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水稻OsVDAC5真核表达载体的构建及在酵母中的表达研究: 2012年; [目的]构建水稻OsVDAC5的真核表达载体,对其进行真核表达研究。[方法]将Osvdac5基因与酵母表达载体pPIC3.5K连接,通过电转化的方法插入到毕氏酵母GS115中,筛选阳性重组菌株,通过0.5%的甲醇诱导使外源的水稻Osvdac5基因表达,并利用West-ern Blot鉴定表达蛋白的特异性。[结果]成功构建了Osvdac5::pPIC3.5K酵母表达载体,将其整合到酵母GS115基因组后,对其进行诱导表达,产物经Western Blot检测,证实了表达蛋白为OsVDAC5。[结论]该研究结果为进一步研究OsVDAC5蛋白的功能奠定了基础。; 熊杰程钢刘学群覃永华王春台; 关键词：水稻

水稻线粒体基因atp6超表达载体的构建及遗传转化: 2012年; [目的]克隆水稻线粒体基因atp6,构建转基因表达载体,获得35S∷Rf1b5'∷atp6转基因水稻植株。[方法]设计目的基因的特异引物,采用TRIzol法提取水稻叶片总RNA,借助Toyobo反转录试剂盒反转录为cDNA,通过PCR扩增得到atp6全序列;将atp6连接到含线粒体信号肽(Rf1b5')的pCAMBIA1302双元表达载体上,采用农杆菌介导的愈伤组织侵染法进行水稻的遗传转化。[结果]利用目的基因atp6成功构建了35S∷Rf1b5'∷atp6植物表达载体,并获得了转atp6基因的阳性植株。[结论]为探讨水稻中超表达atp6对水稻生长的影响奠定基础。; 熊磊谭艳平王春台刘学群; 关键词：水稻 ATP6

CRISPR/Cas9敲除恢复基因Rf6降低其近等基因系的育性: 2018年; 利用CRISPR/Cas9系统的特异性及定位编辑的特性对近等基因恢复系L-Rf6中的Rf6进行基因编辑,以验证恢复基因敲除后该近等基因系的育性是否降低。本研究利用CRISPR/Cas9系统对水稻恢复基因Rf6的序列构建了pC1300-Cas9-Rf6载体,通过农杆菌介导转化近等基因恢复系L-Rf6 (具有红莲型不育系的细胞质和保持系的细胞核背景),得到转基因阳性植株,完成转基因植株中的目的基因的序列分析和育性统计。结果表明,T0-Cas9-L-Rf6转基因的编辑率为79.17%。T0-Cas9-L-Rf6育性统计显示,T0-Cas9-L-Rf6的植株的花粉育性和小穗结实率均明显降低。本研究为进一步探究恢复基因对不育基因的作用机理提供了实验材料和新的研究途径。; 田泽李佳洋王春台刘学群谭艳平; 关键词：近等基因系水稻恢复基因

水稻胞质不育基因HL-sp1表达产物定位及互作蛋白的表达分析: 细胞质雄性不育（cytoplasmic male sterility,CMS）指的是在某些雌雄同体的被子植物中,雌性器官发育正常,而雄性器官发育异常,不能产生有活性雄配子的母性遗传现象。本实验室前期在红莲型细胞质雄性不育...; 喻博伦; 关键词：细胞质雄性不育 EF-TU 亚细胞定位; 文献传递

Construction of Eukaryotic Expression Vector of OsVDAC5 and Its Expression in Yeast: 2012年; [ Objective] This study aimed to construct the eukaryotie expression vector of OsVDAC5 from rice and investigate its expression in Pichia pastoris. [ Method] Osvdac5 gene was ligated to yeast expression vector pPIC3.5K and inserted into Pichia pastoris GSll5 with electroporation to obtain positive recombinant yeast strains. Osvdac5 gene was expressed in yeast after induced with 0.5% methanol, and the specificity of expressed protein was identified by western blotting. [ Result] Eukaryotic expression vector Osvdac5 ：： pPIC3.5K was successfully constructed and transformed into yeast GSll5 for the induced expression, and the ex pressed protein was detected by Western Blotting, which was identified as OsVDACS. [ Conclusion] This study laid the foundation for further investigating the functions of OsVDAC5 protein.; Jie XIONGGang CHENGXuequn LIUYonghua QINChuntai WANG; 关键词：RICE

水稻HL-CMS育性恢复蛋白的原核表达及纯化: 2015年; 将水稻目地基因Rf6连接到载体PMD-18T上,测序正确后将目的片段连接到含有GST标签的p GEX-6P-1原核表达载体上,确认正确的重组质粒转化到BL21菌株;通过LB培养至对数生长期后,加入IPTG进行诱导表达,经SDS-PAGE和Western Blot检测是否诱导出目的条带,并且经过Glutathione Resin亲和层析系统纯化及检测。结果表明,20℃,4 h,0.3 mmol/L IPTG条件下可诱导出可溶性蛋白,经纯化得到可溶性带GST标签的融合蛋白。; 傅静谭艳平刘学群王春台; 关键词：水稻原核表达

水稻HL-CMS细胞质雄性不育基因的体外转录及Northern Blot检测被引量：1: 2014年; [目的]通过基因克隆和体外转录技术获得水稻红莲型细胞质雄性不育(HL-CMS)不育系粤泰A(YTA)中的2个细胞质雄性不育基因orf216和orfH79的RNA,为Northern Blot检测提供阳性定量标准品,并可作为凝胶阻滞试验的底物,用于研究与恢复基因编码产物的相互作用,从而为阐释不育基因与恢复基因的相互作用分子机制奠定基础。[方法]以红莲型胞质雄性不育基因orf216和orfH79的特异引物,利用不育系YTA为材料,PCR扩增获得相应片段,分别连接至pGEM-T Easy质粒并筛选阳性重组质粒,测序鉴定后酶切线性化,补平粘性末端,以rN4为底物、用依赖于DNA的RNA聚合酶进行体外转录,转录产物用DNase处理除去DNA模板,纯化并测定RNA浓度,并用Northern Blot验证。[结果]获得了细胞质雄性不育基因orf216和orfH79各自的RNA,经检测orf216浓度为1.286μg/μl,A260/A280为2.01;orfH79浓度为1.006μg/μl,A260/A280为2.10。[结论]运用体外转录技术获得的RNA片段条带单一,纯度较高,可用于体外大量获取目的 RNA。; 华宇峰刘京王春台刘学群谭艳平; 关键词：水稻红莲型细胞质雄性不育体外转录 NORTHERN BLOT

水稻线粒体nad5基因超表达载体的构建和遗传转化被引量：1: 2012年; 以TRIzol法提取的水稻幼苗总RNA反转录的cDNA为模板,以重组PCR技术扩增得到nad5的ORF,构建含有线粒体信号肽Rf1b5'的nad5双元超表达载体pCAMBIA1305.1::35S::Rf1b5'::nad5,以农杆菌介导的愈伤组织侵染法进行水稻遗传转化。克隆得到的水稻nad5基因大小为2 013 bp,构建了携带线粒体信号肽Rf1b5'的nad5植物表达载体,并成功获得了超表达nad5基因的阳性植株。; 冷翔谭艳平王春台刘学群; 关键词：水稻

水稻核糖体蛋白基因OsRPL2的克隆、序列分析及表达载体构建: 2015年; 依据鉴定得到的水稻(Oryza sativa L.)核糖体蛋白质Os RPL2的序列设计了引物,从水稻叶片的c DNA中扩增得到目的片段。并对目的基因序列进行了测序鉴定和序列分析,同时在大肠杆菌中构建水稻核糖体蛋白质基因Os RPL2的原核表达载体p GEX-4T1-RPL2,转化入BL21(DE3)后利用IPTG诱导外源蛋白质表达并检测。结果表明,成功扩增出了水稻核糖体蛋白质基因Os RPL2的c DNA序列,大小为1 570 bp,其编码的蛋白质含有502个氨基酸。根据序列分析的结果,水稻Os RPL2基因与多个植物核糖体蛋白质L2基因具有较高的相似性,并且其编码的Os RPL2蛋白质具有2个与核糖体蛋白质功能相关的功能域。在此基础上,构建了具有p GEX-4T1-RPL2重组子,诱导表达后,纯化得到了带有GST标签的可溶性Os RPL2蛋白质。; 宋丹妮王春台刘学群谭艳平刘新琼程钢; 关键词：SATIVA

新型不育胞质在栽培稻中的分布与鉴定被引量：1: 2015年; 为了分析只含有不育基因orf216在栽培稻中的分布,鉴定具有新的细胞质雄性不育胞质类型的种质资源。选取栽培稻824个品系为研究对象,以细胞质雄性不育相关序列HL-Sp1的特异引物进行PCR扩增,初步筛选得到9个候选品系,利用细胞质雄性不育基因orf H79,orf216的特异引物进行PCR扩增完成进一步筛选,并用Southern杂交验证。结果表明,最终筛选出IR72892,IR43,IR73546 3个只含有不育基因orf216不含orf H79的新型细胞质雄性不育胞质类型的品系。通过分子标记辅助选择,已成功的从824个栽培稻种中筛选到新的具有细胞质雄性不育胞质类型的新品系,为后续不育系的培育和相关理论研究奠定基础。; 刘京刘杰喻博伦王春台刘学群谭艳平; 关键词：细胞质雄性不育栽培稻不育基因

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