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STGC3基因缺失突变对CNE2细胞生长增殖能力的影响被引量：5: 2011年; 为探讨鼻咽癌候选抑癌基因STGC3中层粘连蛋白G结构域(LG domain)对CNE2生长增殖能力的影响,应用基因定点突变技术将该结构域缺失,亚克隆至真核表达载体上,并将野生型及突变型STGC3稳定转染人鼻咽癌细胞系CNE2,检测其对CNE2细胞系表型的影响,包括测定稳转细胞系的生长曲线、细胞集落形成能力和细胞周期分布.研究发现,LGdomain的缺失明显降低了STGC3的肿瘤抑制活性,使受其稳定转染的细胞系恶性度显著增强,提示该结构域在STGC3发挥肿瘤抑制功能中起着重要作用.; 李丽贺修胜罗桥张志伟姚旭炯陈苏琼李春成王莉莉段蓉陈主初; 关键词：鼻咽癌抑癌基因

STGC3基因高表达Daudi细胞系的建立与鉴定被引量：1: 2011年; 目的探讨STGC3基因高表达对Daudi细胞形态、倍增时间和增殖速度的影响。方法采用电穿孔基因转染技术,将pCDNA3.1(+)/STGC3真核表达载体导入Daudi细胞系,G418筛选,建立高表达STGC3基因的Daudi细胞系,利用Western-blotting检测转基因细胞系中STGC3蛋白的表达;运用免疫细胞化学和HE染色方法及绘制细胞生长曲线,了解STGC3基因表达在Daudi细胞中的定位,以及对细胞倍增时间和增殖速度的影响。结果在转基因的Daudi细胞系中,STGC3蛋白高表达并定位于胞浆与胞核。转染STGC3基因后,Daudi细胞倍增时间延长,增殖速度明显减慢(P<0.05)。结论成功建立STGC3基因高表达Daudi细胞系。; 肖建忠贺修胜邱清朝邓敏胡波罗桥; 关键词：DAUDI细胞细胞增殖

下调STGC3基因表达对NP69细胞增殖的影响: 2011年; 目的探讨STGC3基因在鼻咽癌发生发展中的作用机制。方法设计基于miRNA30框架的STGC3特异性shRNA,构建STGC3特异性miR30-shRNA真核表达载体pRNAT-U6/shRNA-STGC3,转染永生化人鼻咽上皮细胞系NP69;采用RT-PCR检测未转染、转pRNAT-U6空质粒和转pRNAT-U6/shRNA-STGC3组NP69细胞中STGC3基因mRNA的表达;使用流式细胞仪检测3组细胞周期分布与细胞凋亡情况。结果与未转染组和转pRNAT-U6空质粒组相比,转染pRNAT-U6/shRNA-STGC3的NP69细胞中STGC3基因mRNA表达下降(P(0.05),G0/G1期细胞比例下降,G2期和S期的细胞比例之和增加(P(0.05)。结论 miR30-based shRNA成功地下调了STGC3在NP69细胞系中的表达;STGC3基因在NP69细胞系的表达下调,使NP69细胞生长增殖速度加快,凋亡减少,提示STGC3对NP69细胞增殖具有抑制作用。; 姚旭炯贺修胜张志伟李丽罗桥陈苏琼李春成王莉莉段蓉; 关键词：鼻咽癌 MIRNA

PCR-双酶切鉴定STGC3抑癌基因重组子假阳性研究被引量：3: 2007年; 目的:探讨PCR与双酶切技术联合使用鉴定阳性重组子的特异性和可靠性,评价长期保存的重组质粒再次测序的必要性。方法:对随机选取已经过测序验证的三组STGC3/pcDNA 3．1(+)、一组STGC3/pGEM Easy T Vector重组子首先经过LB氨苄平皿培养挑单克隆筛选,然后单独或联合使用PCR和双限制性内切酶BamH I和Xho I酶切方法鉴定,将阳性样品送交生物工程公司测序,比较并评价两者结果的一致性。结果:三组STGC3/pcDNA 3．1(+)重组子经PCR—双酶切检测阳性而不能通过测序,说明该检测方法在运用中确实存在假阳性,同时证明重组载体在长期保存后有必要再次鉴定。结论:保存过程中的杂菌污染、实验室操作中的质粒交叉污染以及重组载体基因突变是基因工程操作中不可忽视的问题;PCR—双酶切鉴定重组载体存在假阳性的问题,实验设计中应包含阳性与阴性(污染)对照,并有足够的重复实验。; 蒋俊豪贺修胜; 关键词：PCR 双酶切假阳性

鼻咽癌相关新基因NPCEDRG表达对CNE2细胞生长的影响被引量：7: 2010年; 为研究鼻咽癌相关新基因NPCEDRG的功能,探讨其对鼻咽癌细胞生长特性的影响,利用Tet-on调控系统,建立受强力霉素(deoxycycline,Dox)诱导NPCEDRG基因表达的CNE2细胞系.运用RT-PCR选择背景表达低、诱导活性高的细胞克隆,以不同浓度Dox诱导CNE2/Tet/TRE-NPCEDRG细胞,确定Dox的最佳诱导浓度.借助形态学观察、细胞生长曲线、软琼脂克隆形成试验和流式细胞仪分析等方法,对Dox诱导NPCEDRG高表达后CNE2细胞的生物学行为进行了检测.结果显示,NPCEDRG高表达后CNE2细胞增殖速度显著减慢(P<0.05),克隆形成能力显著降低(P<0.01),瘤细胞群体中处于G0/G1期细胞数增加,S期细胞数减少,细胞阻滞于G0/G1期.Tet调控NPCEDRG基因表达CNE2细胞系成功建立,恢复NPCEDRG表达能部分逆转CNE2的恶性表型,证明NPCEDRG是一个鼻咽癌相关的抑瘤基因.; 阳帅胡华邓敏董娟慧王妍罗桥贺修胜陈主初; 关键词：鼻咽癌抑癌基因基因表达

EB病毒与淋巴瘤关系的研究进展被引量：3: 2007年; 肖建忠贺修胜; 关键词：淋巴瘤 EB病毒

鼻咽癌相关新基因NPCEDRG真核诱导表达载体的构建及鉴定被引量：2: 2008年; 目的构建受Tet系统调控人鼻咽癌相关新抑瘤基因NPCEDRG表达的真核诱导表达载体。方法以pcDNA3.1-NPCEDRG重组质粒为模板,采用聚合酶链反应(PCR)技术扩增NPCEDRG基因编码区,亚克隆到pRevTRE载体,PCR及双酶切鉴定,测序验证。结果以pRevTRE-NPCEDRG重组载体为模板PCR扩增以及双酶切重组载体,分别产生530 bp和520 bp长度的片断,测序结果证实插入片段方向正确,序列与Genebank已知序列一致,NPCEDRG基因编码区成功插入pRevTRE载体。结论成功构建了受Tet系统调控NPCEDRG基因表达的pRevTRE-NPCEDRG真核诱导表达载体,为深入研究NPCEDRG基因功能和揭示鼻咽癌发病分子机制提供实验手段。; 阳帅贺修胜蒋俊豪唐雪芳冯学知陈主初; 关键词：聚合酶链反应鼻咽癌

MicroRNAs与肿瘤被引量：1: 2009年; microRNA(miRNA)是一类对基因具有调控功能的内源性非编码小分子RNA,通过与靶mRNA完全或不完全互补配对,引起mRNA降解或翻译抑制,从而对基因转录后水平进行调控。目前认为miRNA在多种生物学过程中起着至关重要的作用,包括细胞增殖、分化、凋亡等。研究显示miRNA的表达异常能导致疾病甚至肿瘤的发生,有类似于抑癌基因或癌基因的功能。本文就miRNA在肿瘤发生和诊断方面的研究进展作一综述。; 陈滔贺修胜; 关键词：肿瘤

定点突变三种方法的比较研究(英文)被引量：3: 2008年; 目的:通过使用优化后的定点突变三种方法分别对一个新基因重组载体进行定点突变研究,比较这几种定点突变方法的优缺点。方法:重叠延伸 PCR 法使用 Stratagene 在线定点突变引物设计程序从而使引物设计简化而可靠;M utaBEST 定点突变试剂盒采用胶纯化试剂盒代替说明书推荐的酚-氯仿抽提质粒的方法以提高回收率;使用 Prim eSTA R 高保真 D N A 聚合酶和超级感受态试剂盒代替 Q uikchange 定点突变试剂盒的相应组分可使产物不受影响同时降低试验费用。结果:三种方法都能够获得单碱基突变重组载体。结论:Q uikChange 突变策略通过改进是一种高效、简洁、经济和可靠的定点突变方法。; 蒋俊豪肖建忠阳帅冯学之唐雪芳贺修胜; 关键词：重叠延伸PCR 定点突变

Tet调控STGC3基因表达CNE2细胞系的建立及其功能初步研究被引量：12: 2006年; 利用Tet-on调控系统,建立受强力霉素诱导STGC3基因表达的CNE2细胞系,为进一步研究STGC3的功能提供了一个理想的实验平台.先后将调控质粒pTet-on和反应质粒pTRE-STGC3转染入CNE2细胞,并用G418和潮霉素分别进行两轮筛选,运用RT-PCR选择对强力霉素诱导敏感的细胞克隆.用不同浓度强力霉素诱导CNE2/Tet/pTRE-STGC3细胞,RT-PCR检测STGC3的表达,确定强力霉素的最佳诱导浓度.采用此浓度的强力霉素分别诱导CNE2、CNE2/Tet/pTRE、CNE2/Tet/pTRE-STGC3三组细胞,测定细胞的生长曲线、克隆形成率和细胞周期分布.诱导STGC3基因高表达,CNE2细胞增殖速度显著减慢(P<0.05),克隆形成能力显著降低(P<0.01);流式细胞仪检测结果显示,瘤细胞群体中处于G0/G1期细胞数增加,细胞阻滞于G0/G1期.Tet调控STGC3基因表达CNE2细胞系的成功建立,为进一步研究STGC3基因的功能提供一个理想的细胞模型.; 邓敏贺修胜罗桥赵帅曾超李艳兰; 关键词：鼻咽癌

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