江苏省自然科学基金(05KJB320135)
- 作品数：8 被引量：16H指数：2
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- 相关机构：徐州医学院附属医院徐州医学院更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- Sox9基因与软骨组织的研究进展被引量：13
- 2006年
- 秦宏敏许铁姚爱明冯斌
- 关键词：软骨组织SRY基因早期胚胎发育Y染色体睾丸发育
- PTHrP基因靶向RNA干扰重组表达质粒的构建鉴定以及在HTB-94细胞中的功能检测
- 2008年
- 目的构建针对目的基因PTHrp的pSilencer3.1-H1neo siRNA(small interfering RNA)表达质粒,并在人体软骨肉瘤细胞HTB-94中观察其干扰效果。方法设计并合成针对PTHrP基因编码区的含有发卡结构的互补的寡核苷酸链,体外退火后克隆入经BamHⅠ,HindⅢ双酶切线性化的干扰载体pSilencerTM3.1H1neo中,对重组质粒进行酶切分析和DNA系列测定。结果双酶切证实PTHrP siRNA表达质粒克隆构建成功,插入片段测序结果与合成的siRNA结果一致,同时干扰了PTHrP基因的mRNA和蛋白的表达。结论成功构建的靶向RNA干扰重组表达质粒,可以通过小RNA序列干扰靶向基因的mRNA转录,降低靶向基因在细胞中mRNA和蛋白的表达。
- 秦宏敏韩会峰沙广钊
- 关键词：RNA干扰
- RNAi技术沉默PTHrP基因的表达诱导软骨肉瘤细胞凋亡的实验研究被引量：1
- 2008年
- 目的研究甲状旁腺相关蛋白(parathyroid hormone-related protein,PTHrP)对软骨肉瘤细胞增殖的影响。方法本实验设置空白对照组、空质粒组和siPTHrP转染组,每组样本数均为6。空白对照组不做处理;分别将空质粒pSilencer3.1H1neo(空质粒组)和重组质粒pSilencer3.1H1neo-siPTHrP(siPTHrP转染组)转染至SW1353软骨肉瘤细胞株,通过MTT法检测各组细胞活力并绘制细胞生长曲线,利用流式细胞技术测定细胞凋亡率,半定量RT-PCR和Western blotting法检测PTHrP基因在mRNA水平及蛋白水平表达上的变化。结果siPTHrP转染组的细胞生长较空白对照组软骨肉瘤细胞明显缓慢;siPTHrP转染组细胞凋亡率明显升高;重组质粒pSilencer3.1H1neo-siPTHrP能明显抑制软骨肉瘤细胞的PTHrP基因在mRNA转录水平和蛋白水平上的表达。结论重组质粒pSilencer3.1H1neo-siPTHrP可明显抑制软骨肉瘤细胞增殖及其内源基因PTHrP在mRNA转录水平和蛋白水平的表达,为PTHrP介导的软骨肉瘤基因沉默疗法提供了理论基础。
- 韩会峰许铁裴冬生秦宏敏
- 关键词：基因沉默软骨肉瘤细胞凋亡
- 小分子干扰RNA诱导HTB-94软骨肉瘤细胞凋亡的研究被引量：3
- 2008年
- 目的利用小分子干扰RNA（siRNA）表达质粒转染HTB-94软骨肉瘤细胞，观察其在人体软骨肉瘤细胞HTB-94中对肿瘤细胞生长的影响。方法设计并合成高泳动家族性别决定基因9（Sox9）siRNA，将其转染HTB-94肿瘤细胞，观察肿瘤细胞的Sox9基因的mRNA和蛋白表达、生长曲线和细胞凋亡情况。结果Sox9siRNA的插入片段测序结果与合成的siRNA结果一致，Sox9基因的mRNA和蛋白表达降低，HTB-94肿瘤细胞的生长繁殖受到抑制，细胞凋亡增加。结论Sox9siRNA表达质粒可以通过稳定转染HTB-94肿瘤细胞，抑制Sox9基因的mRNA和蛋白的表达，抑制肿瘤细胞的生长繁殖，同时使肿瘤细胞凋亡。
- 秦宏敏韩会峰许铁沙广钊刘林彭易根任天成
- 关键词：软骨肉瘤细胞凋亡SOX9MRNA表达
- Sox9、siRNA表达载体的构建与鉴定
- 2007年
- 目的构建Sox9siRNA表达载体,分析Sox9在软骨肉瘤中的作用机制。方法根据KouI,IkegawaS提供的Sox9mRNA序列,设计并合成两端含有酶切位点的64个碱基的寡核苷酸链。寡核苷酸链退火后用T4DNA连接酶连接到线性化的pSilencer质粒中,并对重组质粒(命名为pSilencer/Sox9siRNA)进行酶切及测序鉴定。结果双酶切证实Sox9siRNA表达载体克隆构建成功,插入片段测序结果与合成的siRNA结果一致。结论成功构建Sox9siRNA表达载体。
- 彭易根秦宏敏许铁胡书群韩会峰
- 关键词：质粒
- 甲状旁腺相关肽小分子干扰RNA诱导HTB-94软骨肉瘤细胞凋亡
- 2008年
- 甲状旁腺相关肽（PTHrP）近年来被证实在人体软骨肉瘤细胞中表达。2006年1月至2007年8月我们将PTHrP小分子干扰RNA（siRNA）表达质粒稳定转染人体软骨肉瘤细胞HTB-94后，观察其对HTB-94细胞中PTHrP蛋白、mRNA、细胞生长曲线以及肿瘤细胞的影响。
- 秦宏敏韩会峰沙广钊刘林彭易根任天成
- 关键词：小分子干扰RNA瘤细胞凋亡细胞生长曲线PTHRP
- 软骨肉瘤细胞Caspase-3表达及其与相关基因相互作用的研究被引量：1
- 2008年
- 目的:研究肿瘤基因Caspase-3与PTHrP和Sox9在人体软骨肉瘤细胞HTB-94中的相互作用机制。方法:小干扰siRNA分别阻断PTHrP和Sox9后,检测肿瘤细胞中Caspase-3的mRNA和蛋白表达。结果:PTHrP基因被干扰后,Caspase-3的mRNA表达增加了57.7%,蛋白的表达增加了57.1%;Sox9基因被干扰之后,Caspase-3的mRNA表达增加了47.4%,蛋白的表达增加了48.2%。结论:肿瘤基因Caspase-3在软骨肉瘤细胞中的表达与软骨肉瘤相关基因PTHrP和Sox9有关,可能是位于PTHrP和Sox9的下游基因。
- 秦宏敏韩会峰沙广钊刘林彭易根任天成
- 关键词：软骨肉瘤RNA干扰基因表达
- 软骨肉瘤细胞PTHrP和Sox9及Bcl-2基因表达及其相互作用的研究
- 2009年
- 目的:研究PTHrP、Sox9和Bcl-2基因在人体软骨肉瘤细胞HTB-94中的相互作用机制。方法:小干扰siRNA阻断PTHrP后,分别检测肿瘤细胞中Sox9、Bcl-2和Col2α1的mRNA及蛋白表达。结果:PTHrP基因被干扰后,PTHrP基因的mRNA及蛋白表达降低,Sox9、Bcl-2和Col2α1的mRNA及蛋白表达都受到抑制;而PTHrP基因的干扰作用去除,Sox9、Bcl-2和Col2α1的mRNA及蛋白表达抑制作用也消失。结论:PTHrP基因在肿瘤细胞的抑制引起Sox9、Bcl-2和Col2α1肿瘤相关基因的抑制,提示PTHrP基因是Sox9、Bcl-2和Col2α1肿瘤相关基因的上游基因。
- 秦宏敏韩会峰沙广钊彭易根任天成
- 关键词：软骨肉瘤RNA干扰基因表达
