国家自然科学基金(30860240)
- 作品数：10 被引量：14H指数：2
- 相关作者：裘雪梅刘仁荣徐玲朱立鑫陈兴龙更多>>
- 相关机构：江西科技师范学院南昌大学江西科技师范大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江西省自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学轻工技术与工程农业科学更多>>
- 噬菌体展示系统表达玉米赤霉烯酮模拟表位肽
- 2013年
- 拟用pⅧ噬菌体展示系统表达玉米赤霉烯酮(Zearalenone,ZEN)模拟表位肽,并验证其反应原性。通过将含有ZEN模拟表位序列以及肠激酶酶切位点的寡聚核苷酸与经过EcoR I和BamH I双酶切的pC89S4噬菌粒连接,构建表达载体pC89-CZEN。pC89-CZEN转化感受态XL1-Blue得到工程菌pC89-ek-zen,然后用KM13超感染、IPTG诱导表达,纯化后得到展示有玉米赤霉烯酮模拟表位的噬菌体颗粒。对KM13超感染时菌体浓度OD600、IPTG诱导时菌体浓度OD600、IPTG加入量以及诱导表达温度和时间进行优化,以探索最佳表达条件;通过ELISA测定反应原性,对比肠激酶酶切前后模拟表位肽与ZEN抗体的结合效果。结果显示,成功构建了表达载体pC89-CZEN,最优表达条件为KM13超感染时菌体浓度OD600为0.4、IPTG诱导时菌体浓度OD600为0.6以及IPTG加入量为终浓度1.0 mmol/L、诱导表达温度为24℃、时间8 h,酶切后结合效果明显高于酶切前。
- 徐富勇徐玲刘仁荣裘雪梅朱立鑫
- 关键词：玉米赤霉烯酮模拟表位肠激酶
- 基于赭曲霉毒素A模拟表位的无毒素ELISA方法被引量：7
- 2010年
- 以抗赭曲霉毒素A的单克隆抗体亲和筛选随机7肽库,ELISA方法鉴定阳性克隆,DNA测序推导出赭曲霉毒素A的模拟表位肽,共获得了11个模拟表位肽,共有序列为IRPMV。将化学合成的模拟表位肽与载体BSA偶联后,以之建立无毒素的竞争酶联免疫检测方法,并与常规酶联免疫吸附检测方法及高效液相色谱比较。结果表明:以赭曲霉毒素A模拟表位建立的竞争ELISA方法的线性范围和检测下限都与常规竞争ELISA方法结果相近,样品测试结果与常规竞争ELISA方法及高效液相色谱一致,显示良好的应用前景。
- 刘仁荣徐玲裘雪梅陈兴龙朱立鑫
- 关键词：噬菌体展示肽库赭曲霉毒素A
- 基于高分三号卫星数据与Η/Α/■分解特征参数的农作物分类研究被引量：1
- 2022年
- 利用高分三号(GF-3)卫星的全极化C波段多极化合成孔径雷达数据,基于Η/Α/极化分解提取香农熵(SE)及其强度分量(SE_(I))和极化分量(SE_(P))、单次反射特征值相对差异度(SERD)、二次反射特征值相对差异度(DERD)、极化比(PF)、基准高度(PH)、极化不对称性(PA)和雷达植被指数(RVI)共9个特征参数,将其应用于农作物分类研究中,以支持向量机(SVM)和随机森林(RF)算法为例,初步探索了基于Η/Α/分解提取的这9个特征参数在GF-3数据支持下的农作物分类潜力。结果显示:单独将SERD、PH、PF、RVI和SE_(P)参数用于2种分类方法时,分类精度较高,在82%~92%;但单独运用PA、DERD、SE和SE_(I)的分类精度均低于80%。将分类精度较低的4个参数组合后,分类精度明显提高,在SVM和RF下的总体分类精度分别达到93.02%和92.05%,Kappa系数均大于0.8。结果表明,基于全极化GF-3数据和Η/Α/极化分解方法提取的9个特征参数,能很好地表征农作物的散射特征,可用于农作物分类研究。
- 赵丽仙张王菲李云张庭苇黄国然
- 基于噬菌体展示技术的赭曲霉毒素A高密度模拟表位的表达研究被引量：2
- 2012年
- 通过噬菌体展示技术展示赭曲霉毒素A(ochratoxin A,OTA)模拟表位。将带有OTA模拟表位序列的寡核苷酸双链克隆至载体pC89-COTA。利用噬菌体展示技术,通过优化辅助噬菌体感染复数、IPTG加入的时间与剂量等培养条件获得表达有高密度OTA模拟表位的噬菌体。再通过酶联免疫吸附检测(ELISA)方法比较不同的条件下的表达效果,探索最优表达条件。结果表明:成功获得高密度表达OTA模拟表位的噬菌体,辅助噬菌体感染复数与IPTG加入量对模拟表位表达量影响不大,IPTG加入时间对模拟表位表达量有较大影响,优化后模拟表位表达量大大高于优化前。
- 陈兴龙徐玲刘仁荣裘雪梅朱立鑫
- 关键词：噬菌体展示赭曲霉毒素A
- 次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶缺陷型产抗苏丹红Ⅰ单克隆抗体杂交瘤细胞的筛选被引量：1
- 2012年
- 目的筛选次黄嘌呤-氨基喋呤-胸腺嘧啶(HAT)敏感型产抗苏丹红Ⅰ单克隆抗体杂交瘤细胞株,为双特异性抗体的制备作好准备。方法在培养瓶中培养产抗苏丹红I单克隆抗体杂交瘤细胞株H6,取长到对数生长期的细胞,加入1.25μg/ml的8-氮鸟嘌呤,继续培养,当细胞长到60%左右时,弃去一部分细胞,加入2.5μg/ml的8-氮鸟嘌呤,继续培养,重复以上操作,倍比提高8-氮鸟嘌呤的含量,直至8-氮鸟嘌呤浓度达到20μg/ml,取细胞上清ELISA检测其产抗体情况。结果成功诱导筛选到HAT敏感的次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(HGPRT)缺陷型杂交瘤细胞6株,均能分泌抗苏丹红Ⅰ单克隆抗体。结论该方法能成功筛选HAT敏感型抗苏丹红Ⅰ单克隆抗体杂交瘤细胞。
- 裘雪梅刘仁荣徐玲朱立鑫
- 关键词：杂交瘤
- 蒜氨酸酶基因水平研究进展被引量：1
- 2012年
- 蒜氨酸酶又叫半胱氨酸亚砜裂解酶,能将蒜氨酸催化成蒜素,后者具有抗血小板聚集、调节血压、降血糖、降胆固醇、抗细菌、抗病毒、抗真菌、抗寄生虫、增强免疫力、抗肿瘤和抗氧化等药理学功能。该文从基因水平角度,综述了蒜氨酸酶在不同葱属植物中的基因研究情况,归纳了NCBI核酸数据库中检索到的九种植物中32条蒜氨酸酶核酸序列,并具体介绍了洋葱鳞茎蒜氨酸酶基因;综述了蒜氨酸酶基因研究方法发展历程以及蒜氨酸酶基因重组与表达的研究进展。
- 徐玲裘雪梅刘新平刘仁荣
- 关键词：蒜氨酸酶基因葱属
- 丝状噬菌体pⅧ展示系统表达赭曲霉毒素A模拟表位及应用研究被引量：1
- 2012年
- 目的传统赭曲霉毒素A(OTA)竞争抗原毒性强、成本高、制备难度大。将OTA模拟表位展示于丝状噬菌体pⅧ表面,获得无毒、易于制备的OTA竞争抗原替代物。方法构建带有OTA模拟表位的重组噬菌粒pC89-COTA,为了提高OTA模拟表位与抗体的结合率,在OTA模拟表位序列5'端引入了肠激酶酶切位点。噬菌粒转化进大肠杆菌XL1-blue后再经野生KM13噬菌体感染,获得带有OTA模拟表位的重组噬菌体。用该噬菌体代替竞争抗原建立OTA的无毒ELISA分析方法。结果成功表达出带有OTA模拟表位的重组噬菌体,经肠激酶酶切的OTA模拟表位噬菌体与OTA抗体的结合效率显著高于未酶切的噬菌体。利用酶切后的噬菌体建立OTA的无毒ELISA分析方法,其最低检出限为100pg/ml,线性范围为250pg/ml～1000pg/ml。进行加标回收实验,回收率为99.8%～112.3%,相对标准偏差为8.19%～11.64%,测试16份市售样品,阳性率为31.25%。结论成功表达了OTA模拟表位噬菌体,建立了OTA的无毒ELISA检测方法。
- 陈兴龙徐玲刘仁荣裘雪梅朱立鑫
- 关键词：噬菌体展示赭曲霉毒素A酶联免疫吸附测定
- 黄曲霉毒素B_1抗原模拟表位高效表达
- 2013年
- 目的构建黄曲霉毒素B1(AFB1)模拟表位pⅧ噬菌体展示载体,为建立无毒害免疫学检测方法提供依据。方法构建呈现AFB1抗原模拟表位的噬菌体载体,并引入肠激酶酶切位点,诱导表达,肠激酶处理重组噬菌体颗粒,酶联免疫吸附法鉴定反应原性。结果重组质粒酶切谱、PCR扩增结果及测序结果均与设计一致,在pC89载体中插入了GACGACGACGACAAGCATCCTAGTGATCCGCGTCATGGG序列,肠激酶处理后的重组噬菌体颗粒可与AFB1抗体特异性结合,吸光度(A)值可达2.112。结论成功构建了包含肠激酶酶切位点的AFB1抗原模拟表位pⅧ噬菌体表达载体,重组噬菌体颗粒经初步表达有一定反应原性。
- 徐玲黄凤丹彭思璐刘仁荣裘雪梅陈兴龙
- 关键词：模拟表位肠激酶
- 辣椒粉中苏丹红Ⅰ的免疫亲和柱-高效液相色谱法检测被引量：1
- 2013年
- 目的建立用免疫亲和柱分离净化、高效液相色谱法测定食品中苏丹红I的方法。方法将制备好的苏丹红Ⅰ单克隆抗体与经修饰的琼脂糖凝胶Sepharose-4FF偶联,制成苏丹红Ⅰ免疫亲和柱,样品经乙腈提取,并用PBS缓冲液稀释成20%乙腈-PBS溶液后,过实验室自制的苏丹红Ⅰ免疫亲和柱净化,建立IAC-HPLC法检测苏丹红Ⅰ含量。结果测得辣椒粉中SudanI的回收率为29.12%～90.32%,并随机抽检了市售的及自种的四种辣椒粉,检测结果均为阴性。结论成功制备了苏丹红Ⅰ免疫亲和柱,并建立了免疫亲和柱-HPLC法测定辣椒粉中的苏丹红I的方法。
- 裘雪梅朱立鑫徐玲徐富勇刘仁荣
- 关键词：免疫亲和柱高效液相色谱
- An indirect competitive ELISA for ochratoxin A set up with a recombinant phage M13 displaying mimotope on gene Ⅷ protein
- 为了建立无毒素的赭曲霉毒素A酶联免疫吸附检测（competitive enzyme-1inked immunosorbent assay,ELISA）方法,本文通过噬菌体随机展示肽库技术,筛选到11株赭曲霉毒素A的模拟表...
- Renrong Liu~(a*)
- 关键词：酶联免疫吸附分析模拟表位噬菌体展示
- 文献传递
