河北省自然科学基金(C2011201027)
- 作品数：4 被引量：13H指数：2
- 相关作者：柳峰松郑立李娟唐婷郭亚伟更多>>
- 相关机构：河北大学更多>>
- 发文基金：河北省自然科学基金国家教育部博士点基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 硫氰酸生成酶样基因在家蝇高温和重金属镉应激中的作用被引量：1
- 2012年
- 硫氰酸生成酶同源结构域普遍存在于古细菌、真细菌以及真核生物的多种蛋白分子内,这些蛋白构成一个功能多样的硫氰酸生成酶超家族。本研究根据家蝇转录组序列信息,分拣到一条硫氰酸生成酶样基因的EST序列,经分析发现其编码蛋白C末端含有典型的硫氰酸生成酶同源结构域,属于硫氰酸生成酶超家族,将其命名为家蝇硫氰酸生成酶样基因(Md-Rhodlike)。应用实时定量RT-PCR技术,分析了Md-Rhodlike在热激、镉胁迫条件下的表达量变化。Md-Rhodlike的mRNA水平在高温和镉处理后上调,提示该基因可能参与家蝇对高温及镉金属等环境胁迫因子的耐受,是一种新的家蝇应激相关蛋白。
- 柳峰松李娟唐婷张迪董晓寅
- 关键词：家蝇热激重金属镉应激反应
- 中国明对虾CrusFc-2基因的重组表达及抗血清制备
- 2011年
- 利用PCR和DNA重组技术克隆了中国明对虾CrusFc-2基因的成熟肽编码序列并构建了pET-DsbA-CrusFc-2原核表达载体,转化E.coliBL21(DE3)后,经异丙基--βD硫代半乳糖苷(IPTG)诱导得到了重组蛋白.重组蛋白经纯化后免疫新西兰大白兔制备了抗血清,Western Blot分析表明CrusFc-2蛋白主要存在于对虾血细胞中.
- 柳峰松王晓菲李婷郑立谢松
- 关键词：中国明对虾原核表达抗血清
- 家蝇溶菌酶2基因的克隆及其性质研究被引量：10
- 2011年
- 溶菌酶(lysozyme)作为抗菌肽重要一员,在昆虫先天免疫系统中起着重要作用。本文通过家蝇EST序列筛选并结合RACE技术克隆了家蝇Musca domestica的lysozyme2基因(Md-lysozyme 2,MdL2)全长516bp的cDNA序列。MdL2包含429bp的开放阅读框,编码142个氨基酸残基,推导的氨基酸序列N端包括20个氨基酸残基的信号肽,成熟肽由122个氨基酸残基组成,理论分子量为13.89kD,理论等电点为6.45,有8个半胱氨酸组成4对分子内二硫键。实时荧光定量PCR结果显示大肠杆菌和金黄色葡萄球菌分别刺激后,家蝇幼虫体内MdL2基因的表达模式发生了非常相似的变化。在刺激3～12h表达下调,12～24h出现一个短暂的恢复,在刺激24h后表达又开始下调。不同组织定量PCR结果表明MdL2表达量在肠和血细胞中较高,而在表皮和脂肪体中较低。MdL2成熟肽编码序列被克隆入pET-DsbA表达载体,并转化大肠杆菌后得到高效表达。
- 郑立李娟郭亚伟柳峰松
- 关键词：家蝇基因克隆
- 家蝇Denfensin-1基因的克隆、诱导表达及启动子活性分析被引量：4
- 2013年
- 【目的】鉴定一种新的家蝇Musca domestica防御素基因,并分析其功能。【方法】从家蝇转录组数据库中鉴定了1条新的防御素基因cDNA序列,并将其命名为家蝇防御素1(Md-defensin-1)基因Mdde-1。利用生物信息学网站、软件预测其结构等信息。以实时荧光定量PCR技术研究该基因的表达模式,并且利用基因步移技术获得了启动子序列,同时采取细胞转染技术验证Mdde-1启动子活性。【结果】该序列包含一个276 bp的开放阅读框,编码91个氨基酸残基。推导的氨基酸序列N端包括1个23个氨基酸残基的信号肽和1个28个氨基酸残基的前肽。成熟肽由40个氨基酸残基组成,含有1个典型的CSαβ基序。实时荧光定量PCR结果显示,家蝇2龄幼虫受金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus(G+)刺激后Mdde-1表达明显上调,而大肠杆菌Escherichia coli(G-)刺激后表达下调;Mdde-1在家蝇幼虫受到热激时呈上调表达。为进一步研究其调控机制,克隆了Mdde-1启动子,并证明了该启动子具有活性。【结论】据此认为Mdde-1是一种新的家蝇防御素,并且在免疫革兰氏阳性菌方面发挥重要作用;同时我们首先证明了Mdde-1的启动子具有活性。本研究为进一步研究家蝇防御素的作用机制奠定了基础。
- 卢丹郑立王欣欣王凡唐婷柳峰松
- 关键词：家蝇先天免疫抗菌肽防御素启动子
