国家自然科学基金(30470988)
- 作品数：10 被引量：10H指数：2
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- 相关机构：第三军医大学大坪医院重庆医科大学更多>>
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- 小鼠急性肺损伤后糖皮质激素受体的活性改变与热休克蛋白的关系被引量：3
- 2008年
- 目的研究急性肺损伤(ALI)后机体内糖皮质激素受体(GR)的配体结合活性显著下降与其分子伴侣热休克蛋白(Hsps)改变的关系。方法以小鼠油酸急性肺损伤为模型,用Western blotting和受体的放射配体结合试验动态观察伤后GR、Hsp90、Hsp70和GR的结合容量和亲和力变化。结果伤后小鼠肺组织水肿、肺体指数和肺含水量显著升高;GR在伤后1h升高,然后显著下降,在12h达最低点;Hsp90和Hsp70在伤后的表达逐渐升高,在12h达最高点。配体结合试验显示在伤后GRBmax逐渐下降,Kd值升高,与Hsp90/GR的变化趋势一致。结论急性肺损伤后的GR配体结合活性的改变可能与Hsp90的变化有关。
- 张民熊仁平陈星云李平赵艳刘苹周元国
- 关键词：急性肺损伤糖皮质激素激素受体热休克蛋白
- ROCK1在地塞米松抑制中性粒细胞释放和单核细胞黏附中的作用
- 2012年
- 目的探讨ROCK1在地塞米松(dexamethasone,Dex)抑制中性粒细胞释放和单核细胞黏附中的作用。方法检测地塞米松和法舒地尔(Fasudil,Fas)抑制佛波脂(PMA)诱导的中性粒细胞释放超氧化物阴离子(O2-)和髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)以及U937单核细胞黏附的程度,并检测ROCK1和RhoA的表达和活性改变。此外观察糖皮质激素受体拮抗剂——米非司酮(mifepristone,M)和蛋白质合成抑制剂——放线菌酮(cycloheximide,C)对地塞米松这些作用的影响。实验分组:对照组、PMA组、PMA+Dex组、PMA+Dex+M组、PMA+Dex+C组和PMA+Fas组。结果地塞米松可以显著抑制中性粒细胞释放O2-和MPO[(1.25±0.10)vs(1.95±0.10);(1.07±0.06)vs(1.75±0.08),P<0.05],而法舒地尔对其无明显抑制作用(P>0.05)。地塞米松和法舒地尔均可抑制U937细胞黏附[(0.09±0.01)vs(0.08±0.01)vs(0.28±0.06),P<0.05]。米非司酮和放线菌酮并不能影响地塞米松的这些作用(P>0.05)。结论地塞米松以非ROCK1依赖方式抑制中性粒细胞释放;以ROCK1依赖方式通过非基因组效应抑制U937单核细胞的黏附。
- 刘冬熊仁平陈星云李平宁亚蕾彭艳赵艳杨楠周元国
- 关键词：地塞米松非基因组效应
- 小鼠Hsp84真核表达质粒的构建及鉴定
- 2006年
- 目的:构建小鼠Hsp84基因真核表达质粒。方法:采用逆转录、热降落PCR方法,扩增BALb/c小鼠Hsp84基因片段,将其连入pMD18-T载体,筛选阳性克隆、测序验证。然后以重组T载体为模板,PCR扩增目的序列,插入真核表达质粒pcD-NA3.1中,转化大肠杆菌DH5α,通过琼脂糖电泳、双酶切挑选和验证阳性重组克隆。结果:RT-PCR自小鼠脑组织中扩增出目的基因片段,克隆入pMD18-T载体后,测序结果证明为BALb/c小鼠Hsp84基因.插入目的基因的真核表达载体的酶切谱与设计一致。结论:成功构建了小鼠Hsp84编码框全长的真核细胞表达质粒。
- 季业伟赵艳王华徐晓玉周元国
- 关键词：热休克蛋白90真核表达
- HSP90β基因突变与糖皮质激素治疗敏感性的关系
- 2006年
- 目的:筛选肾病综合征患者热休克蛋白90β(heatshockprotein90,HSP90)基因突变,并分析该突变与糖皮质激素治疗敏感性的关系.方法:提取300例经糖皮质激素治疗的肾病综合征患者血液DNA,采用聚合酶链反应(polymerasechainreaction)和自动荧光测序方法,对HSP90基因intron9,exon10,intron10,exon11,3非编码区域DNA序列进行突变分析,结合临床资料探讨突变与糖皮质激素治疗敏感性的关系.结果:在肾病综合征患者中发现了2个HSP90β基因点突变,分别为intron10的7489C>T和3非编码区的7612C>T,其发生频率在糖皮质激素敏感和不敏感患者中分别为(2.44%,3.68%)和(2.44%,2.94%),两组患者的突变频率无统计学差异(P>0.5).结论:在肾病综合征患者中发现9例7489C>T和8例7612C>T突变,在敏感和不敏感组的发生频率无显著差异,提示HSP90β表达量与GC治疗敏感性无显著相关.
- 赵艳王华陈星云季业伟周元国
- 关键词：糖皮质激素类突变
- 地塞米松和法舒地尔对油酸致小鼠急性肺损伤伤情的影响被引量：1
- 2009年
- 目的探讨地塞米松和法舒地尔(fasudil)对油酸致小鼠急性肺损伤的影响及ROCK(Rho-associated coiledcoil forming kinase)在其中的作用。方法采用油酸致C57小鼠急性肺损伤模型,观察伤后24h各组肺组织病理及肺含水率、ROCK活性、ROCK1和ROCK2蛋白含量及IL-1βmRNA的变化。结果地塞米松和法舒地尔均可显著减轻油酸肺组织中炎性细胞浸润、肺出血等病理变化,降低肺含水率(P<0.05),抑制肺组织ROCK活性(P<0.05),降低IL-1βmRNA的表达水平;地塞米松对ROCK1的表达水平无影响,但可增强ROCK2的表达,法舒地尔对ROCK1和ROCK2的表达水平均无影响。结论地塞米松和法舒地尔均可通过抑制肺组织内炎性细胞浸润明显减轻油酸引起的急性肺损伤,而地塞米松的治疗作用可能与对其ROCK活性的抑制有关。
- 陈星云杨楠赵艳熊仁平李平刘苹钟小龙周元国
- 关键词：急性肺损伤地塞米松法舒地尔ROCK2
- 热应激对急性肺损伤保护作用机制研究被引量：2
- 2008年
- 目的探讨热应激预处理对急性肺损伤（acute lunginjury，ALI）保护作用的机制。方法观察热应激前后小鼠油酸ALI肺组织中糖皮质激素受体（GR）的含量、配体结合力和亲和力以及热休克蛋白（heat shock protein，Hsp）70，90的动态变化。结果热应激对小鼠肺损伤有显著的保护作用，Western blotting显示其GR水平基本维持稳定，而Hsp70、Hsp90呈进行性升高。配体结合试验显示热应激对伤后GR的Bmax和Kd的变化无明显影响。结论热应激对小鼠急性肺损伤的保护作用可能与维持GR稳定和提高Hsp70、Hsp90的水平有关。
- 张民熊仁平陈星云赵艳李平刘苹周元国
- 关键词：糖皮质激素类受体细胞表面热休克蛋白质类热应激
- Rho相关的卷曲蛋白激酶在多重细胞行为中的作用被引量：1
- 2012年
- Rho相关的卷曲蛋白激酶(ROCK)是一种属于AGC家族的蛋白激酶,主要通过诱导应力纤维形成、重构细胞骨架等方式参与细胞收缩、迁徙、分裂、形态变化等生物学行为,对调节细胞的多种功能发挥重要的作用。
- 刘冬陈星云周元国
- 关键词：细胞骨架细胞收缩细胞迁徙
- 不同剂量GA对BALB/c和C57BL/6小鼠创伤耐受能力的影响
- 2008年
- 目的观察BALB/c和C57BL/6两品系小鼠的创伤耐受能力差异与热休克蛋白90(HSP90)的关系。方法观察在正常情况下和给予HSP90特异阻断剂格尔德霉素(geldanam ycin,GA)后,二品系小鼠在全身冲击伤(whole-body blast injury,WBBI)时的整体死亡率和大体变化。结果WBBI后,C57BL/6小鼠的总体死亡率低于BALB/c小鼠(P<0.05),GA处理后C57BL/6小鼠的总体死亡率无明显变化,而BALB/c小鼠总体死亡率随GA剂量增加而增大(P<0.05)。结论两品系小鼠的HSP90对GA敏感性不同提示HSP90的差异可能是C57BL/6小鼠具有较强的创伤耐受能力的重要原因。
- 赵艳申海鹰王华熊仁平李平周元国
- 关键词：格尔德霉素HSP90
- 地塞米松抑制U937细胞黏附与吞噬功能的作用机制被引量：1
- 2012年
- 目的探讨地塞米松抑制单核细胞U937黏附和吞噬功能的机制。方法检测体外培养的U937在佛波脂（phorbol-12-myristate-13-acetate，PMA）刺激下分别接受地塞米松和法舒地尔作用后，观察人脐静脉内皮细胞（humanumbilicalveinendothelialcells，HUVEC）黏附和吞噬能力的变化，并检测ROCKl（rho—associatedcoiled—coilproteinkinase1，ROCK1）蛋白含量及其活性的变化；同时观察米非司酮和放线菌酮对地塞米松的影响。结果地塞米松和法舒地尔均可显著抑制受PMA刺激的U937细胞的黏附率和吞噬效果，并抑制ROCK1活性；米非司酮和放线菌酮并不能影响地塞米松抑制U937细胞的黏附和吞噬作用。结论地塞米松能通过抑制U937细胞内ROCK1的活性而干扰其黏附、吞噬功能。
- 刘冬陈星云熊仁平李平宁亚蕾彭艳赵艳杨楠周元国
- 关键词：地塞米松非基因组效应
- 人热休克蛋白90β基因沉默质粒的构建及转染效率的观察被引量：2
- 2007年
- 目的:构建能表达小发夹RNA,从而特异、有效抑制人Hsp90βmRNA水平的质粒,比较该质粒对不同细胞株的转染效率。方法:合成3条对应于靶基因3个区域的64nt寡聚核苷酸,插入pSUPEREGFP1质粒,用DH5α细菌扩增,用酶切和测序法鉴定。以绿色荧光蛋白表达为标记,比较不同比例脂质体和质粒条件下,HepG2、HUVEC、HeK2933种细胞株的转染效率。结果:构建的pSuper-Hsp90β1、pSuper-Hsp90β2、pSuper-Hsp90β33个重组沉默质粒,插入片段碱基完全正确。在相同条件下,所构建的质粒对HeK293细胞转染效率最高,HepG2细胞最低。结论:利用pSUPER质粒可成功构建人Hsp90β基因沉默质粒,该质粒对细胞株的转染效率可因细胞的不同而有显著差异。
- 季业伟聂滨李平徐晓玉周元国
- 关键词：热休克蛋白90RNAI基因转染
