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江西省卫生厅科技计划项目(20051022)
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相关作者:
刘娟
胡小燕
汪昌运
石珂
彭爱民
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彭爱民
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兔青光眼术后成纤维细胞内结缔组织生长因子的调节
2010年
目的观察青光眼滤过手术后滤过泡瘢痕内成纤维细胞中反义寡核苷酸(ASODN)对结缔组织生长因子(CTGF)的调节,为抗青光眼术后滤过泡区瘢痕形成提出新的解决思路。方法取兔眼小梁切除术后第5天的手术区结膜及板层巩膜行成纤维细胞的原代培养。培养的细胞根据干预方式的不同分为CTGFASODN-脂质体复合物组、CTGFASODN对照组、CTGF随机序列寡核苷酸(SCODN)-脂质体复合物组和空白对照组。利用脂质体介导,将经异硫氰酸荧光素(FITC)标记的CTGFASODN转染至兔抗青光眼滤过手术后滤过泡瘢痕组织成纤维细胞中,利用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测CTGFmRNA在成纤维细胞中的表达,采用Westernblot法检测CTGF蛋白的合成量,以相对灰度值为指标,观察CTGFASODN对CTGF在手术区结膜及板层巩膜行成纤维细胞中表达的抑制效果。结果组织块培养法培养的成纤维细胞在13~14d达到融合。CTGFASODN-脂质体复合物组转染6h后可见培养的细胞质中出现少量黄绿色荧光,12h后荧光依然存在;CTGFmRNA在成纤维细胞中表达的相对灰度值明显低于空白对照组(0.457±0.035vs0.790±0.037),差异有统计学意义(P<0.01);CTGF蛋白水平表达也呈相同趋势(0.177±0.022vs0.557±0.024)(P<0.01)。CTGFASODN对照组、CTGFSCODN-脂质体复合物组CTGF在成纤维细胞中的表达与空白对照组相比差异均无统计学意义(P>0.05)。结论脂质体能有效地将CTGFASODN转染进入体外培养的成纤维细胞;CTGF在青光眼滤过手术后的瘢痕形成过程中发挥重要作用;CTGFASODN能在脂质体介导下抑制CTGF在成纤维细胞中的表达。
汪昌运
胡小燕
彭爱民
石珂
刘娟
关键词:
结缔组织生长因子
反义寡核苷酸
青光眼滤过手术
成纤维细胞
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