国家自然科学基金(30860273)
- 作品数：20 被引量：38H指数：4
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- Cdx2基因过表达对胃癌细胞免疫相关基因表达的影响被引量：1
- 2010年
- 目的利用基因表达谱芯片技术筛选过表达Cdx2的胃癌MGC-803细胞与对照组间差异表达的免疫相关基因,探讨Cdx2对胃癌细胞免疫相关基因表达的影响。方法分别抽取Cdx2转染组和对照组的细胞总RNA,分离纯化mRNA并逆转录合成荧光分子(Cy3/Cy5)标记cDNA探针,与含有21522条人类22K基因表达谱芯片进行杂交。采用LuxScan10K/A双通道激光扫描仪扫描芯片上两种信号,应用LuxScan3.0图像分析软件对芯片图像进行处理和分析。结果在21522条基因中,胃癌细胞间差异性表达基因为有551条,其中302条上调,249条下调。其中与免疫相关的基因共有7个,分别为HLA-E、RRAS、ULBP2、HLA-G、HLA-C、CTSB、CTSL,均表达上调。结论Cdx2过表达上调了胃癌MGC-803细胞免疫相关基因的表达,这可能与胃癌细胞生物学行为的改变有关。
- 何震李雷谢玉波肖强
- 关键词：胃癌CDX2免疫相关基因差异表达基因
- E2F-1截短体的诱饵载体的构建及检测被引量：1
- 2011年
- 目的构建E2F-1截短体的诱饵载体,并进行自激活活性和诱饵蛋白毒性检测,为应用酵母双杂交系统筛选与E2F-1相互作用蛋白建立实验基础。方法设计引物,PCR扩增E2F-1截短体,引入酶切位点EcoRⅠ和BamHⅠ,将E2F-1截短体连接至载体pGBKT7中,将构建成功的诱饵表达载体pGBKT7-E2F-1截短体转化到酵母菌AH 109中,采用选择性培养皿和β-半乳糖苷酶分析等方法分析检测重组质粒的自激活活性和细胞毒性。结果成功扩增了E2F-1截短体,并连接至载体pGBKT7中,测序比对结果正确,成功转化到酵母菌AH 109中,经检测无自激活活性和细胞毒性。结论成功构建了E2F-1截短体的诱饵载体,经检测无自激活活性和细胞毒性,可应用于酵母双杂交系统筛选与E2F-1相互作用的蛋白。
- 孔凡彪王晓通谢玉波肖强
- 关键词：酵母双杂交自激活
- E2F-1过表达对胃癌细胞凋亡及相关基因表达的影响被引量：6
- 2009年
- 背景与目的:E2F-1(E2F transcription factor1)基因是细胞周期的重要转录因子,也参与了细胞凋亡的过程,但机制尚不明确。本研究通过观察E2F-1过表达对胃癌细胞MGC-803凋亡的影响及对下游基因的调控,初步探讨其参与凋亡的分子机理。方法:用流式细胞仪检测稳定转染E2F-1的胃癌MGC-803/E2F-1细胞(实验组)、转染空载体的MGC-803/EV(阴性对照组)及未转染的MGC-803细胞的凋亡情况。再分别抽取MGC-803/E2F-1和MGC-803细胞的总RNA,采用逆转录的方法,制成cDNA,并以两种荧光Cy5和Cy3标记后作为探针(荧光交换芯片),与含有21522条人类基因表达谱芯片进行杂交。采用LuxScan10K/A双通道激光扫描仪扫描芯片上两种荧光信号,应用LuxScan3.0图像分析软件对芯片图像进行处理和分析与凋亡相关的基因的表达,再用RT-PCR针对性的对筛选得到的基因进行验证。结果:MGC-803/E2F-1组细胞的凋亡率明显高于MGC-803/EV组和MGC-803组,3组凋亡率分别为(8.40±0.91)%、(4.53±0.61)%、(4.97±0.47)%;基因芯片扫描筛选出与凋亡相关的差异表达基因15条,其中上调基因4条,下调基因11条;RT-PCR验证多条相关基因其上、下调趋势同基因芯片结果一致。结论:E2F-1基因过表达促进了胃癌MGC-803细胞的凋亡,其影响机制可能与这15条差异表达基因有关系。
- 严林海李雷谢玉波肖强王长青
- 关键词：E2F-1基因表达谱芯片差异表达基因凋亡
- 应用酵母双杂交系统筛选E2F1相互作用蛋白
- 2012年
- 目的:应用酵母双杂交系统从人正常胃黏膜细胞的cDNA文库中筛选E2F1转录因子的相互作用蛋白。方法:以pGBKT7-E2F1为诱饵质粒筛选人正常胃黏膜细胞的cDNA文库,得到阳性克隆,反复验证,并对验证后的阳性克隆进行测序及同源性分析。结果:从人正常胃黏膜细胞的cDNA文库中筛选得到20个阳性克隆,经测序和同源性分析,筛除假阳性克隆,最终得到18个不同的候选基因序列。其中,17个为可知基因序列,它们分别是:组织蛋白酶B、SIVA1、干扰素调节因子7、鸟苷酸激酶1、ATP酶抑制因子1、核糖体蛋白SA、纤溶酶原激活物抑制剂1 mRNA结合蛋白、精氨琥珀酸合酶1、卵泡抑素类似物3、金属硫蛋白2A、内质网钙结合蛋白1、WNT1可诱导信号通路蛋白2、CDC42效应蛋白1、可溶性半乳糖凝集素结合蛋白1、中胚层发育候选2、外切酶体成分7和含EGF腓骨蛋白样胞外基质蛋白1,尚有一未知基因片段。结论:应用酵母双杂交系统成功筛选出18种E2F1相互作用蛋白,为进一步探讨E2F1影响胃癌细胞生物学行为的分子机制奠定了基础。
- 廉超王晓通谢玉波肖强
- 关键词：酵母双杂交系统胃肿癌相互作用蛋白
- E2F-1基因反转录病毒载体的构建及其对人胃癌细胞MGC-803增殖的影响被引量：1
- 2010年
- 目的:通过构建人同源基因E2F-1反转录病毒表达载体,观察E2F-1过表达对胃癌细胞MGC-803增殖的影响。方法:应用基因重组技术将E2F-1基因克隆到反转录病毒载体pLXSN中,并将经酶切和RT-PCR检测正确的重组载体转染PA317包装细胞,收集病毒上清液感染胃癌细胞MGC-803。应用RT-PCR和Western印迹法检测MGC-803/pLXSN-E2F-1细胞中E2F-1 mRNA和蛋白的表达情况。应用克隆形成实验和MTT法检测细胞的增殖情况。结果:经酶切和RT-PCR检测结果显示,成功构建E2F-1反转录病毒表达载体。与MGC-803和MGC-803/pLXSN组相比,MGC-803/pLXSN-E2F-1组E2F-1mRNA和蛋白的表达明显上调(P<0.05)。MGC-803/pLXSN-E2F-1组的克隆形成率为48%,明显低于MGC-803组的81%和MGC-803/pLXSN组的77%,差异有统计学意义(P<0.01)。MGC-803/pLXSN-E2F-1组的细胞增殖率明显慢于MGC-803组和MGC-803/pLXSN组(P<0.01)。结论:成功构建了E2F-1基因过表达的反转录病毒表达载体,并将其成功感染MGC-803细胞,E2F-1过表达可抑制MGC-803细胞的增殖。
- 钱倩李雷王晓通苑汐子谢玉波肖强
- 关键词：胃肿瘤反转录病毒科
- RNA干扰介导的转录因子E2F-1沉默对人胃癌裸鼠移植瘤生长的影响被引量：5
- 2011年
- 目的 观察转录因子E2F-1基因RNA干扰（RNAi）的重组慢病毒载体（pLL-E2F-1-shRNA）对人胃癌裸鼠移植瘤E2F-1基因的表达和肿瘤生长的影响.方法 建立人胃癌裸鼠移植瘤模型,随机分为pLL-E2F-1-shRNA组,pLL3.7组,生理盐水组.隔天向各组分别注射相应药物0.2 ml,共6次,并测量各组肿瘤体积.11 d后处死裸鼠,显微镜观察移植瘤组织形态变化;免疫组织化学法、半定量逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和Western blot检测移植瘤中E2F-1基因的表达,脱氧核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记（TUNEL）检测肿瘤细胞凋亡指数.结果 与生理盐水组和pLL3.7组比较,pLL-E2F-1-shRNA组肿瘤生长速度明显减慢（P＜0.05）;病理学观察确认所取组织为恶性肿瘤组织;免疫组织化学结果显示pLL3.7组和生理盐水组的肿瘤细胞细胞核内有少量棕褐色颗粒沉着,pLL-E2F-1-shRNA组肿瘤细胞细胞核内均未见或偶见棕褐色颗粒沉着;半定量RT-PCR和Western blot结果显示pLL-E2F-1-shRNA组E2F-1 mRNA表达较pLL3.7组和生理盐水组明显下降（P＜0.05）,E2F-1蛋白表达较pLL3.7组和生理盐水组减少75.2%和83.9%;pLL-E2F-1-shRNA组的凋亡指数（16.7±5.6）%明显高于pLL3.7组（10.5±4.1）%和生理盐水组（11.2±4.3）%（P＜0.05）.结论 慢病毒载体pLL-E2F-1-shRNA瘤内注射可抑制人胃癌裸鼠移植瘤的生长.
- 王晓通钱倩李雷谢玉波肖强
- 关键词：慢病毒载体RNA干扰E2F-1胃癌
- E2F-1基因沉默可增强人胃癌耐药细胞株SGC-7901/DDP对顺铂的敏感性被引量：4
- 2013年
- 目的探讨E2F转录因子1(E2F transcription factor 1,E2F-1)基因沉默对人胃癌耐药细胞株SGC-7901/DDP对顺铂敏感性的影响及可能机制。方法将SGC-7901/DDP细胞接种于六孔板,分为3组:以E2F-1沉默重组慢病毒颗粒(Lv-shRNA-E2F-1)感染SGC-7901/DDP,作为Lv-shRNA-E2F-1组;以阴性对照慢病毒颗粒(Lv-shRNA-NC)感染SGC-7901/DDP,作为Lv-shRNANC组;空白对照组不做任何处理。以MTT法测定转染后各组细胞对DDP的半数抑制浓度(IC50),并以AxnnexinV-PE/7-AAD双染色流式细胞术检测各组细胞凋亡率及周期分布。应用Western blot和半定量RT-PCR技术分别对各组细胞中E2F-1、survivin、Bcl-2的mRNA及蛋白水平进行检测。结果与Lv-shRNA-NC组和空白对照组相比,Lv-shRNA-E2F-1组细胞对顺铂的IC50显著降低,细胞凋亡率显著提高,细胞周期阻滞于G0/G1期,差别均有统计学意义(P<0.05);Lv-shRNA-E2F-1组E2F-1mRNA水平较Lv-shRNA-NC组和空白对照组分别下降45.0%和41.3%,蛋白水平分别下降66.7%和70.5%(均P<0.01);LvshRNA-E2F-1组survivin mRNA水平较Lv-shRNA-NC组和空白对照组分别下降30.3%和28.7%,蛋白水平分别下降56.5%和53.6%(均P<0.01);Lv-shRNA-E2F-1组Bcl-2 mRNA水平较Lv-shRNA-NC组和空白对照组分别下降76.6%和76.8%,蛋白水平分别下降74.6%和79.9%(均P<0.01);Lv-shRNA-NC组与空白对照组比较,上述指标差别均无统计学意义(均P>0.05)。结论:沉默E2F-1基因可有效提高人胃癌耐药细胞株SGC-7901/DDP对顺铂的敏感性,其机制可能与survivin及Bcl-2表达下调有关,提示E2F-1可能成为胃癌药物治疗的新靶点。
- 廉超杨杰王晓通谢玉波肖强
- 关键词：E2F-1胃癌CISPLATIN
- E2F-1过表达对胃癌细胞中癌基因和抑癌基因表达的影响
- 2009年
- 目的:了解E2F-1过表达对胃癌细胞中癌基因和抑癌基因表达的影响,探讨E2F-1影响胃癌细胞侵袭能力的作用机制。方法:从胃癌细胞MGC-803和MGC-803/E2F-1中提取总RNA,纯化mRNA,逆转录将Cy3和Cy5两种荧光素标记到两组逆转录合成的第一链cDNA。与22K人类基因组寡核苷酸芯片进行杂交,采用LuxScan 10K/A双通道激光扫描仪扫描芯片上两种荧光信号,应用LuxScan3.0图像分析软件对图像处理分析,筛选出差异基因。结果:在21522条基因中,MGC-803/E2F-1和MGC-803细胞差异表达的癌基因和抑癌基因有39条,其中上调基因19条(49%),下调基因20条(51%)。结论:过表达E2F-1在胃癌细胞MGC-803中影响了众多癌基因和抑癌基因的表达变化,表明胃癌侵袭能力的变化是多基因相互作用,多种信号传导途径相互影响的结果。
- 胡锦伟肖强谢玉波李雷王长青解乃昌
- 关键词：胃癌E2F-1基因芯片差异表达基因
- 小分子干扰RNA对胃癌MGC803细胞E2F-1表达及其生物学行为的影响被引量：3
- 2009年
- 目的观察小分子干扰RNA（siRNA）对胃癌MGC803细胞E2F-1基因表达及其生物学行为的影响。方法将实验组（E2F-1-siRNA）和阴性对照组（negative control-siRNA）转染进MGC803细胞，48h后采用实时定量聚合酶链反应（PCR）及Western blot技术分别检测E2F-1mRNA及蛋白的表达，噻唑蓝（M3T）比色法检测MGC803细胞增殖的变化，流式细胞仪检测MGC803细胞周期变化。结果E2F-1-siRNA有效抑制胃癌细胞E2F-1mRNA和蛋白的表达并且影响MGC803细胞的增殖，与阴性对照组及未转染组细胞比较mRNA降低了84．8％和85．3％（F=14．35，P〈0．05），蛋白降低了77．2％和79．6％，MGC803细胞增殖分别抑制了69．0％和81．6％，差异有统计学意义（F=170．18，P〈0．05）；同时E2F-1-siRNA促使更多MGC803细胞DNA含量聚集于G2／M期附近，G2／M期DNA含量比例为（54．98±3．46）％，与阴性对照组（44．70±3．82）％和未转染组（31．47±2．12）％比较，差异有统计学意义（F=88．90，P〈0．05）。结论E2F-1-siRNA可以有效抑制人胃癌MGC803细胞E2F-1 mRNA及蛋白的表达，使G1期细胞的DNA含量下调，细胞分裂停滞在G2／M期附近，抑制胃癌细胞的增殖。
- 尹永硕李雷谢玉波王长青唐振勇马玉林肖强
- 关键词：胃癌小分子干扰RNA细胞周期增殖
- E2F-1过表达对胃癌细胞生物学行为的影响被引量：1
- 2009年
- 目的探讨E2F-1对胃癌细胞生物学行为影响的分子机制。方法分别抽取转染E2F-1的胃癌MGC-803细胞和未转染E2F-1的胃癌MGC-803细胞的总RNA。纯化mRNA,逆转录合成cDNA标记后,与22K人类基因表达谱芯片进行杂交,扫描后筛选出表达差异的基因。随机选取3个差异表达基因,分别设计引物,用半定量RT-PCR检测验证。结果在21522条基因中,两组细胞间的差异表达基因有740条,其中上调基因405条,下调基因335条。差异基因中有73条功能信息不明。随机选取的3个差异表达基因的RT-PCR结果与基因芯片扫描结果相似,具有相同的方向性。结论胃癌的发生发展是多基因相互作用、多种信号通路相互调节的结果。生物信息学分析显示,E2F-1基因可以通过TP53信号传导途径影响胃癌MGC-803细胞生物学行为的改变,还与众多基因的差异性表达密切相关。
- 王晓通李雷肖强谢玉波王长青
- 关键词：胃癌E2F-1基因表达谱芯片差异表达基因
