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浙江省自然科学基金(LY12H04005)
作品数:
3
被引量:9
H指数:2
相关作者:
黄晓忠
林锦
李仲荣
朱利斌
侯龙龙
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相关机构:
纽约大学西奈山医学院
温州医科大学
温州医学院附属第二医院
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医药卫生
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温州医科大学
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纽约大学西奈...
1篇
温州医学院附...
1篇
美国纽约大学
作者
3篇
朱利斌
3篇
李仲荣
3篇
林锦
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黄晓忠
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侯龙龙
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夏立广
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林正秀
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张田丰
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黄璜
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戴丽娜
传媒
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中华小儿外科...
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2015
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2014
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生理浓度丁酸钠对Caco-2细胞肠屏障作用中JNK通路的效应
被引量:2
2014年
目的 观察生理浓度丁酸钠作用Caco-2细胞肠屏障时JNK细胞信号通路的作用及与AMPK通路的关系.方法 建立Caco-2细胞单层肠屏障模型,分成不加药物的对照组(Con组)、仅添加2 mmol/L丁酸钠的生理浓度丁酸钠组(2BA组)、仅加入JNK特异性抑制剂的20μmol/LSP600125组(SP组)、20 μmol/L SP600125+生理浓度丁酸钠组(Mix组).检测各组处理后24、48、72 h跨上皮细胞电阻(TER)、CCK-8法吸光度及72 h菊粉-FITC透过率、流式细胞仪检测细胞凋亡水平、吖啶橙(AO)/碘化丙啶(PI)双染法荧光显微镜检测凋亡率、Western blot法检测JNK、AMPK、ACC等蛋白的表达.结果 2BA组TER在药物作用后24、48、72 h均明显高于Con组,以72 h时最显著,此时2BA组为(509.64±12.62)Ω·cm2,而Con组为(459.30±7.62)Ω·cm2 (P<0.05);Mix组TER为(261.01±9.22)Ω·cm2较2BA组(509.64±12.62)Ω·cm2低.Mix组72 h CCK-8吸光度为0.47±0.13、72 h菊粉-FITC为(7.89±0.80)cm/h、流式细胞仪凋亡水平为(61.23±1.54)%及AO/PI双染荧光显微镜凋亡结果为9.7±1.3,均比2BA组的0.98±0.08、(4.05±1.38)cm/h、(15.90±5.95)%、5.5±1.3高(P<0.05).2BA组p-AMPK、p-ACC水平较Con组和Mix组上调(P<0.05).Mix组p-JNK水平与2BA组相比显著下调(P<0.01).结论 生理浓度丁酸钠可增强肠屏障功能,而JNK特异性抑制剂可破坏这一作用,提示JNK在生理浓度丁酸钠增强肠屏障功能起协同作用,这一作用可能与AMPK活化有关.
戴丽娜
侯龙龙
黄璜
黄晓忠
朱利斌
林锦
李仲荣
关键词:
凋亡
丁酸钠对Caco-2细胞增殖与凋亡的影响
被引量:3
2015年
目的观察丁酸钠及p38MAPK特异性抑制剂SB203580对Caco-2细胞的作用情况,探索短链脂肪酸损害肠上皮屏障的可能机制,进而为防治新生儿坏死性小肠结肠炎寻找新靶点提供依据。方法使用不同浓度丁酸钠和SB203580作用于体外培养的Caco-2细胞及单层Caco-2细胞肠屏障模型,通过Cell Counting Kit(CCK-8)法检测细胞活性变化;通过Annexin V-FITC/PI双染流式细胞仪术与吖啶橙(Acridine Orange,AO)荧光染色检测与观察细胞凋亡情况;应用Western Blot法检测细胞内p38MAPK、p-p38MAPK的表达。结果①低浓度丁酸钠组(2mmol/L)作用Caco-2细胞72h,CCK-8的吸光度为0.78±0.049,较对照组的0.97±0.016吸光度要低(P〈0.01);②AO凋亡核染发现5mmol/L丁酸钠作用Caco-2细胞72h,出现典型的凋亡细胞核形态学变化;③2mmol/L丁酸钠组作用Caco-2细胞72h,细胞凋亡率为(14±3.21)%,与对照组的(13.77±4.92)%相比差异无统计学意义(P〉0.05);而中、高浓度丁酸钠(5mmol/L和8mmol/L)诱导的细胞凋亡率分别为(46.96±7.28)%和(71.97±6.65)%,与对照组相比差异有统计学意义(Pd0.01),SB203580可降低5mmol/L丁酸钠组的凋亡率。5mmol/L丁酸钠作用Caco-2细胞24h后,细胞凋亡率为(9.54±3.29)%,与对照组的(9.72±2.72)%凋亡率相比差异无统计学意义(P〉0.05);作用48h和72h后的Caco-2细胞凋亡率分别为(26.75±3.89)%和(48.33±7.08)%,两者凋亡率均比对照组高(P〈0.01);④丁酸钠以时间和浓度依赖方式激活p38MAPK,SB203580可抑制5mmol/L丁酸钠刺激后细胞内p-p38MAPK的表达,细胞内p38MAPK及β-Tubulin表达不受作用时间和干预药物浓度的影响。结论中、高浓度丁酸钠通过诱导大量Caco-2细胞凋亡来破坏单层Caco-2细胞肠屏障功能,在该过程中p38MAPK可能起重要作用。
黄晓忠
夏立广
侯龙龙
胡书奇
朱利斌
李仲荣
林锦
关键词:
脂肪酸类
肠黏膜
丝裂原激活蛋白激酶类
丁酸钠在Caco-2细胞肠屏障中的作用及p38MAPK的影响
被引量:6
2013年
目的观察不同浓度丁酸钠对Caco-2细胞肠屏障模型的作用情况及p38MAPK在这一过程中可能的影响,为进一步纠正肠屏障功能异常寻找新靶点。方法通过Caco-2细胞培养,建立单层Caco-2细胞肠屏障模型;比较对照组、不同浓度丁酸钠(2mmol/L、5mmol/L和8retool/L)及丁酸钠(5mmol/L)+SB203580(p38MAPK特异性抑制剂,20μmol/L)组对Caco-2细胞肠屏障模型的作用情况,测定连续培养72h后肠屏障模型的跨上皮电阻(TER)、菊粉一FITC(inulin-FITC)的通透性及扫描电镜表现。结果体外培养的Caco-2细胞能在3周后形成肠上皮细胞屏障模型。低浓度丁酸钠(2mmol/L)作用于肠屏障模型72h后,TER达到(467.65±7.41)Ω·cn-i2,与对照组的(417.58±6.29)Ω·cn-i2相比差异有统计学意义(Pd0.05);中、高浓度丁酸钠(5mmol/L和8mmol/L)作用72h后,TER分别为(113.87±20.27)Ω·cm2和(58.60±29.02)Ω·cm2,菊粉通透性分别为(11.08±1.04)%和(16.01±1.56)%,与对照组相比差异均有统计学意义(P〈0.05)。而5mmol/L丁酸钠+20ffmol/LSB203580组TER和通透性分别为(395.17±9.97)Ω·cm2和(7.19±0.97)%,与单纯5mmol/L丁酸钠组相比,差异有统计学意义(P〈O.05)。扫描电镜发现对照组和2mmol/L丁酸钠组单层Caco-2细胞屏障表面完整,细胞连接紧密无脱落;5mmol/L和8mmol/L丁酸钠组随药物浓度增加,细胞变形呈球形脱落亦增加;5mmol/L丁酸钠+20/,mol/LSB203580组细胞脱落较5mmol/L丁酸钠组明显减轻。结论丁酸钠对Caco-2细胞肠屏障模型作用具有双向性:低浓度丁酸钠促进肠屏障功能,而中、高浓度丁酸钠可破坏肠屏障功能;p38MAPK特异性抑制剂SB203580可减轻中等浓度丁酸钠对肠屏障功能的损害。
黄晓忠
林正秀
张田丰
朱利斌
李仲荣
林锦
关键词:
脂肪酸类
丝裂原激活蛋白激酶类
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