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Zeocin和GFP双筛选标记重组痘苗病毒载体的构建: 2012年; 目的为研究重组痘苗病毒通用载体，构建融合Zeocin和GFP双筛选标记质粒pcB-Zeo-GFP。方法质粒LeCo-G／Zeo含有Zeo-GFP融合基因片段，通过PCR反应、BamHI酶切后连接替换空白质粒pCB的筛选基因gpt，通过菌落PCR，酶切图谱分析及测序分析鉴定重组质粒，构建成功后将其与野生型痘苗病毒进行位点特异性同源重组，经Zeocin药物筛选2代后，用流式细胞仪观察重组痘苗病毒GFP表达。结果经菌落PCR，1号、5号和10号菌落中扩增出426bp的目的条带，与预期的大小完全一致，经酶切分析和DNA测序进一步验证了重组质粒pCB-zeo-GFP；该质粒与野生型痘苗病毒同源重组，得到了重组的痘苗病毒；Zeocin筛选2代后，病毒上清感染细胞，流式细胞分析7．18％的细胞中有GFP的表达，而阴性对照仅有1．43％；Zeocin药物筛选5代后，通过激光共聚焦可在80％以上的细胞中观察带GFP；提取的重组痘苗基因组DNA也扩增出预期大小目的条带。结论含Zeocin和GFP双筛选标记的新型重组痘苗病毒不仅具有可观察性且具有药物抗性，非常容易进行筛选鉴定。; 房有荣李红玉陈科达周文硕阎辉; 关键词：痘苗病毒 GFP

适配体与病毒性感染诊断及治疗: 2013年; 适配体(Aptamers)是通过指数富集的配体系统进化(systematic evolution of ligands by exponential enrichment,SELEX)技术,从随机核酸文库中筛选出来的单链寡核苷酸,已在临床医疗及其他领域得到日益广泛的应用.与抗体相比,适配体具有很多优点,如高亲和力、高特异性、分子量小、几乎无免疫排斥反应、结构稳定、易于合成等.可用于适配体筛选的靶标范围非常广,包括有机小分子、蛋白质、完整细胞及病毒颗粒等.迅速可靠的病原检测对于病毒性传染病的成功预防和治疗具有重要意义.随着严格筛选和快速分离技术的进步,适配体在病毒感染的检测治疗中显示出巨大的潜力.本文概括介绍了适配体在病毒研究方面的最新应用进展及未来前景.; 李红玉阎辉; 关键词：适配体病毒检测病毒治疗

TAT细胞穿透肽融合小鼠SurvivinT34A重组蛋白的原核表达纯化及其细胞转导效能研究: 2011年; 为研究细胞穿透肽TAT融合小鼠存活素T34A(survivinT34A)重组蛋白(TAT-msvT34A)转导细胞的效能,该实验将表达TAT-msvT34A的原核表达载体pTAT-msvT34A转化大肠杆菌表达株E.coli BL21(DE3),异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导,表达的融合蛋白主要以包涵体形式存在。通过亲和层析、离子交换柱层析、分子筛等步骤纯化,得到TAT-msvT34A融合蛋白的纯度可达98%。纯化的融合蛋白用异硫氰酸荧光素(FITC)标记(FITC-TAT-msvT34A)后,分别转导HepG2、TC-1、B16及HEK293细胞株,流式细胞仪检测显示,较低浓度的重组蛋白即对HepG2、TC-1、B16及HEK293等细胞株具有较高的转导效能,在100 nmol/L时的转导效率均可达到60%以上,作为对照,FITC标记的牛血清白蛋白(FITC-BSA)在100 nmol/L时对上述细胞株的转导效率极低,结果具有显著性差异(P<0.01)。荧光显微镜观察可见,50 nmol/L和100 nmol/L的TAT-msvT34A融合蛋白对HepG2细胞的转导效率均可达50%,而对照FITC-BSA对HepG2细胞几乎无转导。表达纯化的TAT-msvT34A融合蛋白对HepG2、TC-1、B16及HEK293等细胞株均有较高的转导效能,可以用于后续抗肿瘤研究。; 于海涛陈科达倪崖阎辉; 关键词：原核表达凋亡

超正电荷绿荧光蛋白+36GFP作为核酸载体的细胞穿透性分析被引量：2: 2013年; 旨在通过原核表达纯化超正电荷绿色荧光蛋白+36GFP,研究其与核酸的结合作用及作为核酸载体的细胞转导功能。将pET+36GFP-HA2质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)菌株中,然后表达纯化+36GFP蛋白。将得到的目的蛋白在特定浓度下分别转导293细胞、HepG2细胞、A549细胞和B16细胞,流式细胞仪检测+36GFP的转导效率;+36GFP蛋白(100 nmol/L)转导A549细胞,激光共聚焦显微镜观察结果;将+36GFP蛋白与质粒DNA按不同比例孵育,凝胶阻滞实验检测+36GFP与DNA的结合能力;激光共聚焦显微镜和流式细胞仪检测+36GFP蛋白携带质粒DNA转导细胞后报告基因的表达。结果显示,+36GFP蛋白具有较高的细胞转导效率,且随浓度升高转导效率增加,呈浓度依赖性。凝胶阻滞实验显示,+36GFP能够与质粒DNA结合,阻滞DNA在凝胶中迁移,且呈现一定的浓度依赖性。+36GFP包裹质粒转导细胞后,可高效携带质粒DNA转导进入细胞,使质粒报告基因得到表达。本研究成功表达纯化了+36GFP蛋白,证实该蛋白具有较高的细胞转导效率,可将外源核酸携带入细胞使外源基因得到表达。; 李红玉房有荣于海涛俞盈阎辉; 关键词：细胞转染

CXCL12（SDF-1）／CXCR4信号传导通路及其肿瘤相关性研究进展被引量：5: 2011年; 细胞因子是一组分子量为8～30kD的小分子信号蛋白，多为水溶性蛋白和糖蛋白，在免疫系统中起核心作用，参与免疫和炎症反应。趋化因子是细胞因子中的一个亚家族，; 李红玉陈科达于海涛阎辉; 关键词：信号传导通路肿瘤相关性 CXCR4 水溶性蛋白信号蛋白

改善沙门菌载体疫苗效能的若干策略: 2012年; 沙门菌是一种侵袭性胞内菌,利用其侵袭性,可将其减毒后改造为疫苗载体,携带异源抗原基因到细胞内,表达相应的异源抗原,从而引发免疫保护反应。然而成功研制沙门菌载体疫苗必需解决一些关键问题,包括:选择合适的保护性异源抗原和表达载体,确定抗原在载体内的表达方式(即体细胞内膜结合型或分泌型表达)和宿主细胞内的定位(内体或细胞质)等。针对上述问题,从筛选适当的沙门菌载体菌株、确定最优启动子、增强质粒稳定性、抗原表达后准确定位、提高抗原的免疫原性和优化疫苗接种制度六个方面,讨论近年来改善减毒沙门菌载体疫苗的研究策略。; 房有荣陈科达阎辉; 关键词：减毒沙门菌疫苗载体

以GFP-Zeocin为筛选标志的重组痘苗病毒载体质粒的构建: 为研究以痘苗病毒为载体的重组病毒疫苗,本研究构建了痘苗病毒通用的载体pCB-zeo-GFP,该载体融合了GFP和Zeocin两种报告基因,由痘苗病毒p7.5k启动子驱动表达,与其紧邻着一多克隆位点,用于外源基因的插入,由...; 房有荣阎辉; 关键词：痘苗病毒; 文献传递

表达翻转重组酶的真核载体的构建: 2012年; 目的构建表达翻转重组酶（FLP）重组表达的真核载体。方法以质粒pFRT为模板，用聚合酶链反应（PCR）扩增出两端包含了Xbal和BamHI内切酶识别位点的全长FLP基因片段，将该片段插入用NheI和BamHI双酶切后的载体质粒pBK—CMV上，构建出重组质粒pBK—CMV—FLP。经过转化、挑选菌落，PCR鉴定且测序均正确。结果成功构建重组质粒pBK—CMV—FLP。结论构建好的pBK—CMV—FLP质粒为生物工程上删除筛选标记物提供了良好的条件。; 程乾房有荣邓琳阎辉郑骏年; 关键词：真核载体

肿瘤细胞致死性人α-乳清蛋白的抗肿瘤作用及其机制的研究进展被引量：1: 2011年; 肿瘤细胞致死性人α-乳清蛋白(humanα-lactalbumin made lethal to tumor cells,HAMLET)是人α-乳清蛋白与油酸结合后改变自身三级结构而形成的脂蛋白复合物,能够选择性杀伤肿瘤细胞,而对正常细胞几乎无影响。HAMLET杀伤肿瘤细胞的机制目前还未完全明确。早期研究显示,HAMLET通过细胞凋亡机制杀伤肿瘤细胞;进一步研究发现,HAMLET并不主要依赖凋亡,而是通过细胞自噬、内质网应激、蛋白酶体、溶酶体、组蛋白和DAN等多种途径杀伤肿瘤细胞。HAMLET对皮肤乳头状瘤、膀胱癌局部用药的抗肿瘤临床试验已取得良好的效果,它很可能成为具有良好应用前景的绿色抗肿瘤新药。; 于海涛陈科达阎辉; 关键词：肿瘤 HAMLET 自噬凋亡

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国家自然科学基金(30873024)

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