国家自然科学基金(30470787)
- 作品数：4 被引量：4H指数：1
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- 高胆固醇对兔oddi括约肌BK通道β1亚基蛋白表达的影响被引量：3
- 2006年
- 目的:研究高胆固醇作用下兔oddi括约肌(SO)钙依赖性钾通道β1亚基蛋白水平的变化。方法:制备鼠抗兔SO细胞钙依赖性钾通道β1亚基抗血清,进行免疫组化染色,观察高胆固醇对oddi括约肌钙依赖性钾通道β1亚基蛋白表达的影响。结果:免疫组化染色显示,高胆固醇组SO细胞钙依赖性钾通道β1亚基的蛋白表达降低,半定量分析显示,高胆固醇兔oddi括约肌BKca通道β1亚基蛋白表达水平与对照组比较有统计学意义。结论:高胆固醇可下调兔oddi括约肌BKca通道β1亚基蛋白表达的水平,从而影响BKca通道的功能。
- 杜滂魏经国崔光彬王亚蓉张孝勇马克军
- 关键词：胆固醇Β1亚基ODDI括约肌
- 兔Oddi氏括约肌细胞BK通道Alpha亚基在Pichia酵母中的高效表达、纯化和鉴定
- 2005年
- 目的用巴斯德毕赤酵母系统表达兔Oddi氏括约肌(SO)细胞BK通道α亚基,并进行纯化和鉴定。方法采用RTPCR扩增编码兔SO细胞BK通道α亚基B细胞表位区基因的cDNA,经测序正确将其克隆入酵母表达载体pPIC9K,以电穿孔法转化酵母GS115。经MD平板筛选重组子、G418筛选鉴定后,甲醇诱导表达,镍离子亲合层析法对表达上清进行纯化,进行SDSPAGE和免疫印迹分析。结果用RTPCR扩增出约1497bp的兔SO细胞BK通道α亚基基因的cDNA。序列分析显示,扩增序列与已发布的新西兰大白兔骨骼肌BK通道α亚基的cDNA序列完全一致。SDSPAGE显示本系统表达的α亚基融合蛋白Mr约为55000,表达量约为55mg/L,纯度为96%。Westernblot检测证明,该α亚基融合蛋白可与兔BK通道α亚基多克隆抗体特异性结合。结论克隆了编码兔SO细胞BK通道α亚基B细胞表位区基因的cDNA,并在毕赤酵母中成功地表达了该蛋白,为进一步研究BK通道提供了物质基础。
- 王亚蓉魏经国樊建勇沈柱王秦芳张孝勇
- 关键词：分泌表达
- 兔大电导钙敏感性钾离子通道β亚基的克隆及生物信息学分析被引量：1
- 2007年
- 目的:克隆新西兰白兔大电导钙敏感性钾离子通道(BKCa)β亚基基因,观察其组织分布,并对其进行生物信息学分析.方法:采用3′及5′cDNA末端快速扩增(RACE)及RT-PCR技术从兔Oddi括约肌(SO)组织获得BKCa通道β亚基的全长cDNA序列.并应用生物信息学方法分析该基因的同源性、蛋白结构域及跨膜拓扑结构.结果:兔BKCa通道β亚基基因cDNA全长为1168bp,开放读窗长度为576bp,编码191个氨基酸.生物信息学分析表明该基因核酸序列及氨基酸序列与人类及其它哺乳动物有很高的同源性;拓扑结构为两次跨膜蛋白,具有4个功能结构域,含有1个磷酸化位点及2个N-糖基化位点.结论:首次成功地从兔SO组织克隆出BKCa通道β亚基基因,获得新GenBank号DQ821756,为进一步研究该基因的功能奠定了基础.
- 张孝勇崔光彬杜滂马克军王亚蓉韩苇颜真张英起魏经国
- 关键词：CDNA末端快速扩增ODDI括约肌生物信息学
