上调表达克隆17个,下调表达克隆49个,分别代表了在采后32 h果皮中上调表达基因16个和下调表达基因17个,其中有较多的热击蛋白基因、糖代谢相关基因、细胞壁代谢相关基因等。RT-PCR检测基因表达结果与cDNA微阵列杂交结果一致。; 王家保金志强李美英张新春; 关键词：荔枝抑制差减杂交微阵列

荔枝快速碱化因子基因的克隆与表达分析被引量：3: 2009年; 从已构建的荔枝果皮cDNA文库中挑取克隆测序,获得一条荔枝快速碱化因子(LcRALF)基因(GenBank登录号:EU024484)。该基因的cDNA全长为666bp,含1个381bp的开放读码结构,编码126个氨基酸。生物信息学分析表明,该基因的氨基酸序列与拟南芥、烟草等物种的RALF基因一致性较高,具有RALF基因氨基酸序列的典型特征。RT-PCR分析表明,该基因在荔枝果皮中特异表达,且在新采收的荔枝果皮中表达量最高。随着果皮的衰老该基因表达量逐渐下降。; 王家保贾彩红杨小亮金志强徐碧玉; 关键词：荔枝果皮基因克隆基因表达

荔枝LcAsr基因的生物信息学分析与载体构建被引量：2: 2009年; 根据荔枝果皮cDNA微阵列信号分析结果,对荔枝cDNA文库的BAO5-H4克隆测序。NCBI(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/)ORF分析发现其含有1个完整的开放读码框,编码152个氨基酸残基的多肽,为一全长cDNA序列。Blastx比对分析表明该基因编码的蛋白与其它植物来源的ASR(abscisic acid,stress and ripening inducible)蛋白高度同源,该基因被命名为LcAsr,通过PCR的方法获得其DNA全长序列。生物信息学分析结果表明,LcAsr基因的DNA序列全长为1177bp,读码框中间包含1个488bp的内含子。Protparam预测分析结果表明LcAsr基因编码蛋白的分子式为C756H1130N228O238S1,相对分子质量为17252.7,等电点pI6.10,富含Glu、His、Lys、Ala。Predictprotein预测该蛋白的二级结构主要是α螺旋,有1个酪氨酸激酶磷酸化位点、2个酪蛋白激酶II磷酸盐化位点、3个豆蔻酰化位点等,并具有很高的亲水性,预测该蛋白位于细胞核。构建了植物荧光表达载体pCAMBIA-LcAsr,并通过基因枪转化法转化洋葱表皮细胞进行瞬时表达,对LcASR蛋白进行亚细胞定位,结果表明LcASR蛋白定位于细胞核。; 董凤英王家保徐碧玉金志强; 关键词：荔枝生物信息学分析亚细胞定位

采后荔枝果皮抗坏血酸过氧化物酶基因的差异表达试验初报被引量：2: 2007年; 根据荔枝果皮APX基因cDNA全长,设计RT-PCR引物,以actin基因为内标,对采后不同储存时间荔枝果皮APX基因mRNA表达情况进行分析。结果表明:采后保湿储存处理的荔枝果皮APX基因mRNA相对丰度在采后24h迅速升高,而后升高幅度减缓。; 赖建勋金志强王家保; 关键词：荔枝果皮

利用SMART技术构建荔枝果皮cDNA文库被引量：13: 2009年; 以新采收荔枝果实的果皮为材料,利用SMART技术构建荔枝果皮cDNA文库。结果表明,初级噬菌体文库滴度为1.1×106pfu/mL,重组率为88.1%,文库的插入片段平均长度约为850bp;扩增文库滴度为2.6×109pfu/mL。对2444个克隆进行了测序,获得表达序列标签(EST)2136条,平均测序长度562bp。这些EST拼接成为836个簇,含单一序列549条,重叠群287个。初级文库的冗余度为60.8%。; 王家保徐碧玉金志强冯超; 关键词：荔枝果皮 CDNA文库

荔枝生物技术研究进展被引量：4: 2008年; 综述了离体培养、有利基因的克隆及遗传转化等生物技术的三个方面在荔枝研究中的应用进展。已有研究者分别建立了花粉培养、叶片培养、幼胚培养等获得植株的再生体系,克隆了部分荔枝基因,建立了基因枪与根癌农杆菌转化体系。这些研究为荔枝生物技术育种提供了基础。; 王家保贾彩红徐碧玉金志强李美英; 关键词：荔枝生物技术离体培养基因克隆

海南荔枝种质资源研究进展被引量：16: 2006年; 综述了海南荔枝资源的研究历史与主要成就、野生与栽培资源的分布、遗传多样性及资源保护概况,探讨了存在的问题,并对今后的研究工作提出了展望。; 王家保杜中军陈业渊金志强王向社赖建勋; 关键词：荔枝种质资源

荔枝采后保鲜处理技术研究进展被引量：7: 2008年; 综述了多种保鲜技术在荔枝贮藏保鲜中的应用,包括杀菌剂处理、硫处理、酸处理、热处理、涂膜处理、辐射处理、生物制剂处理、钙处理、生长调节剂处理及包装处理等,探讨了这些处理方法的技术优点及不足,以期为荔枝采后保鲜提供依据。; 王家保赫素云贾彩红金志强李美英杨小亮; 关键词：荔枝采后处理褐变保鲜

荔枝抗坏血酸过氧化物酶cDNA的克隆和分析被引量：2: 2007年; [目的]为了对荔枝果皮中克隆的APX基因进行cDNA序列分析。[方法]采用RT-PCR和RACE技术从荔枝果皮中扩增克隆抗坏血酸过氧化物酶基因,利用NCBI的ORFFinder程序分析克隆基因的序列,然后将ORF转换成氨基酸序列,进行BLASTX和BLASTN分析,最后用dnasismax2.6pro软件将荔枝与胡瓜、加杨等8种植物进行APX氨基酸序列配比和进化树分析。[结果]该基因cDNA全长1118bp,含有645bp的ORF,编码214个氨基酸。它编码的氨基酸序列与胡瓜、加杨、龙眼、落花生、豌豆、芸苔、帕拉港橡胶树和紫花苜蓿编码的氨基酸序列的同源性分别为83%、89%、97%、78%、84%、75%、79%和85%。推测该蛋白的分子式为C1946H3249N645O827S142,相对分子质量为53466.5,等电点为5.16,理论推导半衰期大于10h。[结论]该基因的克隆与cDNA序列分析为采后荔枝果皮中抗坏血酸过氧化物酶的基因工程操作奠定了基础。; 赖建勋金志强王家保; 关键词：荔枝果皮克隆

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国家自然科学基金(30460085)