国家自然科学基金(30470976)
- 作品数：5 被引量：10H指数：2
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- 肿瘤治疗的新靶点——细胞周期检定点被引量：2
- 2006年
- 朱应葆钱鑫贾廷珍
- 关键词：肿瘤治疗周期检定细胞新靶点DNA损伤身体状况细胞周期
- 辐射损伤对HRAD17基因转染不同类型细胞的影响被引量：6
- 2006年
- 目的探讨HRAD17在DNA辐射损伤修复及辐射诱导的凋亡中的作用。方法利用基因转染技术,对小鼠成纤维细胞NIH3T3和人宫颈癌HeLa细胞均分别转染pDOR-neo载体,pDOR-HRAD17s(正义)和pDOR-HRAD17a(反义)质粒,G418筛选获得阳性克隆。转染后各组细胞去血清培养48 h同步化后给予60Coγ射线10 Gy照射,吸收剂量率为2.54 Gy/min,加入完全培养基继续培养,并于0、61、2、14、36和48 h收集固定细胞,碘化丙啶(PI)避光染色后,流式细胞仪检测细胞DNA量。结果在辐射损伤后,转染正义HRAD17的成纤维细胞主要发生G1/S期阻滞,转染正义HRAD17的肿瘤细胞主要发生G2/M期阻滞;转染正义HRAD17的细胞凋亡比例降低,转染反义HRAD17的细胞凋亡比例升高。结论HRAD17同时参与细胞周期G1/S和G2/M期阻滞,并抑制辐射损伤诱导的细胞凋亡。
- 钱鑫韩云孙艳杨业鹏朱应葆
- 关键词：HRAD17细胞周期凋亡基因转染
- 酵母DNA修复基因RAD16温度敏感突变株的分离及人类互补基因的鉴定被引量：2
- 2007年
- 用PCR介导的基因重组法敲除酵母RAD16基因,用羟胺处理酵母RAD16基因表达质粒,获得RAD16基因突变库,并将其转化RAD16基因敲除的酵母细胞.用平皿复制法获得温度敏感突变株rad16-ts2,经互补试验证实,该突变表型为RAD16基因突变所致.将人cDNA表达文库转化rad16-ts2后筛选温度敏感拯救(rescue)表型,回收拯救表型酵母细胞中的质粒.测序结果表明,所获得的人cDNA克隆为HLTF/Zbu1/SMACA3基因.比较分析显示,人类该基因编码蛋白质氨基酸序列与酵母Rad16的同一性为32%,相似性则达50%.人HLTF/Zbu1/MACA3基因在HeLa细胞中过表达,可显著抑制过氧化氢损伤和UV照射诱导的细胞凋亡.
- 朱应葆韩云孙艳
- 人类解旋酶样转录因子过表达促进辐射诱导的A549细胞凋亡被引量：1
- 2010年
- 目的 探讨人类解旋酶样转录因子（HLTF）对辐射诱导细胞凋亡的影响及其机制.方法 将空质粒和带FLAG标签的HLTF表达质粒分别转染人肺癌细胞A549,60Coγ射线照射观察细胞凋亡变化.用Western blot检测HLTF在细胞核和胞质内水平的变化及线粒体细胞色素C的释放.结果 HLTF转染可促进γ射线诱导的细胞凋亡,凋亡率为（32.2±2.1）%,高于空载体转染组（11.4±2.3）%和Mock转染组（11.1±1.8）%（F=101.85,P＜0.01）.辐射后HLTF在胞质内的表达水平显著提高.HLTF转染组胞质内细胞色素C的水平亦显著提高.结论 HLTF可促进辐射损伤诱导的细胞凋亡,其部分机制可能是通过提高核质转位以及影响线粒体细胞色素C的释放来实现的.
- 孙艳韩云朱应葆
- 关键词：细胞凋亡细胞色素C
- 人类解旋酶样转录因子介导辐射凋亡细胞DNA修复蛋白的降解
- 2010年
- 目的 探讨人类解旋酶样转录因子（HLTF）转染对辐射诱导细胞凋亡时DNA修复相关蛋白水平的影响.方法 将野生型和RING结构域突变型HLTF分别转染人肺癌细胞A549,60Coγ射线15 Gy照射诱导细胞凋亡,用Western blot检测HRAD17和HRAD52蛋白水平的变化,免疫共沉淀检测特定复合物的存在.结果 γ射线诱导细胞凋亡时,野生型HLTF转染组与对照组相比,DNA修复蛋白HRAD17和HRAD52水平明显降低,而RING结构域突变组与对照组相比则没有明显变化;辐射诱导细胞凋亡时,HLTF可与HRAD17和HRAD52形成复合物.结论 HLTF可介导辐射诱导的凋亡细胞中HRAD17和HRAD52的降解,其机制可能是通过蛋白质复合物的相互作用使DNA修复蛋白泛素化而降解.
- 朱应葆韩云孙艳梁莉贾廷珍
- 关键词：细胞凋亡
