国家自然科学基金(31170274)
- 作品数：12 被引量：53H指数：4
- 相关作者：董娟娥行冰玉刘连成党小琳张婧一更多>>
- 相关机构：西北农林科技大学中国人民解放军西安陆军学院中国林业科学研究院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家林业公益性行业科研专项国家科技部农业科技成果转化资金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 水杨酸对丹参培养细胞中迷迭香酸生物合成及其相关酶的影响被引量：19
- 2012年
- 迷迭香酸(RA)是丹参中一种重要的酚酸类次生代谢物。为探讨水杨酸(SA)诱导子对丹参悬浮培养细胞中RA的生物合成及其相关酶的影响,考察了SA诱导子和酪氨酸氨基转移酶(TAT)的竞争性抑制剂(AOPP)对RA合成积累量、苯丙氨酸解氨酶(PAL)和TAT活性的影响。发现在培养的第6天用浓度为6.25 mg/L的SA处理后,PAL活性在诱导后4 h出现高峰,为对照组水平的124%;RA的积累量在诱导后8 h出现峰值(5.914±0.296)mg/g。用浓度为0.1μmol/L的AOPP处理,6 h后AOPP对TAT活性影响较小(与对照组无显著差异),但明显抑制了PAL活性(为对照组水平的44%),且在PAL活性明显降低的同时RA的积累量显著减少(4.709±0.204)mg/g。进一步用0.1μmol/L AOPP和6.25 mg/L SA共处理,AOPP对PAL的抑制作用可得到一定程度的缓解,且RA的积累量较AOPP单独处理的高。表明SA可以诱导丹参悬浮培养细胞中RA积累量的增加,且在RA合成过程中PAL的限速作用比TAT明显。
- 焦蒙丽曹蓉蓉陈红艳郝文芳董娟娥
- 关键词：丹参水杨酸迷迭香酸苯丙氨酸解氨酶
- 甲基紫精对丹参培养细胞抗氧化防护系统的影响被引量：1
- 2014年
- 为了探讨甲基紫精(MV)对丹参(Salvia miltiorrhiza)体内抗氧化防护系统的影响及其生理机制。以MV为诱导剂,以敌草隆(DCMU)为抑制剂,考察了MV与DCMU处理后丹参悬浮培养细胞中H2O2、丙二醛、还原型谷胱甘肽的含量以及抗氧化防护酶(超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT))活性变化和同工酶的表达差异。结果表明,MV处理显著提高了丹参培养细胞内H2O2、丙二醛以及还原型谷胱甘肽含量;MV处理使CAT、POD活性增强,谱带颜色更亮,条带增加。DCMU处理显著抑制了MV诱导的H2O2、丙二醛、还原型谷胱甘肽含量的增加,抗氧化酶活性的升高和同工酶的表达。以上结果说明,MV可诱导丹参培养细胞叶绿体产生H2O2,H2O2激活了丹参培养细胞抗氧化防护系统以维持细胞正常的生理活动。
- 行冰玉朱楠张洪培杨喜玲董娟娥
- 关键词：叶绿体敌草隆聚丙烯酰胺凝胶电泳丹参
- 水杨酸诱发的丹参悬浮培养细胞内H2O2迸发与其培养基碱化的关系被引量：1
- 2015年
- 水杨酸(salicylic acid,SA)处理可诱导丹参悬浮培养细胞内H2O2产生及其培养基碱化。利用NADPH氧化酶抑制剂咪唑(imidazole,IMD)、H2O2淬灭剂二甲基硫脲(dimethylthiourea,DMTU)、质膜H+-ATPase抑制剂钒酸钠(Na3VO4)及激活剂壳梭孢菌素(fusicoccin,FC)处理丹参悬浮培养细胞,探讨SA诱导的H2O2迸发与培养基碱化之间的关系。结果表明,H2O2可促发培养基碱化,IMD和DMTU抑制SA诱发的培养基碱化,说明H2O2参与SA诱发的培养基碱化过程;SA抑制质膜H+-ATPase活性,Na3VO4引发培养基碱化并使H2O2迸发时间提前,FC处理逆转了SA诱导的培养基碱化及H2O2迸发,说明质膜H+-ATPase调控培养基pH值变化,培养基碱化促进了H2O2产生。因此,丹参悬浮培养细胞内H2O2水平与其培养基碱化程度之间相互关联、共同作用,协同响应SA的诱导。
- 张洪培张晓茹胡格格董娟娥
- 关键词：H2O2水杨酸丹参
- 茉莉酸甲酯对丹参培养细胞中迷迭香酸生物合成及相关酶活性的影响被引量：7
- 2013年
- 茉莉酸甲酯是植物细胞响应外界刺激产生的重要信号分子,与植物次生代谢物的生物合成有关。本研究考察了茉莉酸甲酯(methyl jasmonate,MeJA)对丹参培养细胞中迷迭香酸(rosmarinic acid,RA)生物合成的影响。结果显示,10μmol·L-1的MeJA诱导24 h后可显著提高丹参愈伤细胞中RA的积累量及其相关酶(PAL、TAT)的活性,在48 h时RA积累量和酶活性达到最大。布洛芬(IBU)处理可抑制MeJA对RA积累量和相关酶活性的促进作用,外源施加MeJA可部分解除IBU对RA合成及其相关酶活性的抑制作用。说明MeJA可以显著促进丹参培养细胞中RA的生物合成,IBU抑制了MeJA合成、PAL和TAT活性,从而导致了RA合成受阻。
- 行冰玉党小琳张婧一汪波陈子逸董娟娥
- 关键词：丹参茉莉酸甲酯迷迭香酸苯丙氨酸解氨酶
- Ca^(2+)对水杨酸诱发的丹参幼苗丹酚酸B生物合成的影响被引量：3
- 2013年
- 为研究Ca2+在水杨酸诱导丹参幼苗丹酚酸B生物合成过程中的作用,分别用激光共聚焦显微镜和高效液相色谱仪检测胞外Ca2+通道抑制剂Vp和LaCl3,胞内Ca2+通道抑制剂LiCl以及胞内钙调素拮抗剂TFP处理前、后水杨酸诱导丹参叶片保卫细胞内Ca2+荧光强度和丹酚酸B含量的变化。结果表明,水杨酸(SA)处理后6 min即可诱发丹参幼苗叶片保卫细胞内Ca2+迸发,持续时间为2~3 min,丹参幼苗丹酚酸B生物合成量亦显著增加,且丹酚酸B合成量的增加发生在Ca2+迸发之后。胞外Ca2+通道抑制剂、胞内Ca2+通道抑制剂以及胞内钙调素拮抗剂均可抑制水杨酸诱导的Ca2+迸发和丹酚酸B的生物合成。结果表明水杨酸诱发的Ca2+对丹参幼苗丹酚酸B生物合成具有重要的调控作用。
- 曹蓉蓉行冰玉党小琳姚雅琴刘连成董娟娥
- 关键词：丹参水杨酸丹酚酸B
- 楸树叶中抗氧化活性成分的分离和鉴定被引量：2
- 2014年
- 前期研究发现,楸树叶粗提物的乙酸乙酯萃取相具有较强的抗氧化活性。为了进一步明确其抗氧化活性成分,以硅胶柱色谱结合清除DPPH自由基法,寻找抗氧化能力较强的组分,并利用半制备液相色谱对该组分进行分离、纯化,以清除DPPH自由基、还原力和清除ABTS自由基能力作为考察指标,根据理化性质及光谱数据鉴定化合物。结果从楸树叶粗提物的乙酸乙酯萃取相中分离得到了2个化合物,分别为木犀草素(1)和芹菜素(2)。化合物1的抗氧化活性强于BHT和化合物2;化合物1清除DPPH自由基、还原力及清除ABTS自由基的IC50值分别为23.89,29.77和43.47μg!mL-1;化合物1的抗氧化活性强于化合物2,主要因其在黄酮类化合物母核的B环上具有邻二酚羟基结构。木犀草素和芹菜素2个化合物首次从楸树叶中分离得到。
- 徐洪宇张晓茹王军辉黄晓华雷鸣董娟娥尉芹
- 关键词：楸树抗氧化木犀草素芹菜素
- Ca^(2+)在水杨酸诱发的丹参培养细胞培养基碱化过程中的作用被引量：4
- 2013年
- 利用质膜钙离子通道抑制剂LaCl3、异搏定(Verapamil,VP),钙离子载体A23187,内膜系统钙离子通道抑制剂2-APB和LiCl处理,研究水杨酸(SA)诱发的丹参培养细胞内Ca2+迸发在培养基碱化过程中的作用。结果显示:SA处理诱发丹参培养细胞培养基碱化,质膜钙离子通道抑制剂LaCl3和VP、内膜系统钙离子通道抑制剂2-APB和LiCl单独处理均可显著抑制SA处理诱发的培养基碱化过程,但质膜钙离子通道抑制剂对SA处理诱发的培养基碱化的抑制作用要显著强于内膜系统钙离子通道抑制剂;当两类钙离子通道抑制剂同时使用,培养基碱化过程被完全抑制,甚至培养基出现酸化趋势;钙离子载体A23187可以显著促进培养基碱化过程。以上结果说明,由水杨酸诱发的胞外Ca2+内流与胞内钙库Ca2+释放均参与了丹参培养基碱化的诱导过程,但胞外Ca2+内流的作用更重要。本研究揭示了SA诱发的Ca2+与丹参细胞培养基碱化之间的关系,为更深层次地阐明植物次生代谢调控机制提供理论基础。
- 刘连成王聪董娟娥苏慧卓泽群薛雅馨
- 关键词：水杨酸CA2+
- Ca^(2+)对丹参培养细胞中迷迭香酸合成及其相关酶活性的影响被引量：10
- 2012年
- 探究了外界Ca2+(0~50 mmol/L)对丹参培养细胞迷迭香酸合成及其相关酶活性的影响,并利用细胞膜钙离子通道抑制剂异搏定(Verpamil,VP)及钙离子载体A23187初步探讨了外界Ca2+浓度变化影响丹参培养细胞次生代谢的机制。结果显示:培养6 d时的丹参细胞中迷迭香酸积累量与外界Ca2+浓度显著相关,其中10 mmol/L Ca2+最有利于迷迭香酸的合成,迷迭香酸最大积累量达20.149 mg/g DW,比1 mmol/L和3 mmol/LCa2+处理分别高37.3%和20.4%。分析迷迭香酸合成的两条支路上的关键酶PAL和TAT活性变化发现,两种酶活性亦受外界Ca2+浓度影响,且活性变化先于迷迭香酸的积累,说明这两种酶均参与迷迭香酸的生物合成,但PAL比TAT促进作用更明显。进一步用VP和A23187处理发现,外界Ca2+影响迷迭香酸的合成是通过影响胞内Ca2+浓度实现的,胞外Ca2+内流可能参与了这一过程。
- 刘连成董娟娥张婧一党小琳行冰玉杨喜玲
- 关键词：丹参迷迭香酸苯丙氨酸解氨酶
- 丹参悬浮培养细胞原生质体的制备和活力检测被引量：4
- 2014年
- 对丹参悬浮培养细胞原生质体制备条件进行了研究,并利用FDA染色和钙离子荧光探针Fluo-3/AM装载对制备得到的原生质体的活力和功能进行了检测。丹参悬浮培养细胞原生质体的制备条件为:悬浮培养细胞酶解的适宜酶液组合为纤维素酶1.5%、果胶酶0.3%和离析酶0.5%;适宜的甘露醇浓度为0.4 mol/L;酶解时间为12 h;在600 r/min转速下离心5 min收集,纯化得到原生质体,其产量为1.1×106/g FW,FDA检测显示其活力为95%以上,荧光探针Fluo-3/AM可成功装载到原生质体中。
- 朱楠刘俊张馨宇董娟娥
- 关键词：丹参原生质体激光共聚焦FDA
- 胞内、外Ca^(2+)在水杨酸诱导丹参幼苗迷迭香酸生物合成过程中的作用被引量：3
- 2013年
- 目的:为探讨胞内、外钙离子是否在水杨酸诱导丹参迷迭香酸生物合成中起作用。方法:以生长50 d的丹参幼苗为材料,通过喷施水杨酸诱导迷迭香酸合成量增加,再利用胞外钙通道抑制剂verapamil(Vp)和LaCl3、胞内钙调素拮抗剂trifluoperazine(TFP)和胞内钙通道上IP3受体抑制剂LiCl处理,分别考察水杨酸、钙离子通道抑制剂/钙调素拮抗剂处理后迷迭香酸的合成量及其合成相关酶(PAL,TAT)的活性变化。结果:2.0 mmol·L-1的水杨酸处理24 h后可诱导迷迭香酸合成量升高到(40.51±2.16)mg·g-1,是对照的1.97倍,迷迭香酸合成相关酶PAL活性升高到对照的1.42倍,TAT活性升高到对照的1.29倍;Vp,LaCl3,TFP,LiCl处理均抑制了水杨酸诱导的PAL,TAT活性的升高,从而导致了迷迭香酸合成量降低。结论:水杨酸诱导丹参迷迭香酸生物合成过程中,胞内、外钙离子发挥着重要的信号转导作用。
- 曹蓉蓉党小琳行冰玉张婧一董娟娥
- 关键词：丹参水杨酸迷迭香酸钙调素拮抗剂
