国家自然科学基金(30470900)
- 作品数：11 被引量：60H指数：4
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- 一种简易手动三维定位操纵仪的制作及应用
- 2009年
- 介绍一种简易手动三维定位操纵仪的制作方法及应用。该装置包括固定臂、固定柱和固定底座。各部件均可用常见材料经简单加工而成。装置利用磁铁和磁性材料相互吸引的原理完成装配。该装置制作简单,使用方便、灵活,费用低廉,是电生理学和高级药理学等实验研究中固定刺激电极和灌流管道等细小尖端的实用工具。
- 沈建新王海燕李超彦肖剑锋黄泽炳
- 关键词：磁铁电生理学药理学
- 成年SD大鼠心肌细胞分离及其胞内钙离子动态变化测定被引量：7
- 2007年
- 目的:建立稳定的成年SD大鼠心肌单细胞分离方法,并对心肌细胞内Ca2+动态变化进行测定。方法:用改进的Langendorff装置,行大鼠主动脉插管逆向灌流(温度、pH、水质恒定),用混合液(0.6 mg/mL胶原酶Ⅱ+0.06 mg/mL蛋白酶+1mg/mL牛血清白蛋白)消化心脏,经3次不同浓度含钙台式液复钙后得到钙稳态心肌细胞;室温静置1～2 h后于激光共聚焦显微镜下测定Ca2+的动态变化。结果:得到70%～90%长杆状活细胞,钙稳态心肌细胞可占40%～60%;fluo-4 AM负载染色后可记录到典型的诱发钙瞬变。结论:胶原酶和蛋白酶混合液主动脉逆向灌流方法可以得到具有正常生理功能的钙稳态心肌细胞,可用于心肌细胞内钙信号研究。
- 李超彦肖剑锋沈建新王海燕陈耀文
- 关键词：心肌细胞细胞分离激光共聚焦显微镜
- 海马脑片CA1中间神经元α7尼古丁受体亚型的功能研究
- 2009年
- 目的利用膜片钳全细胞记录方法研究α7尼古丁受体亚型的功能特点。方法实验在急性制备的海马脑片CA1中间神经元上进行;α7尼古丁受体亚型可被局部高压微量喷射的高浓度的胆碱特异性激活,膜片钳全细胞记录方法用于判断神经元类型并记录膜电流变化。结果中间神经元的动作电位发放频率较均匀,基本无适应性;其膜上的α7尼古丁受体亚型可被胆碱特异性激活,产生强大的持续时间短暂的内向离子流,该离子流可被MLA(一种α7尼古丁受体亚型的抑制剂)完全阻断。结论采用药理学和膜片钳技术相结合的方法可对α7尼古丁受体亚型的功能特点进行有效研究。
- 沈建新王海燕
- 关键词：尼古丁受体中间神经元海马脑片
- 心肌胞内钙瞬变的记录方法——快速二维扫描法与线扫描法被引量：4
- 2008年
- 目的:采用共聚焦显微镜快速二维扫描方式和线扫描方式记录心肌胞内钙瞬变,并分析其优缺点。方法:标本为急性分离的SD大鼠心肌单细胞,胞内钙信号由钙指示剂fluo4-AM标记,其变化由共聚显微镜(LSM510META系统)记录。钙瞬变由局部场刺激诱发,刺激器和共聚焦成像系统之间通过触发连接同步工作。结果:快速二维扫描方式可在二维平面上反映全细胞范围内钙瞬变的动态过程,空间信息较全面;特别地,当心肌细胞由于药物或病理状态的改变而出现胞内钙稳态失衡时,快速二维扫描的结果更有利于了解胞内钙变化;其结果可制成动画,真实而直观地再现心肌细胞胞内钙瞬变的动态过程。线扫描方式的时间分辨率较高,也有一定的空间分辨率,可反映钙瞬变的时空特征,并可分析细胞收缩的情况。二种扫描方式所得的结果在实质上是一致的,但各有其侧重点和优缺点,在反映心肌细胞功能状态方面具有互补作用。结论:两种扫描方式所得的结果综合起来更有利于对胞内钙信号变化的特征和意义进行正确解读。
- 沈建新王海燕李超彦肖剑锋
- 关键词：心肌细胞激光共聚焦显微镜钙瞬变
- 心肌细胞钙瞬变共聚焦显微图像的处理分析被引量：1
- 2009年
- 目的分析心肌细胞钙瞬变共聚焦图像的特点和处理过程。方法心肌细胞钙瞬变由电刺激激发,钙信号指示剂为Fluo-4,其图像由激光共聚焦显微镜记录;之后选用适当的软件和自编的一些程序(IDL语言),对原始图像进行格式转换、标准化后,提取其特征曲线和重要参数,最后与重构的钙瞬变图像一起呈现。结果钙瞬变图像经上述过程处理后,其所包含的在钙瞬变过程中胞内胞信号随时间的变化过程和细胞长度随时间缩短或恢复的过程等重要信息得到有效提取。此两类重要信息与重构后的钙瞬变图像一起呈现使结果完整、直观、明确。结论采用本文提出的方法处理分析心肌细胞钙瞬变图像可达到提取重要信息、明确实验结果的目的,为进一步的统计分析奠定了基础。
- 沈建新肖剑锋黄泽炳陈耀文王勇
- 关键词：钙瞬变激光共聚焦显微镜心肌细胞
- 肌浆网内钙容量减少对心肌细胞钙释放的影响
- 2005年
- 目的:较系统地研究肌浆网(SR)内钙容量的减少对心肌细胞钙释放的影响.方法:采用肌浆网膜的钙泵抑制剂thapsigargin(TG)耗减SR内钙容量,以喷咖啡因的方法估测SR内钙容量,以局部场刺激的方法诱发全细胞的钙释放.胞内钙信号的变化均采用激光共聚焦显微镜的方法记录.结果:SR钙泵抑制剂TG以剂量依赖和非线性的时间依赖方式引致心肌细胞SR内钙容量的耗减,而钙容量的耗减可相应地引起全细胞水平的钙释放减少.但二者的变化不完全平行,SR内钙容量的少量减少即可引起胞内钙释放的显著减少,而当SR内钙耗减到一定程度后(虽然此时SR内Ca2+仍远高于胞质内钙),场刺激已很难或无法引致钙释放.结论:心肌细胞SR内钙容量对胞内钙释放具有重要的非线性调节作用.
- 沈建新陈耀文王海燕韩太真
- 关键词：钙释放肌浆网
- 胞外镁离子对SD成年大鼠心肌细胞胞内钙信号的影响被引量：3
- 2010年
- 目的:研究胞外不同浓度的镁离子对SD成年大鼠心肌细胞钙瞬变的影响。方法:采用激光共聚焦显微镜系统同步配合阈上电刺激探测心肌细胞钙瞬变。结果:胞外低浓度的镁离子(0 mmol/L、0.5 mmol/L,正常镁离子浓度为1 mmol/L)可以升高钙瞬变的峰值(P<0.05),但不影响钙瞬变的持续时间(以钙瞬变的半高宽表示)(P>0.05);胞外高浓度的镁离子(2.5 mmol/L、5 mmol/L、10 mmol/L)均可抑制钙瞬变的峰值(P<0.05):其中5 rmmol/L和10 mmol/L的胞外镁还能延长钙瞬变的持续时间(P<0.05)。结论:正常情况下镁对心肌细胞钙瞬变有抑制作用。
- 黄泽炳肖剑锋沈建新
- 关键词：心肌细胞钙瞬变镁离子激光共聚焦显微镜
- 扫描电子显微镜与原子力显微镜技术之比较被引量：42
- 2006年
- SEM和AFM技术是最常用的表面分析方法。本文介绍了SEM和AFM两种技术的原理,描述了这两种技术在样品形貌结构、成分分析和实验环境等方面的性能,比较了两种技术的特性和不足,充分利用两种技术的互补性,将两种技术结合使用,有助于更加深刻地认识样品的特性。
- 陈耀文林月娟张海丹沈智威沈忠英
- 关键词：原子力显微镜扫描电子显微镜表面形貌化学成分
- L-型钙通道激动剂对心肌细胞局部诱发钙释放的影响
- 2009年
- 目的:研究L-型钙通道激动剂(FPL64176)对心肌细胞局部诱发钙信号的影响特点。方法:采用非紧密封接膜片钳技术与激光扫描共聚焦显微镜钙成像技术相结合的方法,局部触发细胞内钙释放。此技术可自由控制膜去极化水平,使FPL64176只在局部发挥作用。结果:正常情况下,局部兴奋-收缩耦联概率(δSC)和平均诱发钙瞬变与膜去极化水平的关系均呈"钟形"电压-依赖特性。FPL64176作用下,δSC和局部平均诱发钙瞬变均有不同程度的增强(P<0.05);低膜电位水平下的孤立钙火花幅度也明显增大(P<0.05)。结论:"钟形"电压-依赖特性说明,本质上此兴奋-收缩耦联的机制是钙诱导钙释放,而不是由于去极化本身所致。FPL64176不影响局部细胞内钙释放的"钟形"电压-依赖特性。
- 沈建新王海燕
- 关键词：膜片钳心肌细胞
- 镁对心肌细胞钾通道和钙通道的调节被引量：4
- 2010年
- 镁离子对阳离子通道有重要的调节作用,与机体的多种生理功能密切相关。高镁血症或低镁血症可致机体出现多种功能障碍。镁离子可通过与通道蛋白的直接结合、通过酶和G蛋白的间接作用、通过膜表面电荷效应或是通过与膜磷脂的相互作用等方式发挥其对细胞功能的调节作用。本文主要综述离子镁对心肌细胞膜上主要的钾离子通道和钙离子通道的功能调节及其可能机制。
- 黄泽炳肖剑锋沈建新
- 关键词：镁离子钾通道钙通道心肌细胞
