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国家教育部博士点基金(2006533034)
作品数:
1
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2008
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表达HIV Vpr细胞株的建立及其促细胞凋亡作用的研究
被引量:5
2008年
目的建立稳定表达人免疫缺陷病毒(HIV)Vpr蛋白的细胞株,观察Vpr蛋白促进感染细胞凋亡的特性,以及Vpr变异后对其致凋亡作用的影响。方法以携带野生株HIV vpr基因和突变株HIV vpr—FS基因的质粒分别转染HeLa细胞,建立稳定表达HIV Vpr蛋白的细胞株,以流式细胞仪和细胞内DNA片段分析法检测细胞凋亡效果,观察Vpr蛋白促细胞凋亡的特性,以及两者致凋亡作用的区别。结果重组质粒pcDNA3.1-vpr和pcDNA3.1-vpr-FS经酶切后均可获得342bp产物,DNA测序结果与目的基因已知序列完全一致;上述质粒转染的HeLa细胞,RT-PCR检测到目的基因vpr或vpr-FS的表达,Western blot检测到明显Vpr或Vpr—FS蛋白的表达。流式细胞仪和细胞内DNA片段分析法分别检测细胞凋亡,显示野生株HeLa pcDNA3.1-vpr组的凋亡率明显高于对照组,而变异株HeLa pcDNA3.1-vpr-FS的凋亡率与对照组无明显差别。结论成功建立了表达HIV Vpr和HIV Vpr—FS蛋白的感染细胞株。实验显示HIV Vpr蛋白能促进感染细胞的凋亡,而Vpr蛋白的变异可能使其促进细胞凋亡作用减弱。实验结果为下一步研究提供了基础资料。
丁佩佩
郑煜煌
龚国忠
谌资
周华英
张春迎
刘猛
刘纯
袁宏丽
李瑛
李慧
关键词:
人免疫缺陷病毒
VPR基因
凋亡
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