湖南省研究生创新基金(CX2009B154)
- 作品数：3 被引量：2H指数：1
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- 血清学检测的雄性特异性抗原Fab抗体的特异性鉴定
- 2011年
- 旨在研究血清学检测的雄性特异性抗原噬菌体Fab抗体的特异性。以从噬菌体Fab抗体库中筛选到具有较高雄性特异性结合活性的重组噬菌体克隆为基础,构建Fab抗体的可溶性表达噬质粒,并诱导和纯化该抗体片段,利用免疫荧光FITC/DAPI共染技术和ELISA分析其特异性。结果表明,该抗体在约49 ku处有条带出现。在Fab抗体和H-Y抗血清的细胞免疫荧光比较分析试验中发现,从雌、雄鼠脾细胞的阳性细胞数量和平均荧光强度的角度分析,Fab抗体的雄性特异性强于抗血清。石蜡切片免疫荧光定量分析显示,Fab抗体与雄鼠肝脏的结合活性明显高于对应雌鼠,差异极显著(t=20.73,P=0.002 3<0.01),而H-Y抗血清与雄鼠肝脏的结合活性略高于对应雌鼠,差异显著(t=7.11,P=0.019 2<0.05)。以C57BL/6雄鼠脾细胞、睾丸细胞作为抗原的ELISA分析显示,Fab抗体具有雄性特异性,但Fab抗体的OD值低于抗血清。结果提示,Fab抗体的雄性特异性高于H-Y抗血清,但其雄性特异性结合活性低于H-Y抗血清,Fab抗体在具备雄性特异性的同时,仍有少量雌性非特异性结合,Fab抗体的体外亲和力成熟可作为后续研究工作,以获得高亲和力、高雄性特异性的可溶性Fab抗体分子。
- 王乃东袁安文邓治邦屠迪许道军夏南松杨大为薛立群
- 关键词：噬菌体展示技术抗体库免疫荧光
- 生物素标记奶牛冷冻精子膜蛋白的提取、纯化与初步鉴定
- 2014年
- 本文通过利用膜不透性的生物素试剂Sulfo-NHS-SS-Biotin原位标记完整的奶牛精子细胞表面蛋白质,通过验证生物素与精子细胞表面的特异性结合,然后裂解细胞,用中性亲和素琼脂糖树脂纯化生物素化的蛋白质。最后用TCA浓缩膜蛋白。实验结果表明生物素特异的与精子细胞表面膜蛋白结合,通过中性亲和素琼脂糖树脂纯化出来的膜蛋白浓度较低,通过TCA蛋白浓缩后,膜蛋白浓度有了明显提升。建立了奶牛精子膜蛋白的生物素标记验证体系,通过提取、亲和纯化、TCA浓缩等步骤成功的得到了较高浓度的奶牛精子膜蛋白。
- 张思哲郭洪香蒋静思张莉薛立群王乃东
- 关键词：奶牛精子膜蛋白
- 血清学检测H-Y噬菌体Fab抗体阳性克隆的分析被引量：2
- 2011年
- 目的为分析H-Y噬菌体Fab抗体特异性,筛选用于抗体亲和力提高的H-Y噬菌体Fab抗体阳性克隆。方法以从噬菌体Fab抗体库中筛选到具有雄性特异性结合活性的阳性克隆A6、A8、E6为基础,通过C57BL/6鼠脾细胞为抗原的ELISA分析3株阳性克隆的特异性,镜下观察亲和力较好的A8阳性克隆ELISA结果,利用生物信息学方法预测分析该克隆的抗体基因可变区序列和结构。结果 ELISA分析显示3株阳性克隆具有雄性特异性,其中A8阳性克隆具备较好的雄性特异性。A8克隆具有免疫球蛋白轻链和重链可变区结构,其重链、轻链可变区分别属于VH I和VκIV基因家族。结论 A8阳性克隆可用于后续的导向筛选和抗体基因改造等研究工作。
- 王乃东袁安文邓治邦许道军马君薛立群
- 关键词：噬菌体展示技术
