国家自然科学基金(30470906)
- 作品数：8 被引量：13H指数：2
- 相关作者：宋健程蓓朱从丽陈锡昌程邦昌更多>>
- 相关机构：武汉大学咸宁学院南华大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中澳科技合作特别基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 血管平滑肌细胞的体外氧化应激反应及雌激素的影响被引量：3
- 2010年
- 目的探讨雌激素对VSMC氧化应激反应的影响及机制。方法第3-4代雌性大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)在有或无10-8mol/L 17b-雌二醇(E2)存在下用不同浓度(0-250mmol/L)H2O2诱导氧化应激;MTT法,流式细胞术,Western blot分别检测VSMC活力,细胞周期,MAPK信号通路活性的变化。结果当浓度低于25mmol/L时,H2O2对VSMC活力无影响;当浓度为50-150mmol/L时,VSMC活力呈剂量依赖性下降,并伴随G0/G1期细胞升高;当浓度达到200mmol/L时,细胞活力下降至最低点并出现凋亡峰。10-8mol/L E2可显著抑制150mmol/L H2O2诱导的VSMCERK和p38的磷酸化、从而缓解VSMC G0/G1期阻滞,并降低高浓度H2O2诱导的VSMC凋亡。结论中等浓度的H2O2(50-150mmol/L)抑制VSMC增殖;高浓度H2O2(≥200mmol/L)不仅抑制VSMC生长、且导致部分VSMC凋亡;雌激素可通过抑制ERK和p38活性对氧化应激的VSMC起保护作用。
- 徐菁朱从丽王乔宋健
- 关键词：雌激素血管平滑肌细胞氧化应激过氧化氢
- 雌二醇对大鼠血管平滑肌细胞细胞周期和周期相关蛋白的影响被引量：1
- 2005年
- 目的研究17β雌二醇(E2)对大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)生长的影响。方法应用流式细胞仪检测不同浓度E2在有或无血清刺激下对传代VSMC细胞周期及其相关蛋白Cy-clinD1和CDK4表达的影响。结果在有血清的条件下,E2(1、10、100nmol/L)促进VSMC从G1期向S过渡,其S期细胞比率分别为(31.89±9.14)%、(35.90±4.59)%、(30.77±1.20)%,显著高于对照细胞(21.63±1.80)%(P<0.05),并伴随CyclinD1和CDK4蛋白表达量的显著增高;而在无血清的环境中,高浓度(10、100nmol/L)E2则抑制VSMC增殖,其S期细胞比率分别为(9.93±1.43)%、(8.76±1.80)%,显著低于对照细胞(16.58±3.04)%(P<0.05),且伴随Cy-clinD1和CDK4蛋白表达量降低。结论E2在有或无血清条件下分别对VSMC增殖起促进或阻滞作用,其机制可能是通过影响CyclinD1和CDK4蛋白的表达而作用于VSMCG1期。
- 阳朝晖宋健程蓓程邦昌陈锡昌
- 关键词：细胞周期CDK4蛋白S期细胞比率VSMC增殖G1期
- 雌激素具有抗血管平滑肌细胞应激性衰老效应被引量：1
- 2009年
- 目的探讨雌激素对血管平滑肌细胞（VSMCs）应激性衰老的影响及其机制。方法体外培养的第2~3代雌性SD大鼠VSMCs在无或有不同浓度（10-10mol/L^10-8mol/L）17β-雌二醇（E2）存在时,用150μmol/L H2O2诱导应激性衰老。流式细胞术、细胞化学染色P、ull down assay和Western blotting等检测衰老相关标志DcR2、衰老相关β-半乳糖苷酶（SA--βGal）、原癌基因Ras及细胞周期负性调控因子p21WAF1的表达或活性。结果流式细胞术显示,在生理浓度范围内,E2呈剂量依赖性地抑制H2O2诱导的VSMCs DcR2高表达、其中最大抑制作用达14.48%±0.6%（E2=10-8mol/L;P＆lt;0.05,n=3）,且这一效应可被雌激素受体阻断剂ICI 182、780阻断。细胞化学染色、Pulldown和Western blotting检测显示,10-8mol/L E2可显著性地抑制H2O2所致的SA--βGal阳性VSMCs上升（20.5%±1.4%和9.6%±0.9%;P＆lt;0.05,n=9）、Ras活性增高（0.60±0.06和0.26±0.04;P＆lt;0.0...
- 朱从丽郑勇徐菁宋健
- 关键词：雌激素血管平滑肌细胞RASP21WAF1细胞化学
- 培养的血管平滑肌细胞ERα和ERβ的表达与细胞表型转变及增殖时相有关
- 2009年
- 目的探讨雌激素对血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的双重效应机制。方法采用Westernblot、电镜形态定量及细胞计数的方法,动态检测原代培养大鼠VSMC在有或无10-8mol/L17β-雌二醇(E2)存在下,雌激素受体(ER)α和β表达变化与细胞表型转变及增殖时相的关系。结果无E2存在时,VSMC在从收缩型向合成型转变(原代培养第0到5天)及活跃增殖(第5到12天)过程中,ERβ表达无明显变化,但ERα表达明显上升,导致ERα/ERβ比值升高。这种变化并不随VSMC表型的恢复及增殖停止而逆转。有E2存在时,ERα/ERβ比值在第5天时低于对照组,而第9天后各时点均高于对照组;这种影响与E2对不同状态VSMC的不同作用基本对应,即延长原代收缩型SMC的增殖潜伏期,但促进已发生表型转变的VSMC增殖。结论雌激素对不同表型VSMC的双重效应与表型转变前后ERα/ERβ比值变化有关。
- 李成武李应续朱从丽程蓓王乔宋健
- 关键词：雌激素受体平滑肌细胞表型转变
- 改良混合酶消化法培养大鼠主动脉平滑肌细胞
- 2008年
- 目的探讨改良酶消化法培养大鼠主动脉平滑肌细胞(VSMC)的方法,为动脉粥样硬化等血管硬化性疾病的发病机制和防治研究提供帮助。方法提取大鼠的胸主动脉,采用混合酶消化后,采用含10%FCS RP-M I1640培养基培养。通过细胞计数观察细胞增殖,倒置相差显微镜观察血管平滑肌细胞的生物学性状,免疫组织化学进行细胞鉴定。结果消化肌平滑肌细胞24h后贴壁,平均贴壁率为76%,第5 d后细胞数迅速增加,至第11 d形成单层时,光镜下出现"峰-谷"样生长;传代后,细胞的生长特性无改变,α-SMA免疫组化染色检测,证实细胞是VSMC。结论改良后酶消化法能短时、高效地培养生物学特征稳定的VSMC。
- 李成武李应续朱从丽宋健
- 关键词：酶消化法平滑肌细胞胸主动脉SD大鼠
- 雌激素诱导的合成型血管平滑肌细胞凋亡与p38通路激活及肌细胞增强因子-2的表达被引量：1
- 2007年
- 目的探讨雌激素诱导合成型血管平滑肌细胞(VSMCs)凋亡的分子机制。方法体外培养第3代的雌性大鼠VSMCs分为3组:17β-雌二醇(E2)组、p38通路阻断(SB+E2)组和对照组。药物处理72h后,ELISA法检测细胞内核小体以检测VSMCs凋亡率,Western blotting检测p38总蛋白、磷酸化p38(p-p38)的变化及肌细胞增强因子-2(MEF2)的表达,免疫组织化学染色确认MEF2的定位和表达。结果ELISA检测显示,E2组VSMCs凋亡率明显高于对照组,而SB+E2组无明显变化。Western blotting显示,E2组p38、p-p38和MEF2均明显增高,而SB+E2组p38表达无明显变化,p-p38和MEF2明显降低。免疫组织化学染色显示,MEF2主要定位于细胞核,各组表达水平与Western blotting结果一致。结论雌激素可能通过激活p38通路上调MEF2的表达,诱导VSMCs凋亡。
- 程蓓王乔雷岳山宋健
- 关键词：雌激素平滑肌细胞P38通路免疫印迹法
- 雌激素促进合成型大鼠血管平滑肌细胞增殖并诱导细胞周期特异性凋亡被引量：6
- 2005年
- 目的研究17β雌二醇(E2)对大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)增殖与凋亡的影响及其可能机制。方法应用流式细胞术检测不同浓度E2(0～100nmol/L)对传代VSMC增殖周期、细胞凋亡及其相关蛋白CyclinD1、bcl2和bax表达的影响;并采用荧光组化技术和共聚焦激光扫描荧光显微镜术对bax的分布进行定位。结果E2(1～100nmol/L)促进VSMC从G1期向S过渡(G0/G1期比率显著低于对照细胞,而S期比率显著高于对照细胞,P<0.05),并伴随CyclinD1蛋白的表达显著增高;与此同时,当浓度达到10nmol/L以上时,E2以时间和剂量依赖的方式导致G2/M期VSMC的凋亡率增高,并伴随bax蛋白表达及bax/bcl2比值上升。结论E2对合成型VSMC具有双重效应,即通过影响CyclinD1表达加速G1～S期转换,从而促进VSMC增殖;同时通过上调bax蛋白的表达选择性地诱导G2/M期细胞凋亡。
- 阳朝晖宋健程蓓程邦昌陈锡昌
- 关键词：VSMC血管平滑肌细胞增殖BAX蛋白荧光显微镜
- 17β雌二醇对大鼠血管平滑肌细胞凋亡及Bax、Bcl-2蛋白表达的影响被引量：1
- 2005年
- 目的研究17β雌二醇(E2)对大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)凋亡的影响及其可能机制。方法应用流式细胞术检测不同浓度E2(0-100nmol/L)在有或无血清状态下对传代VSMC凋亡及其相关蛋白Bcl-2和Bax表达的影响;并采用免疫荧光染色和共聚焦激光扫描荧光显微镜术对Bax的分布进行定位。结果在有或无血清条件下,当浓度达到10nmol/L以上时,E2引起VSMCBax蛋白表达上升及Bax/Bcl-2比值的改变,并促进VSMC凋亡。这一效应有随E2剂量和作用时间增高的趋势。结论E2可通过上调Bax蛋白表达而诱导VSMC凋亡。
- 阳朝晖宋健万瑜程蓓程邦昌陈锡昌
- 关键词：雌二醇平滑肌细胞细胞凋亡BAX
