中国农业科学院兰州兽医研究所所长基金
- 作品数：24 被引量：111H指数：8
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- 相关机构：中国农业科学院兰州兽医研究所西北民族大学甘肃农业大学更多>>
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- 口蹄疫病毒P12A和3C基因重组逆转录病毒表达载体的构建被引量：8
- 2006年
- 以A型口蹄疫病毒(FMDV)AV88(L)和XJ99株的P12X基因和AV88(L)3C基因的阳性克隆质粒为模板,用PCR扩增各基因片段,酶切后分步定向亚克隆至逆转录病毒表达载体pBABE-puro上经PCR、酶切鉴定及测序。结果表明,获得了2个含不同RGD基序的A型FMDV衣壳蛋白和蛋白酶基因的重组逆转录病毒表达载体pBABE-AV88(L)P1 2X3C和pBABE-XJ99 P1 2X3C,为研究安全、高效、低成本的FMDV空衣壳亚单位疫苗奠定了基础。
- 刘艳红李炯刘俊林刘湘涛尚佑军殷宏
- 关键词：A型口蹄疫病毒衣壳蛋白基因蛋白酶基因
- 兔IFN-γ基因的克隆、遗传进化分析及其表达被引量：9
- 2008年
- 运用RT-PCR技术对用ConA刺激后的中国白兔外周血淋巴细胞（PBMCr）进行扩增。将纯化后的PCR产物克隆人pMD18-T中进行序列测定。并进行遗传进化分析．结果发现：该基因全长501bp，编码167个氨基酸．其中前20个氨基酸残基构成信号肽序列．与不同物种IFN-γ基因相比，核苷酸和推导的氨基酸序列有一定的差异．在推导的中国白兔IFN-γ氨基酸序列中。在41～43、108～110和117～119位存在3个潜在的N-联糖基化位点，同时存在3个Cys残基．转化重组质粒pETIFN-γ的大肠杆菌BL21（DE3）经IPTG诱导后，重组菌菌体裂解物经SDS-PAGE电泳可检测到相对分子量为22．6kDa的重组蛋白．经凝胶薄层扫描．重组蛋白表达量可占菌体蛋白的19．2％．
- 孟庆玲乔军才学鹏闫鸿斌骆学农景志忠
- 关键词：中国白兔IFN-Γ基因克隆
- 绵羊痘病毒甘肃流行株糖蛋白基因orf118的克隆及序列分析被引量：5
- 2008年
- 从甘肃景泰疑似羊痘患病绵羊的皮肤组织中提取基因组DNA,利用PCR技术,克隆糖蛋白orf118基因.比较分析表明,该基因由516个核苷酸组成,编码171个氨基酸,相对分子质量为19500,其碱基组成极不平衡,其中A+T含量占72.48%,G+C含量仅占27.52%.甘肃景泰株orf118基因同绵羊痘病毒TU-V02127株之间的核苷酸同源性最高达99.8%,氨基酸的同源性为100%;与疙瘩皮肤病病毒肯尼亚株和山羊痘病毒G20-LKV株之间的同源性分别为96.5%和94.8%.结构预测结果显示,orf118蛋白为分泌蛋白,具有2个N键连结糖基化位点和1个跨膜区.以上结果表明,orf118蛋白在不同的绵羊痘病毒流行株之间非常保守,具有潜在的疫苗和诊断价值.
- 张冬峰郑亚东骆学农王晓霞陈轶霞李辉侯俊玲潘晓梅刘琼景志忠岳城才学鹏
- 关键词：绵羊痘病毒糖蛋白PCR
- 共表达口蹄疫病毒衣壳前体蛋白P1-2A基因和蛋白酶3C基因牛肾细胞株的筛选及稳定性被引量：4
- 2008年
- 【目的】筛选稳定表达口蹄疫病毒衣壳蛋白的牛肾细胞(Madin-Darby bovine kidney,MDBK)株。【方法】采用聚合酶链式反应(Polymerase chain reaction,PCR)方法从重组质粒pMD-P1-2A和pMD-3C中分别扩增口蹄疫病毒衣壳前体蛋白P1-2A基因和蛋白酶3C基因,将两基因依次插入逆转录病毒载体pBABE-puro。重组逆转录病毒载体pBABE-puro/P1-2A-3C和pVSV-G质粒载体用脂质体介导共转染GP2-293包装细胞。产生的重组逆转录病毒感染MDBK细胞后使用嘌呤霉素筛选抗性细胞。利用克隆环套取法得到单克隆细胞。经间接免疫荧光和酶联免疫吸附测定(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)方法检测MDBK细胞中衣壳蛋白的表达,并在电镜下观察口蹄疫病毒空衣壳。【结果】成功筛选到稳定表达口蹄疫病毒衣壳蛋白的MDBK细胞株,衣壳前体蛋白P1-2A在蛋白酶3C裂解作用下正确组装成空衣壳。【结论】该研究为口蹄疫亚单位疫苗的研制提供了实验材料。
- 李炯刘艳红刘湘涛尚佑军刘俊林安芳兰殷宏
- 关键词：逆转录病毒载体口蹄疫病毒衣壳蛋白
- 基于FSVM的马克斯克鲁维酵母菌发酵过程的软测量
- 2008年
- 针对马克斯克鲁维酵母菌发酵过程存在高度的复杂性和非线性问题,提出采用模糊支持向量机建立马克斯克鲁维酵母菌的发酵预测模型,通过预测在不同温度、时间、PH值、培养基中葡萄糖含量等因素的影响下细胞生物量的含量,从而寻找该酵母菌最佳的生长发酵条件。Matlab仿真实验结果表明,该方法有效地缩短了训练时间,提高了预测精度和模型的抗噪性,其性能优于一般支持向量机预测模型。
- 曾爽黄振家景志忠
- 关键词：发酵模糊支持向量机
- 中国白兔IL-6基因的分子克隆及其表达研究被引量：4
- 2007年
- 运用RT-PCR技术对用ConA刺激的中国白兔外周血淋巴细胞(PMBCr)进行了扩增,将纯化后的PCR产物克隆入pMD18-T中进行核苷酸序列测定.结果中国白兔IL-6基因全长726 bp,编码242个氨基酸,其中前26个氨基酸残基构成信号肽序列.与不同物种IL-6基因相比,核苷酸和推导的氨基酸序列有一定的差异.在推导的中国白兔IL-6氨基酸序列中,在108-110位存在1个潜在的N-联糖基化位点,同时存在9个Cys残基.将pTIL-6双酶切,回收目的基因片段克隆到大肠杆菌表达载体pET28a中构建了重组质粒pETIL-6,转化大肠杆菌BL21(DE3),并用IPTG进行了诱导.结果重组菌菌体裂解物经SDS-PAGE电泳可检测到相对分子量为29.5kDa的重组目的蛋白.经凝胶薄层扫描,目的蛋白表达量可占菌体蛋白的16.2%.
- 孟庆玲乔军才学鹏
- 关键词：中国白兔分子克隆
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒HN-HW株的分离与鉴定被引量：2
- 2010年
- 用细胞传代的方法从湖南省宁乡县发病猪所采病料中分离到一株猪繁殖和呼吸综合征病毒(PRRSV)毒株。该毒株能在Marc-145细胞上增殖并产生特征性的细胞病变,RT-PCR检测可扩增出670bp的特异性的ORF5基因片段,经美洲型PRRSV荧光抗体染色呈阳性反应,电镜观察其超微结构显示,病毒粒子大小为50～60nm。命名该分离毒株为HN-HW株。
- 马米玲郝雪峰关贵全李有全刘志杰刘爱红任巧云牛庆丽刘军龙殷宏罗建勋
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒
- 逆转录病毒载体介导的口蹄疫病毒衣壳前体基因和绿色荧光蛋白基因在BHK-21细胞中的表达被引量：11
- 2009年
- 为建立逆转录病毒载体介导的口蹄疫病毒衣壳前体蛋白哺乳动物细胞表达体系,将口蹄疫病毒(FMDV)衣壳前体基因(P1)和绿色荧光蛋白基因(EGFP)依次插入逆转录病毒载体pBABEpuro构建重组逆转录病毒载体pBABEpuro-P1-2A-EGFP。将重组逆转录病毒载体和pVSV-G质粒载体共转染GP2-293包装细胞,用产生的重组逆转录病毒感染幼仓鼠肾细胞(BHK-21)。荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达,用嘌呤霉素筛选抗性细胞,间接免疫荧光方法检测细胞中FMDV衣壳前体蛋白的表达。结果表明,重组逆转录病毒载体pBABEpuro-P1-2A-EGFP构建正确,绿色荧光蛋白和FMDV衣壳前体蛋白在细胞中能稳定表达。FMDV衣壳前体蛋白基因细胞表达体系的成功建立为进一步开展口蹄疫亚单位疫苗的研制奠定了基础。
- 李炯刘艳红安芳兰刘俊林刘湘涛尚佑军殷宏
- 关键词：逆转录病毒载体口蹄疫病毒绿色荧光蛋白基因BHK-21细胞
- 兰州地区兔球虫种类调查被引量：26
- 2008年
- 乔军才学鹏田广孚孟庆玲景志忠严鸿斌毕研丽
- 关键词：兔球虫病球虫种类发育受阻原虫病养兔业
- 三种哺乳动物朊蛋白基因的克隆与分析被引量：5
- 2006年
- 以外周血液的总DNA为模板,运用PCR方法克隆了汉族人、秦川黄牛和甘肃土种绵羊的Prnp基因,运用分子生物学软件对这些序列进行了分析比较。结果表明,获得的3种哺乳动物的Prnp基因均位于1个单一的外显子内,与GenBank中登录的相应序列具有高度同源性,达99.0%。牛与绵羊Prnp基因同源性为97.3%,推导氨基酸序列同源性为96.5%。人Prnp基因与黄牛和绵羊Prnp基因的同源性分别为86.7%和87.1%,其氨基酸序列的同源性均为90.0%。3种Prnp基因均有富含G-C的重复区,编码的PrP蛋白均由氨基端的信号肽、中间的成熟蛋白和羧基端的GPⅠ锚结合位点组成。基因型分析表明,秦川黄牛和甘肃土种绵羊可能存在感染海绵状脑病的风险。
- 张杰刘永生陈豪泰姜海霞路伟朱小玲谢庆阁
- 关键词：海绵状脑病朊蛋白基因朊病毒绵羊
